大豆低聚肽對試驗(yàn)動物血液指標(biāo)的影響及其在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究

李海燕 宋琳琳 佟麗鑫

（吉林省通化市二道江區(qū)畜牧獸醫(yī)總站，吉林通化 134003）

前言

低聚肽全營養(yǎng)蛋白質(zhì)粉是以大豆低聚肽為主要功能性原料，結(jié)合人體營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，針對我國人體營養(yǎng)需求特點(diǎn)研制開發(fā)生產(chǎn)的新一代高科技功能性蛋白質(zhì)食品，蛋白吸收率遠(yuǎn)高于常規(guī)蛋白質(zhì)（是大豆分離蛋白的 1.5 倍），可不經(jīng)腸胃消化，直接被人體100%吸收，同時(shí)具有多種生理活性功能，在快速補(bǔ)充蛋白質(zhì)的同時(shí)具有促進(jìn)脂肪代謝、增強(qiáng)免疫力、抗疲勞、增加肌肉力量、補(bǔ)充體力、調(diào)節(jié)血壓、血脂的作用。由于大豆低聚肽的分子量較小，水溶性很高，即使在50%的高濃度下仍具有流動性，易于生產(chǎn)速溶飲品和高蛋白飲品。正由于大豆低聚肽比傳統(tǒng)大豆蛋白更易消化吸收，能夠迅速給肌體提供能量，無蛋白變性、無豆腥味，易溶于水，酸性條件下不產(chǎn)生沉淀，溶液粘度低，受熱凝固，同時(shí)具有獨(dú)特的生理功能等特性，因此具有十分廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的大豆低聚肽是一種由2～6個(gè)氨基酸組成的、分子量在200～800 Dalton 的混合肽產(chǎn)品。與原蛋白相比，大豆低聚肽具有水溶性、持水性、起泡性，能在pH2～10的任何酸堿條件下完全溶解。大豆低聚肽能與其它食品配料完全溶合，并保持各自原有的物化及營養(yǎng)特性。本次實(shí)驗(yàn)通過對小鼠、大鼠及豬進(jìn)行灌胃，研究大豆低聚肽對2型糖尿病小鼠的降血糖作用；對實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥小鼠的降膽固醇作用；對大鼠的全血粘性影響及在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)，為大豆低聚肽的應(yīng)用提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)藥品

大豆低聚肽：由國家大豆深加工技術(shù)研究推廣中心提供。

膽固醇：上海惠世生化試劑有限公司，分析純。

葡萄糖：北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司，分析純。

鄰苯二甲醛：上海試劑一廠，化學(xué)純。

鄰甲苯胺：沈陽試劑一廠，分析純。

肝素鈉注射液上海生物化學(xué)制藥廠生產(chǎn)，批號：011102。

丙基硫氧嘧啶：上海復(fù)星朝暉制藥廠，批號：000503。

1.1.2 試驗(yàn)動物

小鼠：取體重18～22 g、25～30 g的小鼠各40只，前者雌性，后者雌雄各半。分別隨機(jī)分成低、中、高、對照組和模型組五組，每組8只。

大鼠：取體重為200～250 g健康大鼠25只，雌雄各半。隨機(jī)分為高、中、低和對照組和模型組五組，每組5只。

豬：取體重為60 kg健康豬4頭，公母各半。

1.1.3 儀器

離心機(jī)、震蕩器、吸量管、水浴鍋、751分光光度計(jì)、離心管、棉球、剪刀、手術(shù)刀、鑷子、抗凝血玻璃管、全自動血液粘度儀、容量瓶、燒杯、量筒、試管架、BASC半自動生化儀（法國）、膽固醇試劑盒（北京中生公司）、JKDL%4自清洗旋轉(zhuǎn)式粘度計(jì)（北京普利生）。

1.2 方法

1.2.1 血糖的測定（鄰甲苯胺法）

試驗(yàn)鼠禁食4h后，按低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組分別灌胃給予大豆低聚肽50、100和150 mg/kg·d，灌胃1次/d，30 d后采集數(shù)據(jù)，在處死前禁食12 h，頸動脈取血，取出的全血放入37℃烘箱中30 min，隨后置于4℃冰箱中冷卻，離心5 min，取出血清，檢測空腹血糖。

1.2.2 血脂的測定（鄰苯二甲醛法）

空白組喂食普通飼料，其它組喂食高脂飼料。試驗(yàn)鼠禁食4h后，按低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組分別灌胃給予大豆低聚肽50、100和150mg/kg·d，灌胃1次/d，給藥及樣本采集按體表面積換算，高劑量為臨床用量的2.5倍，低劑量為臨床等效量，其它各組分別灌胃給予生理鹽水（空白組與模型組），于末次給藥后禁食12 h，眼眶后靜脈叢取血，2 500轉(zhuǎn)15 min離心，取血清測定膽固醇。

1.2.3 血液粘度的測定

于末次給藥2 min后，除對照組外，其余各組分別皮下注射1%腎上腺素0.06ml/100g，共2次，每次間隔4h，中間將大鼠置于－10℃環(huán)境中冷刺激30 min（低溫冰箱），處理停食，于18 h后乙醚麻醉，分離雙側(cè)頸動脈取血，血樣用肝素鈉抗凝，充分混勻不得凝血（每1 250u抗凝3～4 ml全血），進(jìn)行全血粘度測定。測定結(jié)果用SPSS.v1.2軟件版統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)，進(jìn)行方差分析；多組間兩兩比較用單因素方差分析。

1.2.4 試驗(yàn)豬

禁食0.5 h后，灌胃給與100 mg/kg體重的大豆低聚肽，給藥后不同時(shí)間采血，采用三氯醋酸溶液除去血中的蛋白質(zhì)，用分光光度計(jì)測定無蛋白血濾液的OD值并計(jì)算血中的藥物濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果

2.1.1 大豆低聚肽對糖尿病模型小鼠血糖的影響

大豆低聚肽對糖尿病模型小鼠血糖的影響參見表1。

表1 大豆低聚肽對糖尿病模型小鼠血糖

由表1可見：試驗(yàn)組小鼠的血糖含量明顯低于模型組，差異顯著，但與對照組血糖含量差異不顯著。

2.1.2 大豆低聚肽對小鼠實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥的影響

由表2可知，模型組與空白對照組比，血清膽固醇明顯升高，大豆低聚肽高低劑量組與模型組比血清膽固醇含量明顯降低，證明所采用的動物模型是成功的，大豆低聚肽的藥效與預(yù)期相符。

2.1.3 大豆低聚肽對大鼠全血粘度的影響

由表3可見：模型組與空白對照組，各項(xiàng)數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后，其結(jié)果有顯著性差異，說明造模成功；藥物組全血粘度（高切，中切）均低于空白對照組，而且由高劑量到低劑量全血粘度逐漸升高，說明大豆低聚肽對生理狀況下動物的全血液粘度有明顯的降低作用。

表3 大豆低聚肽對大鼠全血粘度（x±S，n=5）

2.1.4 大豆低聚肽對豬的藥代動力學(xué)

給藥前與大豆低聚肽單劑量100 mg/ kg 灌胃給藥后于0.08，0.16，0.25，0.33，0.5，0.75，1.0，1.5，2，2.5，3，3.5，4，4.5，5，5.5，6，7，8，9，10，12，14，16，18，20，22，24h后采血樣，依樣品測定方法操作，大豆低聚肽在豬血漿中的濃度時(shí)間曲線如圖1所示。

圖1 豬血漿中的濃度時(shí)間曲線

由圖1可見，大豆低聚肽在豬體內(nèi)吸收極快（5 min），且分布半衰期較小（12 h），說明大豆低聚肽灌胃在豬體內(nèi)分布較快。

2.2 分析

通過本次試驗(yàn)，大豆低聚肽在一定程度上能降低2型糖尿病小鼠模型的血糖值的作用；不同劑量大豆低聚肽均能使小鼠血清膽固醇降低，可見大豆低聚肽可顯著降低小鼠實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥的血清膽固醇，預(yù)防高脂血癥；大豆低聚肽對生理狀況下動物的全血液粘度有明顯的降低作用；豬灌胃給予大豆低聚肽后，大豆低聚肽在給藥5 min后入血，給藥10 min左右血中藥物濃度達(dá)到最高值。大豆低聚肽在豬體內(nèi)的半衰期約為12 h。在豬體內(nèi)，藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)并不能完全解釋臨床條件下的效果，只有將臨床效果結(jié)合起來才能決定藥物的代謝情況。

3 討論

由于大豆低聚肽能有效提高機(jī)體免疫力，降低糖尿病患者的血糖，防止糖尿病的合并癥的發(fā)生。加快糖尿病人的機(jī)體恢復(fù)。因此大豆低聚肽對糖尿病具有輔助治療作用。

給動物喂食大豆低聚肽，血清中的膽固醇顯著下降，糞便中的膽固醇含量增加，證明大豆肽能阻止膽固醇在大腸中的吸收。大腸除排泄功能外還有吸收功能，對人體有害的物質(zhì)（包括膽固醇）如被大腸重新吸收對人體是非常有害的，大豆肽能刺激甲狀腺素分泌，促進(jìn)膽汁酸化，使膽固醇排出體外。

大豆低聚肽與大豆蛋白雖然氨基酸組成數(shù)量不同，分子結(jié)構(gòu)不同，但氨基酸結(jié)構(gòu)未變，必需氨基酸，含量豐富，保留了原蛋白的營養(yǎng)特性，而且通過蛋白質(zhì)的改性作用消除了原蛋白中的營養(yǎng)抑制因子，使蛋白吸收利用效率提高。在人體內(nèi)，肽的運(yùn)行體系與氨基酸相比具有吸收快、能耗低、轉(zhuǎn)化體能周期短的優(yōu)點(diǎn)。

人類所需的營養(yǎng)素多種多樣，但蛋白質(zhì)是人體所需第一營養(yǎng)素，“沒有蛋白質(zhì)就沒有生命”，人體生長發(fā)育、病后恢復(fù)、器官構(gòu)成、容顏氣色、能量供給、“健康、美容、長壽”無不與蛋白質(zhì)密切相關(guān)。說明大豆低聚肽在人們?nèi)粘Ｉ钪械膽?yīng)用具有很好的前景。