馮 卓，任延波

( 1.大連中心醫(yī)院 外科ICU，遼寧 大連 116033；2.大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院 急診ICU，遼寧 大連 116011)

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)

中藥血必凈對MODS大鼠ALT、CR變化的影響及意義

馮 卓1，任延波2

( 1.大連中心醫(yī)院 外科ICU，遼寧 大連 116033；2.大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院 急診ICU，遼寧 大連 116011)

目的探討中藥血必凈對MODS大鼠臟器功能改善及對炎癥反應(yīng)減輕的作用。方法將144只SD大鼠(雄性)采用隨機(jī)化原則分成3組，即假手術(shù)對照組(對照組)(48只)，MODS組(模型組)(48只)，MODS+血必凈組(48只)(實(shí)驗組)；每組大鼠再次隨機(jī)化分為4組，即12 h、24 h、36 h和48 h組4個時間點(diǎn)，每組12只大鼠；每組大鼠于造模后各個時間點(diǎn)處死動物。取血測定丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、肌酐(CR)水平；留取肺、肝、腎組織標(biāo)本行病理組織學(xué)檢查。數(shù)據(jù)結(jié)果采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果與對照組比較，模型組及實(shí)驗組大鼠各時間點(diǎn)ALT、CR水平明顯增高，差異有顯著性意義(P<0.05)；與模型組比較，實(shí)驗組ALT水平于24 h起明顯下降，差異有顯著性意義(P<0.05)，CR水平于36 h起明顯下降，差異有顯著性意義(P<0.05)； 48 h大鼠肺、肝、腎器官的病理切片，實(shí)驗組較模型組炎癥浸潤明顯改善，出血、水腫及壞死明顯減輕等。結(jié)論中藥血必凈能明顯改善MODS大鼠肝腎功能， 改善肺泡塌陷及肺泡間隔增厚，減少炎癥細(xì)胞浸潤，改善肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，減輕肝細(xì)胞水腫及壞死，減輕腎小管及間質(zhì)充血水腫等，保護(hù)肺，肝，腎等臟器。

血必凈；多器官功能障礙綜合征；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶；肌酐

多器官功能障礙綜合征(MODS)是指嚴(yán)重創(chuàng)傷、嚴(yán)重感染、大面積燒傷、外科大手術(shù)和病理產(chǎn)科等原發(fā)病發(fā)生24 h后，同時或序貫發(fā)生兩個或兩個以上臟器功能障礙的臨床綜合征[1-2]，至今仍是危重患者死亡的主要原因之一[3-4]。目前MODS已成為感染及創(chuàng)傷等最嚴(yán)重的并發(fā)癥[5]。至今已認(rèn)識到機(jī)體過度釋放眾多介質(zhì)引起炎癥反應(yīng)失控[6]和凝血功能障礙是MODS的發(fā)病機(jī)制的本質(zhì)。近年來大量的中醫(yī)研究證實(shí)，血瘀證是MODS的主要證型之一[7]?；钛鲋兴幯貎粲谢钛觥⑹柰}絡(luò)、潰散毒邪、消除內(nèi)毒素的功能，能有效地抑制炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)凝血和抗凝系統(tǒng)，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，穩(wěn)定循環(huán)。故其可能成為治療MODS的突破。本文通過觀察中藥血必凈對MODS大鼠的ALT、CR變化及肺、肝、腎病理結(jié)果變化探討中藥血必凈對MODS大鼠臟器功能改善的作用及對炎癥反應(yīng)減輕的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

清潔級SD大鼠144只，均為雄性，體重250～300 g,由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗動物中心提供。

酵母多糖購買于美國Sigma試劑有限公司；血必凈購于天津紅日藥業(yè)有限公司；生理鹽水，液體石蠟，10%水合氯醛等。

1.2 分組

SD大鼠采用隨機(jī)化原則分為3組，即假手術(shù)對照組(對照組)(48只)，MODS組(模型組)(48只)，MODS+血必凈組(實(shí)驗組)(48只)。每組大鼠再次采用隨機(jī)化原則分為12 h、24 h、36 h、48 h時間點(diǎn)4個亞組，每組12只大鼠。

1.3 MODS動物模型的制備

大鼠采用“二次打擊”即腸缺血/再灌注損傷結(jié)合小劑量酵母多糖腹腔注射的方法[8-9]制備MODS動物模型。大鼠造模前單籠飼養(yǎng)，禁食12 h，自由飲水。

首次打擊為腸缺血/再灌注損傷：大鼠稱重，編號，予10% 水合氯醛(3 mL/kg) 腹腔麻醉，待大鼠麻醉安靜后使其仰臥并固定頭和四肢。在無菌條件下，取腹前正中切口，切開腹壁，游離腸系膜上動脈，于其根部用無損傷動脈夾夾閉，阻斷血流45 min后恢復(fù)血流，松夾即為再灌注。待腸系膜上動脈搏動恢復(fù)后記錄再灌注時間。逐層縫合傷口并局部消毒后，將大鼠松開固定后單籠飼養(yǎng)，予自由飲水、進(jìn)食。

二次打擊為酵母多糖攻擊：于恢復(fù)腸道血流后12 h，腹腔注射酵母多糖液體石蠟混懸液(125 mg/kg) 。對照組大鼠打開腹腔后僅分離暴露腸系膜上動脈45 min，于假缺血/再灌注后12 h 腹腔注射0.9%氯化鈉溶液3 mL。于造模后0.5 h、12 h、24 h、36 h實(shí)驗組注射血必凈4 mL/kg, 模型組及對照組注射生理鹽水4 mL/kg，相應(yīng)時間點(diǎn)處死相應(yīng)時間點(diǎn)大鼠。

1.4 標(biāo)本的采集

大鼠全麻后腹主動脈取血6 mL，置于2個無熱原試管中，分別為3 mL，至實(shí)驗室進(jìn)行ALT、CR的檢查，大鼠取血后處死，取肺、肝、腎臟置于福爾馬林溶液中固定，留備做病理切片。

1.5 病理標(biāo)本的制備

將肺、肝、腎組織用石蠟包埋，組織切片機(jī)切片固定，自動脫蠟機(jī)脫蠟、HE自動染色劑染色、自動封片機(jī)封片，光鏡下觀察并照相留取病理圖片。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，3組比較采用單因素方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般狀態(tài)

模型組大鼠與對照組大鼠相比，出現(xiàn)煩躁、厭食、煩渴、萎靡懶動，易激惹，毛蓬松，呼吸急促，舌質(zhì)由紅潤變暗淡，甚至暗紫色，腹瀉，甚至血尿，大便臭穢，尾靜脈變涼及暗紫色等表現(xiàn)；與模型組比較，實(shí)驗組大鼠上述表現(xiàn)輕，舌質(zhì)暗淡程度明顯好轉(zhuǎn)，顏色逐漸趨于正常，尾靜脈瘀血明顯好轉(zhuǎn)，顏色逐漸趨于正常。

2.2 各組大鼠ALT、CR的變化

2.2.1 活血化瘀中藥血必凈治療對大鼠ALT表達(dá)的影響：與對照組比較，實(shí)驗組及模型組各個時間點(diǎn)ALT水平都較高，差異均有顯著性意義(P<0.05)；與模型組相比，實(shí)驗組24 h、36 h、48 hALT水平明顯下降，差異有顯著性意義(P<0.05)。見表1。

表1各組大鼠血漿ALT的變化比較

組別12h24h36h48h對照組238．5±36．7246．7±45．4248．7±50．3237．1±42．4模型組647．4±46．31)1536．1±220．31)1802．2±273．91)1737．7±198．61)實(shí)驗組585．8±57．71)1291．5±306．61)2)1132．6±199．91)2)983．4±204．21)2)

1)與對照組比較，P<0.05； 2)與模型組比較，P<0.05

2.2.2 活血化瘀中藥血必凈治療對大鼠CR表達(dá)的影響：與對照組比較，實(shí)驗組和模型組各時間點(diǎn)CR水平都較高，差異有顯著性意義(P<0.05)；與模型組比較，實(shí)驗組36 h、48 h CR水平明顯下降，差異有顯著性意義(P<0.05)。見表2。

表2各組大鼠血漿CR的變化比較

組別12h24h36h48h對照組20．8±5．921．4±6．724．2±6．222．8±7．3模型組46．2±6．51)55．2±5．91)60．7±6．91)66．2±18．21)實(shí)驗組44．6±5．11)48．9±5．41)41．9±10．71)2)41．5±18．91)2)

1)與對照組比較，P<0.05; 2)與模型組比較，P<0.05

2.3 病理結(jié)果

肺臟：模型組較對照組損傷明顯加重，實(shí)驗組較對照組加重，但較模型組明顯減輕。對照組：肺泡結(jié)構(gòu)完整，無炎細(xì)胞浸潤及出血點(diǎn)(圖1A)；模型組：肺泡部分塌陷，肺泡間隔增厚，局部肺出血，大量炎癥細(xì)胞浸潤(圖1B)實(shí)驗組：肺泡只少部分塌陷，肺泡間隔增厚明顯改善，有少量出血點(diǎn)及炎癥細(xì)胞浸潤(圖1C)。

肝臟：模型組較對照組損傷明顯加重，實(shí)驗組較對照組加重，但較模型組明顯減輕。對照組：肝小葉結(jié)構(gòu)完整，未見肝細(xì)胞壞死(圖2A)；模型組：肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞廣泛水腫，氣球樣變及壞死(圖2B)；實(shí)驗組：肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂較輕，肝細(xì)胞輕度水腫及壞死，少量炎細(xì)胞浸潤(圖2C)。

腎臟：模型組較對照組損傷明顯加重，實(shí)驗組較對照組加重，但較模型組明顯減輕。對照組：腎小球正常，未見水腫及纖維化等(圖3A)；模型組：腎小管水腫，腎小管管腔中可見紅細(xì)胞，間質(zhì)明顯充血水腫(圖3B)；實(shí)驗組：腎小管輕度水腫，管腔內(nèi)可見少量紅細(xì)胞，間質(zhì)輕微充血水腫(圖3C)。

3 討 論

目前認(rèn)為，MODS的病理生理基礎(chǔ)是全身炎癥反應(yīng)、微血管凝血及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷等因素間的相互促進(jìn)、相互影響，促進(jìn)MODS的進(jìn)展。大鼠腸損傷后，腸管正常黏膜屏障因缺血功能喪失，腸內(nèi)細(xì)菌、內(nèi)毒素移位，內(nèi)毒素可刺激多種細(xì)胞合成、釋放大量炎癥介質(zhì)、黏附分子，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。凝血過程的終產(chǎn)物纖維蛋白也具有明顯的促炎效應(yīng)。凝血系統(tǒng)活化可刺激炎癥介質(zhì)的釋放，加重炎癥反應(yīng)；反過來炎癥介質(zhì)又進(jìn)一步促進(jìn)凝血過程，二者相互作用，形成惡性循環(huán)，誘發(fā)彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)，甚至MODS。

在MODS發(fā)病過程中，病理機(jī)制復(fù)雜，損傷器官眾多，各臟器損害相互影響并促進(jìn)，加重MODS損害。從實(shí)驗中可以看到，與對照組比較，模型組大鼠的ALT、CR水平明顯增高，結(jié)合病理結(jié)果，肺泡部分塌陷，肺泡間隔增厚，局部肺出血，大量炎癥細(xì)胞浸潤，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞廣泛水腫，氣球樣變及壞死，腎小管水腫，腎小管管腔中可見紅細(xì)胞，間質(zhì)明顯充血水腫，說明在經(jīng)過“二次打擊”后，大鼠的肺、肝、腎臟功能均出現(xiàn)障礙，符合MODS的特點(diǎn)；經(jīng)活血化瘀中藥血必凈治療后，與模型組比較，實(shí)驗組的ALT、CR水平明顯下降，ALT 24 h起有意義，CR 36 h起有意義，結(jié)合病理結(jié)果：各臟器損傷較模型組明顯減輕，肺泡少部分塌陷，肺泡間隔增厚明顯改善，有少量出血點(diǎn)及炎癥細(xì)胞浸潤，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂較輕，肝細(xì)胞輕度水腫及壞死，少量炎細(xì)胞浸潤，腎小管輕度水腫，管腔內(nèi)可見少量紅細(xì)胞，間質(zhì)輕微充血水腫。再次說明活血化瘀中藥對MODS大鼠有明顯減輕炎癥反應(yīng)，改善凝血功能，改善肺、肝、腎等臟器功能的作用。

圖1 肺臟

圖2 肝臟

圖3 腎臟

活血化瘀中藥血必凈注射液的有效成分紅花、黃色素A、川芎嗪、參素、阿魏酸、芍藥苷、原兒茶醛，主要從紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸等中草藥中提煉而來。相關(guān)研究報道，血必凈注射液能有效拮抗內(nèi)毒素，下調(diào)促炎介質(zhì)水平，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，并通過保護(hù)受損內(nèi)皮[1,11]，改善微循環(huán)，避免內(nèi)毒素攻擊所致的組織損傷。實(shí)驗證明活血化瘀中藥可以明顯改善 MODS大鼠煩躁、厭食、煩渴、萎靡懶動，易激惹，毛蓬松，呼吸急促，舌質(zhì)由紅潤變暗淡，甚至暗紫色，腹瀉，甚至血尿，大便臭穢，尾靜脈變涼及暗紫色等表現(xiàn)，改善MODS大鼠的狀態(tài)及血液凝滯情況?；钛鲋兴幠苊黠@降低MODS大鼠ALT、CR水平, 改善肺泡塌陷及肺泡間隔增厚，減少炎癥細(xì)胞浸潤，明顯改善肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，減輕肝細(xì)胞水腫及壞死，減輕腎小管及間質(zhì)充血水腫等，對MODS大鼠的肺臟、肝臟、腎臟等臟器功能有明顯改善作用。

活血化瘀中藥能明顯減輕MODS大鼠的炎癥反應(yīng)；MODS發(fā)展過程中早期使用活血化瘀中藥不僅能減輕多器官炎癥反應(yīng)，同時又能有效緩解嚴(yán)重感染動物產(chǎn)生的高凝狀態(tài)，預(yù)防凝血功能紊亂的發(fā)生，從而阻斷炎癥級聯(lián)與凝血級聯(lián)的惡性循環(huán)，防止MODS的進(jìn)一步發(fā)生發(fā)展和惡化。

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StudyofChineseherbalmedicineonMODSratALT,CRexpressioneffectandsignificance

FENGZhuo1,RENYan-bo2

(1.SICU,DalianCentralHospital,Dalian116033,China; 2.ICU,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116011,China)

ObjectiveThis essay is going to observe the change of ALT, CR and pathological results of lungs, livers, and kidney. to discuss Xue Bi Jing’s effects of protecting MODS rat’s viscera and reduce MODS rat inflammatory reaction.MethodsSD rats (male, 144 ) were divided into three groups at random, namely, sham control group (comparison group, 48), MODS(model group, 48), MODS and Xue Bi Jing group(test group, 48), then, each group was divided into four sub-groups at random again, ie, 12 h, 24 h, 36 h and 48 h group of four points, each group had 12 rats. Same number of rats in each sub-group was killed right at the point of 12 h, 24 h, 36 h and 48 h after membrane came into being. Blood was collected for the determination of alanine aminotransferase (ALT), creatinine (CR); specimens from liver, lungs and kidney were histopathologically examined. The data were analyzed by SPSS17.0 statistical software.ResultsCompared with comparison group, ALT、CR level of model group and test group rose obviously in the same measure hour period, the divergence was significant for statistics (P<0.05); compared with model group, ALT level of test group came to descend obviously from 24 th hour, the divergence was significant for statistics (P<0.05). CR level of test group came to descend obviously from 36th hour, the divergence was significant for statistics (P<0.05).Compared with model group, with study of organic pathological slices of 48 th hour, test group's inflammation index was improved obviously, and bleeding and fibrosis lessened.ConclusionChinese medicine Xue Bi Jing could significantly lower MODS rat ALT, CR levels, improve the alveolar collapse and alveolar septal thickening, reduce the infiltration of inflammatory cells, improve the struc- ture of disordered, relieve edema of liver cells and necrosis, attenuates renal tubular and interstitial hyperemia edema, on rat lung, liver, kidney functions have significantly improved.

Xue Bi Jing; multiple organ dysfunction syndrome；ACT；CR

10.11724/jdmu.2013.03.06

R51

A

1671-7295(2013)03-0234-05

馮卓，任延波.中藥血必凈對MODS大鼠ALT、CR變化的影響及意義[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013,35(3)：234-238.

馮 卓(1984-)，男，遼寧鐵嶺人，碩士。E-mail：fengzhuo1984@yahoo.com.cn

任延波，副教授。E-mail:r1994j@126.com

2012-12-04；

2013-03-17)