■李朝紀(jì) 王驥騰 韓 濤 丁 建

(浙江海洋學(xué)院水產(chǎn)營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山316000)

維生素C是一種水溶性維生素，又名抗壞血酸，在魚(yú)體內(nèi)作為細(xì)胞氧化相關(guān)酶的激活劑，參與鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)并促進(jìn)其吸收，同時(shí)具有緩解應(yīng)激反應(yīng)、提高免疫力、促進(jìn)生長(zhǎng)和飼料轉(zhuǎn)化的作用。一般魚(yú)體自身不能合成維生素C或合成量遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足其需要量，若飼料中缺乏維生素C或添加量不足，會(huì)導(dǎo)致缺乏癥的出現(xiàn)，包括生長(zhǎng)不良、脊柱側(cè)彎、眼球突出等癥狀。

日本黃姑魚(yú)(Nibea japonnica)屬石首魚(yú)科、黃姑魚(yú)屬，分布于我國(guó)東海及日本南部海域。其肉質(zhì)鮮美、抗病性好、生長(zhǎng)快速，被選為東海區(qū)域網(wǎng)箱養(yǎng)殖和海區(qū)放流的優(yōu)選經(jīng)濟(jì)品種。但有關(guān)日本黃姑魚(yú)營(yíng)養(yǎng)需要方面的研究較少，僅有日本黃姑魚(yú)幼魚(yú)蛋白、脂肪需要量的報(bào)道，有關(guān)其維生素C需要量的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用單因素梯度實(shí)驗(yàn)法，以生長(zhǎng)、體組成及組織中VC積累量來(lái)評(píng)價(jià)日本黃姑魚(yú)幼魚(yú)的VC適宜需求量，以期為日本黃姑魚(yú)人工配合飼料的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料制備

實(shí)驗(yàn)飼料配方及成分分析見(jiàn)表1。配制了6組等能、等氮的飼料，以美國(guó)海鮮魚(yú)粉和豆粕為蛋白源，魚(yú)油和豆油為脂肪源，玉米淀粉為糖源。分別添加了不同水平的VC，添加量分別為0、50、150、300、600、1 200 mg/kg飼料，VC的添加形式為VC單磷酸酯（來(lái)自杭州天農(nóng)生物營(yíng)養(yǎng)技術(shù)有限公司，飼料級(jí)L-抗壞血酸-2-磷酸酯，折合維生素C≥35%）。其余原料為市售食品級(jí)。所有干物質(zhì)原料過(guò)60目篩，經(jīng)充分混合再添加脂類(lèi)物質(zhì)和水混合，用雙螺桿擠條機(jī)制成2.5 mm粒徑的飼料，50℃風(fēng)干后保存于-20℃冰箱待用。

表1 實(shí)驗(yàn)飼料配方及成分分析（干重%）

1.2 實(shí)驗(yàn)魚(yú)及養(yǎng)殖管理

實(shí)驗(yàn)所用的日本黃姑魚(yú)幼魚(yú)來(lái)自浙江省水產(chǎn)研究所西軒實(shí)驗(yàn)基地。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，飼喂不含VC的基礎(chǔ)飼料暫養(yǎng)兩周。暫養(yǎng)結(jié)束后，隨機(jī)挑選規(guī)格相似的270尾健康魚(yú)分配至18個(gè)500 L圓形PE養(yǎng)殖桶內(nèi)，初始魚(yú)重大約(8.15±0.05)g/尾。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。每天飽食投喂兩次（8:30和16:30）。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前和結(jié)束時(shí)對(duì)每個(gè)桶的魚(yú)進(jìn)行稱(chēng)量。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)持續(xù)8周。

實(shí)驗(yàn)用水為砂濾海水，采用流水養(yǎng)殖，流速為10 L/min。定期測(cè)試水質(zhì)指標(biāo)，養(yǎng)殖期間水質(zhì)指標(biāo)維持在：溶解氧不小于7 mg/l，亞硝酸鹽不高于0.1 mg/l，鹽度(27±2)，水溫(28±2)℃。

1.3 樣品采集和分析

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前留取12尾魚(yú)置于-75℃超低溫冰箱用于體成分分析。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束取樣前，禁食24 h。每桶取3尾魚(yú)用于全魚(yú)體成分分析；另隨機(jī)取6尾魚(yú)經(jīng)MS-222麻醉后，測(cè)量體長(zhǎng)、體重。解剖取出內(nèi)臟組織（分離肝臟和腸脂肪）、剝離肌肉，以測(cè)定臟體比、肝體比和肥滿(mǎn)度等指標(biāo)。組織樣品經(jīng)液氮急凍后保存在-75℃冰箱用于隨后的分析。

所有樣品成分分析按AOAC方法：水分通過(guò)烘箱105℃干燥至恒重測(cè)定；蛋白含量通過(guò)凱氏定氮法測(cè)定（N×6.25）（Buchi B-324/K-437，Switzerland）；粗脂肪采用索氏抽提法測(cè)定（Buchi E-816，Switzerland）；灰分通過(guò)馬福爐550℃灼燒失重法測(cè)定。VC含量采用南京建成生物科技的VC測(cè)定試劑盒在酶標(biāo)儀（BIO-RAD iMark，US）中測(cè)定。

1.4 測(cè)定指標(biāo)

增重率（WG，%）=100×[（終末魚(yú)重-初始魚(yú)重）/初始魚(yú)重]；

特定生長(zhǎng)率(SGR,%/d)=100×[ln末重(g)-ln初重(g)]/實(shí)驗(yàn)天數(shù)(d)；

飼料系數(shù)(FCR)=總干物質(zhì)攝食量(g)/魚(yú)體總增重(g)；

蛋白質(zhì)效率(PER)=[末重(g)-初重(g)]/[總干物質(zhì)攝食量(g)×蛋白質(zhì)含量]；

成活率(Surival,%)=100×終末魚(yú)尾數(shù)(尾)/初始魚(yú)尾數(shù)(尾)；

肝體比指數(shù)(HIS,%)=100×(肝重/體重)；

臟體比指數(shù)(VI,%)=100×(內(nèi)臟重/體重)；

豐滿(mǎn)度（CF）=100×體重（g）/體長(zhǎng)3（cm3）。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS 16.0 for Windows軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)，并用Duncan's法多重比較分析各處理組間的差異性，顯著水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 飼料中不同VC含量對(duì)日本黃姑魚(yú)生長(zhǎng)及存活率的影響(見(jiàn)表2)

表2 飼料中不同VC含量對(duì)日本黃姑魚(yú)生長(zhǎng)及存活率的影響

由表2結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)8周的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，飼料中不同VC水平對(duì)日本黃姑魚(yú)幼魚(yú)的增重率產(chǎn)生了影響。未添加VC飼料組的魚(yú)增重率和特定生長(zhǎng)率顯著地低于50、150 mg/kg VC添加組，300、600、1 200 mg/kg組的值與其余各組無(wú)顯著性差異存在。同時(shí)，未添加VC組飼料系數(shù)顯著地高于50、150、600、1 200 mg/kg組，但與300 mg/kg組無(wú)顯著差異存在。150 mg/kg和1 200 mg/kg添加組的蛋白質(zhì)效率值顯著地高于未添加VC飼料組，但與其余組無(wú)顯著差異。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)期間，各組間成活率在88.89%～100%之間。

2.2 飼料中不同VC含量對(duì)日本黃姑魚(yú)肝體比、臟體比指數(shù)和肥滿(mǎn)度的影響(見(jiàn)表3)

如表3所示，經(jīng)過(guò)8周的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)后，飼料處理對(duì)各組的臟體比指數(shù)和肥滿(mǎn)度指數(shù)沒(méi)有產(chǎn)生顯著性的影響（P＞0.05）。但是，飼料中不同的VC添加水平影響了日本黃姑魚(yú)的肝體比指數(shù)。未添加VC組和1 200 mg/kg VC組都顯著地低于300 mg/kg組，但它們與其余各組間無(wú)顯著性差異存在。

表3 飼料中不同VC含量對(duì)日本黃姑魚(yú)肝體比、臟體比指數(shù)和肥滿(mǎn)度的影響

2.3 飼料中不同VC含量對(duì)日本黃姑魚(yú)體成分的影響（見(jiàn)表4）

表4 飼料中不同VC含量對(duì)日本黃姑魚(yú)體成分的影響

如表4所示，經(jīng)過(guò)8周的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)后，飼料處理對(duì)各組的全魚(yú)蛋白質(zhì)含量沒(méi)有產(chǎn)生顯著性的影響（P＞0.05）。但未添加VC組全魚(yú)水分含量顯著地高于添加50、600 mg/kg組的值，它們與其余組無(wú)顯著性差異存在；未添加VC組全魚(yú)脂肪含量顯著地低于150、300 mg/kg組的值，它們與其余組無(wú)顯著性差異存在；300 mg/kg VC組全魚(yú)灰分含量顯著地低于0、50、1 200 mg/kg組的值，與其余組無(wú)顯著性差異存在。

2.4 飼料中添加VC對(duì)日本黃姑魚(yú)肝臟和肌肉組織中VC積累量的影響（見(jiàn)表5）

表5 飼料中不同VC含量對(duì)日本黃姑魚(yú)肌肉與肝臟中VC積累量的影響

如表5所示，日本黃姑魚(yú)肌肉和肝臟VC積累量受飼料中VC添加水平的影響。肝臟和肌肉中VC的含量均隨著飼料VC添加水平的升高而升高，并在0～150 mg/kg表現(xiàn)尤為明顯。150 mg/kg及更多的VC添加水平則沒(méi)有顯著地升高肝臟和肌肉中的VC積累濃度。

3 討論

維生素C在魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)中發(fā)揮著重要作用：可以促進(jìn)鐵的吸收，參與組織膠原蛋白的合成；具有廣泛的免疫作用，可以緩解魚(yú)類(lèi)在養(yǎng)殖過(guò)程中的應(yīng)激狀態(tài)，而應(yīng)激直接關(guān)系到魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)速度。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的生長(zhǎng)結(jié)果，未添加VC組魚(yú)表現(xiàn)出最差的生長(zhǎng)，超過(guò)300 mg/kg添加量的組并未取得優(yōu)于50、150 mg/kg VC添加組的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加VC對(duì)日本黃姑魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，但是過(guò)多劑量的VC并不能為日本黃姑魚(yú)帶來(lái)更好的生長(zhǎng)促進(jìn)作用。這一結(jié)果相似于一些國(guó)內(nèi)外關(guān)于其他海水魚(yú)VC需要量的研究報(bào)道。以增重率和特定生長(zhǎng)率為指標(biāo)，日本黃姑魚(yú)飼料中合適的VC添加水平應(yīng)為50～150 mg/kg。盡管沒(méi)有顯著性差異存在，150 mg/kg組添加組的FCR和PER值[分別為（1.20±0.15）和（1.37±0.17）]是好于50 mg/kg添加組相應(yīng)的值[分別為（1.46±0.07）和（1.11±0.10）]。這一結(jié)果與胡斌等對(duì)草魚(yú)按生長(zhǎng)性能評(píng)價(jià)得出150 mg/kg、Dabrowski等對(duì)羅非魚(yú)研究得出150 mg/kg、宋學(xué)宏等報(bào)道的異育銀鯽維持最大生長(zhǎng)需要150 mg/kg、萬(wàn)金娟等以體增重為指標(biāo)得出VC需要量為150 mg/kg等有關(guān)VC需要量的研究結(jié)果一致。在上述的研究也是采用了穩(wěn)定化處理的維生素C，這些值相比早期的一些使用晶體維生素C進(jìn)行的研究所得出需要量值偏低。

通過(guò)對(duì)本實(shí)驗(yàn)生物學(xué)數(shù)據(jù)和體成分?jǐn)?shù)據(jù)的分析，飼料中VC的含量倍增對(duì)日本黃姑魚(yú)的肝體比指數(shù)產(chǎn)生了一個(gè)先上升后下降的變化趨勢(shì)。在0～300 mg/kg時(shí)，肝體比指數(shù)隨著VC添加水平升高，而300～1 200 mg/kg時(shí)，肝體比指數(shù)隨之降低。動(dòng)物肝臟中所具有的古洛內(nèi)酯氧化酶(L-gulonolactone oxidase，GLO)是合成抗壞血酸的關(guān)鍵酶類(lèi)，陸生動(dòng)物如牛、馬、豬具有這種酶，因而它們具備合成維生素C的能力，但是大部分魚(yú)類(lèi)經(jīng)證實(shí)不具有合成VC的能力，如虹鱒、真鯛、羅非魚(yú)以及大西洋庸鰈。不能自身合成抗壞血酸的魚(yú)類(lèi)由于缺乏GLO酶，會(huì)出現(xiàn)各種缺乏癥，如生長(zhǎng)減慢、眼球突出、虹膜出血、脊柱側(cè)彎、皮膚內(nèi)臟出血、抗逆性下降，嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡。體成分方面，未添加VC組魚(yú)水分較高，而脂肪較低，其余組則水分較低脂肪較高，正好與之相反。這種水分與脂肪呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)的規(guī)律見(jiàn)諸于一些報(bào)道之中。

一些研究者報(bào)道，維生素C在魚(yú)類(lèi)的主要積累器官按含量由低至高分別為：肌肉、肝臟、鰓、腦。本實(shí)驗(yàn)中每一組飼料VC水平下，肌肉中VC的含量同樣均低于肝臟。肌肉和肝臟中VC含量均隨著飼料VC含量的升高并同時(shí)在150 mg/kg時(shí)呈現(xiàn)出飽和跡象。這種在魚(yú)類(lèi)組織中VC含量隨飼料VC含量升高而趨于飽和的現(xiàn)象，在海鱸、大黃魚(yú)以及黑鯛的研究中也被發(fā)現(xiàn)。但與軍曹魚(yú)、點(diǎn)帶石斑魚(yú)、雜交羅非魚(yú)隨著飼料中VC升高不呈現(xiàn)飽和的結(jié)論不同。Dabrowski認(rèn)為，維持組織中VC穩(wěn)定狀態(tài)所需要的VC含量即是VC最適需要量，同時(shí)Foumier等報(bào)道以肝臟VC飽和濃度作為評(píng)價(jià)VC需要量是最可信的，因此在本實(shí)驗(yàn)中達(dá)到肌肉和肝臟穩(wěn)定VC含量的飼料VC水平150 mg/kg是一個(gè)可信指標(biāo)。

4 結(jié)論

綜合上述，在本實(shí)驗(yàn)條件下，飼料中添加適量維生素C可以升高日本黃姑魚(yú)的生長(zhǎng)速度和組織VC積累。以增重率、蛋白質(zhì)效率、飼料轉(zhuǎn)化率以及組織中VC積累為指標(biāo)，綜合得出飼料中添加150 mg/kg有效含量為35%的VC單磷酸酯被認(rèn)為是最適合日本黃姑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)的添加量。

（參考文獻(xiàn)26篇，刊略，需者可函索）