馬文俊 李寶文 賈 明 東知多杰

(青海阿如拉藏醫(yī)藥研究開發(fā)有限公司，青海 西寧 810003)

本項(xiàng)目主要目標(biāo)是研制一種治療和預(yù)防由氣滯血瘀所引起的疾病的藏藥新產(chǎn)品愈心安神滴丸，其核心研究?jī)?nèi)容主要是藥物的功效、安全性以及制劑的劑型。制備關(guān)鍵工藝技術(shù)主要是原藥材的加工炮制技術(shù)、揮發(fā)油提取工藝技術(shù)、揮發(fā)油包合工藝技術(shù)及滴丸的成型工藝技術(shù);確定生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性、可操作性及質(zhì)量控制要求。

1 材料、設(shè)備

1.1 處方組成:廣棗3000g，當(dāng)歸150g，干姜150g，肉豆蔻150g，訶子 150g，寒水石 150g。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和檢驗(yàn)儀器:磁力攪拌器、高速粉碎機(jī)、滴丸機(jī)。

1.3 制法概述:以上六味，除寒水石外，其余藥材提取揮發(fā)油，用β－環(huán)糊精包合，備用;藥渣加水煎煮三次，濾過，合并濾液，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.26～1.28(50℃)的清膏，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪勻，靜置24h，取上清液，回收乙醇，濃縮干燥，粉碎并過100目篩，備用;寒水石研細(xì)并過200目篩。取聚乙二醇4000與聚乙二醇6000適量，加熱使溶融，加入上述揮發(fā)油包合物、稠膏和寒水石細(xì)粉，混勻，滴入冷卻的液體石蠟中，制成1000g滴丸，即得。

1.4 工藝路線設(shè)計(jì)［1－2］

1.4.1 處方中主要有廣棗、當(dāng)歸、干姜、肉豆蔻、訶子和寒水石六味藥材，鑒于其中許多藥材含有揮發(fā)油，因此需要先提取揮發(fā)油，采用直接水浸泡后煮沸提取，冷凝收取揮發(fā)油。

1.4.2 方中寒水石為礦物類藥材，配方時(shí)需要進(jìn)行奶制，主要成分為碳酸及硫酸鈣，在水中基本不溶，不宜采用提取方法。因此選擇粉碎處理后直接加入滴丸成型過程的方法;其余均為植物性藥材的果實(shí)類和根類，適合用提取的方法。

1.4.3 因原方為口服散劑，療效確定，所以提取方法采用水煮提，水提取后的提取物中有比較多的雜質(zhì)(多糖、鞣質(zhì)等)，因此提取濃縮后應(yīng)進(jìn)行乙醇精制處理，以改善外觀和減少基質(zhì)用量，達(dá)到外觀適當(dāng)和減少用量的目的。

1.4.4 揮發(fā)油處理:由于滴丸制備時(shí)需要在比較高的溫度下進(jìn)行，直接加入時(shí)揮發(fā)性成分容易損失，所以應(yīng)采用保護(hù)技術(shù)，設(shè)計(jì)采用β－環(huán)糊精包合方式，在成型時(shí)以固體粉末形式和不提取的寒水石一起直接加入滴丸成型環(huán)節(jié)。

1.4.5 根據(jù)資料檢索得知，聚乙二醇是水溶性人體不吸收的常用基質(zhì)，是目前在制劑中使用比較多的滴丸基質(zhì)，初步選擇聚乙二醇(PEG)為首選基質(zhì)。資料表明采用PEG4000和PEG6000加工的滴丸比較理想，本試驗(yàn)同樣選擇上述基質(zhì)進(jìn)行研究，具體配合比例及用量通過實(shí)驗(yàn)確定。

1.5 愈心安神滴丸工藝流程圖:

2 關(guān)鍵工藝技術(shù)實(shí)驗(yàn)研究方法

2.1 劑型選擇:愈心安神滴丸是在尚未完全了解組方有效成分前提下開展的科研項(xiàng)目，由于復(fù)方制劑有效成分的研究仍然存在困難，提取過程中代表性成分的選擇不易確定，在保留傳統(tǒng)藏藥特點(diǎn)的基礎(chǔ)上結(jié)合現(xiàn)代藥品劑型的發(fā)展要求，選用滴丸為最終制劑劑型。

2.2 揮發(fā)油提取工藝的篩選和確定:基于研究中藥藥性、提高藥物療效、改進(jìn)制劑等目的，需要將有效成分從藥材中提取分離出來(lái)。

為提高提取效率，需要對(duì)影響“傳質(zhì)”的因素進(jìn)行認(rèn)真考慮，這些因素包括藥材的浸泡時(shí)間、提取的溶劑量、提取時(shí)間等。一般情況下，溶劑量越大，有效成分的提取越完全，但是溶劑量過大，產(chǎn)品的能耗增加，因此應(yīng)選擇合適的提取溶劑量，使藥物的有效成分剛好能完全提取出。延長(zhǎng)提取時(shí)間會(huì)使有效成分的提取充分，但在有些情況下，長(zhǎng)時(shí)間高溫浸提會(huì)增加對(duì)提取物破壞的可能性。

2.2.1 提取工藝設(shè)計(jì)參考有關(guān)資料和預(yù)實(shí)驗(yàn)，以水蒸氣蒸餾法提取，選加水倍量(A)、浸泡時(shí)間(B)、提取時(shí)間(C)作為考察因素，設(shè)計(jì)3個(gè)水平，以揮發(fā)油量為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)。

表1 揮發(fā)油提取工藝因素水平表

2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)。每次實(shí)驗(yàn)分別稱取除寒水石外其余處方量藥材，按正交表各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，然后按《中國(guó)藥典》2005版I部附錄揮發(fā)油測(cè)定法提取揮發(fā)油，冷卻后稱取其量［3］。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

以揮發(fā)油得量為考察指標(biāo)，由表2中極差R值大小顯示，各因素作用主次為C＞A＞B＞D;表3中方差分析結(jié)果表明，C因素的影響具有及顯著性意義(P＜0.01)，A因素的影響具有顯著性意義(P＜0.05)，以A2C2為佳;B因素的影響無(wú)顯著性意義(P＞0.05)，因此以A2B1C2組合為佳，即藥材加10倍量的水浸泡1h，提取5h。

2.2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照A2B1C2最佳工藝方案驗(yàn)證三批，結(jié)果見表4。

表4 乙醇回流驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，所篩選的揮發(fā)油提取工藝穩(wěn)定可行。經(jīng)過不同提取比例的比較，發(fā)現(xiàn)最佳提取工藝為藥材加10倍量的水浸泡1h，提取5h。

2.3 揮發(fā)油包合工藝的篩選和確定:為盡可能地保留揮發(fā)油成分，保證療效，采用β－CD包合揮發(fā)油。為了適應(yīng)生產(chǎn)，采用了操作簡(jiǎn)便，設(shè)備要求不高的飽和水溶液法，對(duì)包合時(shí)β－CD與油的配比，包合溫度及包合時(shí)間進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)研究，以β－CD與油的配比(A)、包合溫度(B)、包合時(shí)間(C)為考察因素，設(shè)計(jì)三個(gè)水平，以揮發(fā)油利用率為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，篩選最佳包合工藝條件。

2.3.1 揮發(fā)油包合試驗(yàn)因素水平表，見表5。

表5 揮發(fā)油包合試驗(yàn)因素水平表

2.3.2 試驗(yàn)方法及結(jié)果

按L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)，精密稱取 β－CD，置150mL具塞三角瓶中，加入100mL蒸餾水，水浴加熱使溶解，降至規(guī)定溫度，用磁力攪拌器攪拌30min，精密稱取揮發(fā)油1g，按1:4比例用無(wú)水乙醇稀釋，用滴管將揮發(fā)油稀釋液注入β－CD溶液中，加塞，恒溫?cái)嚢柚烈?guī)定時(shí)間。置冰箱中放置24h，抽濾，用石油醚30mL洗滌三次，置干燥器中12h，即得粉末。將制得的包合物置500mL圓底燒瓶中加入蒸餾水200mL，按揮發(fā)油測(cè)定法測(cè)定包合物中實(shí)際含油量;同時(shí)進(jìn)行揮發(fā)油空白回收率測(cè)定，即將1g揮發(fā)油置500ml圓底燒瓶中，按上述方法測(cè)定，計(jì)算空白回收率;在測(cè)定揮發(fā)油含量及空白回收率基礎(chǔ)上，可計(jì)算揮發(fā)油利用率，即:揮發(fā)油利用率(%)=包合物中實(shí)際含油量/揮發(fā)油加入量/空白回收率×100%，結(jié)果見表6。

表6 正交實(shí)驗(yàn)表及結(jié)果

表7 揮發(fā)油β－CD包合正交實(shí)驗(yàn)方差分析表

揮發(fā)油利用率越高，包合效果越好。因此，以揮發(fā)油利用率為考察指標(biāo)，由表6中極差R大小顯示，各因素作用主次為B＞A＞C;方差結(jié)果表明:B因素的影響具有極顯著意義(P ＜0.01)，A因素影響具有顯著性意義(P ＜0.05)，C因素的影響無(wú)顯著意義(P ＞0.05)，但C2稍優(yōu)于C1，故以A2 B2 C2組合為佳，即以8倍揮發(fā)油量的β－CD包合，包合溫度為50℃，包合時(shí)間為3h。

2.3.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

按最佳包合工藝進(jìn)行揮發(fā)油的包合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果見表8。由表8中結(jié)果表明，揮發(fā)油的包合工藝穩(wěn)定可行。

表8 揮發(fā)油包合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.4 揮發(fā)油包合物的定性、定量試驗(yàn)

2.4.1 揮發(fā)油包合物薄層定性鑒別試驗(yàn)方法及結(jié)果

取揮發(fā)油0.15g置100mL量瓶中，加石油醚定容至刻度，作為供試品溶液1;取含0.15g揮發(fā)油的β－CD包合物約1.2g，加100mL石油醚洗脫，濾液加石油醚定容至100mL，作為供試品溶液2;繼續(xù)加100mL石油醚洗脫，濾過，濾液加石油醚定容至100mL，作為供試品溶液3;取石油醚提取后的β－CD包合物加95%乙醇回流提取30min，濾過，濾液加乙醇定容至100mL，作為供試品溶液4;取β－CD1g，加95%乙醇回流提取30min，濾過，濾液加乙醇定容至100mL，作為陰性對(duì)照溶液。吸取上述5種溶液各5mL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用石油醚－醋酸乙酯(17:3)為展開劑，展開，取出，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視，結(jié)果供試品溶液色譜中，在與揮發(fā)油溶液相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而供試品溶液與陰性樣品色譜中無(wú)此斑點(diǎn)。

2.4.2 揮發(fā)油包合物紫外定性鑒別試驗(yàn)方法及結(jié)果。

樣品1:精密稱取揮發(fā)油1g，置250mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，備用。

樣品2:精密稱取揮發(fā)油包合物9g，用250mL石油醚分5次洗脫(50mL×5)，收集洗脫液，低溫?fù)]干石油醚，加乙醇溶液備用。

樣品3:經(jīng)石油醚洗脫的揮發(fā)油包合物低溫干燥，加250mL乙醇回流提取一小時(shí)，濾過，收集濾液備用。

樣品4:精密稱取β－CD 8g，加250mL乙醇回流提取1h，濾過，收集濾液備用。

取上述樣品各10mL進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果見表9。

表9 揮發(fā)油包合物紫外鑒別試驗(yàn)結(jié)果表

由表9中樣品吸收度結(jié)果表明:2號(hào)樣品吸收度相對(duì)于1、3號(hào)樣品比較小，說(shuō)明2號(hào)樣品是由石油醚洗脫的β－CD表面殘留的揮發(fā)油，乙醇回流提取已形成包合物的揮發(fā)油，故揮發(fā)油紫外掃描圖與乙醇提取液形成的吸收光譜類似，說(shuō)明包合物已形成。

綜上所述，揮發(fā)油的提取，包合工藝相對(duì)穩(wěn)定可行

2.5 水提取工藝研究設(shè)計(jì):按照工藝設(shè)計(jì)要求，對(duì)除寒水石外的其余藥材進(jìn)行水提取工藝研究，以溶劑用量(A)、回流時(shí)間(B)、回流次數(shù)(C)為考察因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，并以浸膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察最佳提取工藝條件。

2.5.1 因素水平表:見表10。

表10 水提取正交試驗(yàn)因素水平表

2.5.2 實(shí)驗(yàn)方法

稱取處方藥材共分9份，按因素水平表安排實(shí)驗(yàn)，分別用水進(jìn)行提取，提取液濃縮，蒸干，稱量計(jì)算即得。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表11

表11 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果

2.5.3 將正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表12。

表12 浸膏得率方差分析表

由表11中極差R值大小顯示，各因素作用主次為A＞C＞B，方差分析結(jié)果表明，A因素和C因素的影響均具有顯著意義(P＜0.05)，B因素的影響無(wú)顯著意義(P＞0.05)，故以A1B2C1組合為佳，即以10倍量水提取1h，共提取3次。

2.5.4 提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

稱取1/9處方量藥材按照A1B2 C1進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表13。結(jié)果表明:正交實(shí)驗(yàn)確定的水提取工藝，穩(wěn)定可行。

表13 水提工藝的驗(yàn)證試驗(yàn)

2.6 醇處理工藝研究設(shè)計(jì):本品處方劑量較大，為減少服用量，保證藥物療效，應(yīng)將水提膏中混有的淀粉、黏液質(zhì)等雜質(zhì)進(jìn)行純化處理。結(jié)合大生產(chǎn)的生產(chǎn)條件，選用醇沉法，影響醇沉的主要因素有乙醇濃度、水提濃縮液的相對(duì)密度、靜置時(shí)間。以上述三個(gè)因素為考察因素，各取3個(gè)水平進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)。并以醇浸膏得率和阿魏酸保留率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選最佳醇沉工藝條件。

2.6.1 因素水平表見表14。

表14 醇沉正交試驗(yàn)因素水平表

2.6.2 實(shí)驗(yàn)方法

稱取處方量藥材分為9份，按篩選的最佳水煎工藝條件提取，將提取液濃縮成不同相對(duì)密度的濃縮液，按正交試驗(yàn)條件進(jìn)行醇沉、過濾，回收乙醇，減壓干燥。①浸膏得率測(cè)定:精密稱定干燥物，計(jì)算，即得。②阿魏酸保留率測(cè)定:精密稱取干燥物約0.5g，依“阿魏酸方法”進(jìn)行含量測(cè)定，并計(jì)算阿魏酸保留率，即得。③正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表15。

表15 醇沉正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表15 (續(xù))

④將正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表16，17。

表16 醇沉法浸膏得率方差分析表

表17 阿魏酸保留率方差分析表

以醇沉后浸膏得率為考察指標(biāo)，由表15中極差R值大小顯示，各因素作用主次為A ＞B＞C;方差分析結(jié)果表明:A因素和B因素的影響均具有顯著性意義(P＜0.05)，C因素的影響無(wú)顯著性意義(P＞0.05)，考慮到應(yīng)以醇沉后浸膏率少為宜，故以A3B3 C2組合為佳;以阿魏酸保留率為考察指標(biāo)，由表15中極差R值大小顯示，各因素作用主次為B＞A＞C;方差分析結(jié)果表明:A因素和B因素的影響均具有顯著性意義(P＜0.05)，C因素的影響無(wú)顯著性意義(P＞0.05)，故以A2B3 C1組合為佳;考慮到阿魏酸保留率指標(biāo)的重要性，故以A2B3 C1為最佳醇處理工藝。即藥液濃縮至相對(duì)密度為1.30，使藥液含65%乙醇，靜置24h。

2.6.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照A2B3C1最佳工藝方案驗(yàn)證三批，結(jié)果見表18。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，所篩選的提取工藝穩(wěn)定可行。

表18 醇處理驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.7 成型工藝研究

2.7.1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:將醇提膏干燥，粉碎，過120篩，與過200目篩的寒水石及揮發(fā)油包合物混和，備用。一個(gè)處方混合物大約為318g。

2.7.2 藥物與基質(zhì)配比的初選實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì):為了盡量減少基質(zhì)的用量，以減小服用量，同時(shí)也為后續(xù)研究工作提供依據(jù)，根據(jù)藥物性質(zhì)選擇基質(zhì)分別為PEG4000和PEG6000，藥物與基質(zhì)的配比分別為 1:1.5，1:2.0，1:2.5，1:3.0，1:3.5，1:4.0進(jìn)行滴制試驗(yàn)。以滴制難易程度和滴丸圓整度為依據(jù)進(jìn)行篩選，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表19。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，藥物與基質(zhì)的比例最佳為1:2.5。

表19 藥物與基質(zhì)配比的初選

2.7.3 復(fù)合基質(zhì)配比的選擇

按藥物與基質(zhì)配比為 1:2.5，考察 PEG4000與PEG6000 按2:0.5，2:1，2:2，2:3，2:4，2:5 的配比進(jìn)行滴制試驗(yàn)。以藥液黏度、滴丸圓整度與溶散時(shí)限為依據(jù)進(jìn)行篩選，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表20。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，復(fù)合基質(zhì)比例最佳為2:1。

表20 復(fù)合基質(zhì)配比的選擇

2.7.4 冷卻劑的選擇:根據(jù)確定的藥物與基質(zhì)的配比，進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，以液體石蠟為冷卻劑能滿足滴丸劑的需求，因此確定滴丸冷卻劑為液體石蠟。

2.7.5 滴制工藝實(shí)驗(yàn)研究:在單因素篩選的基礎(chǔ)上，以基質(zhì)種類、藥物與基質(zhì)配比、藥液溫度、冷卻劑溫度作為考察因素，各取3個(gè)水平進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)。并以丸重變異系數(shù)，溶散時(shí)限和外觀質(zhì)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選最佳滴制工藝條件，因素水平見表21。

表21 滴制工藝篩選因素水平表

①正交實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果:按照L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)。將基質(zhì)置水浴中加熱攪拌至全部熔融后，加入規(guī)定比例的藥物，攪勻，迅速移至已預(yù)熱至恒溫的滴丸機(jī)滴料罐中，保持規(guī)定溫度，將藥液滴入液體石蠟冷卻劑中。取出滴丸，吸除表面液體石蠟，于干燥器中放置24 h，即得實(shí)驗(yàn)樣品。每次取實(shí)驗(yàn)樣品按《中國(guó)藥典》(2005年版)方法測(cè)定溶散時(shí)限，然后隨機(jī)抽取20粒，精密稱定總重量，再分別精密稱定各丸的重量，求出平均丸重的變異系數(shù)，并用10分制對(duì)包括滴丸成型性、外形、圓整度、硬度和色澤均勻度在內(nèi)的外觀質(zhì)量評(píng)分。結(jié)果見表22

表22 滴制工藝正交實(shí)驗(yàn)安排及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

②實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析:滴丸的質(zhì)量不能僅用一個(gè)指標(biāo)衡量，本實(shí)驗(yàn)采用3個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，求得不同指標(biāo)下各因素的極差(R)，從R值大小判定影響因素的主次。若選用各因素不同水平下，滴丸丸重變異系數(shù)最小，溶散時(shí)限最短，外觀質(zhì)量分最高為最佳搭配 ，則3個(gè)指標(biāo)下可供選擇的最佳工藝條件，分別歸納于表23中。

表23 正交實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果表

綜合表23中各指標(biāo)下最佳工藝搭配，選擇兩個(gè)或兩個(gè)以上指標(biāo)中均為較佳的工藝條件，得優(yōu)選工藝條件為A1B2C3D2，即以PEG4000－PEG6000(2:1)為基質(zhì)，藥物與基質(zhì)配比為 1:2.5，藥液溫度為95℃，冷卻劑溫度為 8～10℃。

③驗(yàn)證實(shí)驗(yàn):以上述確定的最佳工藝條件重復(fù)制備3批滴丸樣品，并按《中國(guó)藥典》2005年版制劑通則滴丸劑項(xiàng)下進(jìn)行質(zhì)量檢查。結(jié)果見表24。

表24 滴丸滴制工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

驗(yàn)證結(jié)果表明:驗(yàn)證結(jié)果與正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近，說(shuō)明滴丸制備工藝基本穩(wěn)定可行。

3 愈心安神滴丸制備工藝總結(jié)

六味藥中，除寒水石外，其余藥材提取揮發(fā)油，用β－環(huán)糊精包合，備用。藥渣加水煎煮3次，濾過，合并濾液，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.26～1.28(50℃)的清膏，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪勻，靜置24h，取上清液，回收乙醇，濃縮干燥，粉碎并過120目篩，備用，寒水石研細(xì)，過200目篩。取聚乙二醇4000與聚乙二醇6000適量加熱使溶解，加入上述揮發(fā)油包合物，稠膏(干)和寒水石研細(xì)，混勻，滴入冷卻的液體石蠟中，制成滴丸，即得。

［1］謝秀瓊.中藥新制劑開發(fā)與應(yīng)用［M］.人民衛(wèi)生出版社，1994.

［2］楊基森，等.中藥制劑設(shè)計(jì)學(xué)［M］.貴州科技出版社，1992.

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