■金素雅 葉元土 蔡春芳 肖順應(yīng) 王永玲

（1.蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇省水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇蘇州215123；2.溫州市龍灣區(qū)漁業(yè)技術(shù)推廣站，浙江溫州325000）

菜籽餅粕是重要的水產(chǎn)飼料蛋白質(zhì)飼料資源之一，與其他油料餅粕相比，蛋白質(zhì)中蛋氨酸、半胱氨酸等含硫氨基酸含量較高，賴(lài)氨酸略低于豆粕，但蛋白效價(jià)為 3.0～3.5，比豆粕還高。菜籽餅粕在膨化飼料中是否會(huì)對(duì)草魚(yú)魚(yú)體的氨基酸組成產(chǎn)生影響，魚(yú)體氨基酸組成與飼料氨基酸組成有何關(guān)系等之類(lèi)的問(wèn)題還少有報(bào)道。本文研究4種菜籽餅粕的膨化飼料對(duì)草魚(yú)全魚(yú)、肌肉、肝胰臟的氨基酸組成的影響，并分析其氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的相關(guān)性，為水產(chǎn)養(yǎng)殖中合理有效地使用菜籽餅粕提供基礎(chǔ)資料。

1 材料及方法

1.1 試驗(yàn)魚(yú)

試驗(yàn)草魚(yú)為蘇州市相城特種水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)培育的一齡魚(yú)種，初重（39.4±2.9）g。經(jīng)兩周暫養(yǎng)后，挑選體格健壯、規(guī)格整齊的魚(yú)種隨機(jī)分養(yǎng)于24個(gè)養(yǎng)殖網(wǎng)箱中，每組分養(yǎng)15尾，每組3個(gè)平行。

1.2 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)飼料由小麥、細(xì)米糠、米糠粕、豆粕、魚(yú)粉、棉籽粕、菜籽餅粕等常規(guī)原料組成。試驗(yàn)所選4種菜粕分別為國(guó)產(chǎn)菜粕、加拿大菜粕、冷生榨菜餅、印度菜粕，其特性及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1，氨基酸組成見(jiàn)表2。4種菜籽餅粕分別設(shè)計(jì)23.0%、34.5%二個(gè)添加水平，分別命名為國(guó)產(chǎn)菜粕膨化Ⅰ組（國(guó)菜膨化Ⅰ組，GEⅠ組）、國(guó)產(chǎn)菜粕膨化Ⅱ組（國(guó)菜膨化Ⅱ組，GEⅡ組）、加拿大菜粕膨化Ⅰ組（加菜膨化Ⅰ組，JEⅠ組）、加拿大菜粕膨化Ⅱ組（加菜膨化Ⅱ組，JEⅡ組）、冷生榨菜餅膨化Ⅰ組（生餅膨化Ⅰ組，SEⅠ組）、冷生榨菜餅膨化Ⅱ組（生餅膨化Ⅱ組，SEⅡ組）、印度菜粕膨化Ⅰ組（印菜膨化Ⅰ組，YEⅠ組）、印度菜粕膨化Ⅱ組（印菜膨化Ⅱ組，YEⅡ組）共8個(gè)試驗(yàn)組，以棉粕用量平衡試驗(yàn)飼料蛋白質(zhì)水平。所有飼料原料經(jīng)粉碎過(guò)60目篩，混合均勻，用LHD超越牌飼料膨化機(jī)加工成直徑2 mm的膨化飼料，飼料置于-20℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆?。各試?yàn)組試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表3，氨基酸組成見(jiàn)表4。

表1 4種菜籽餅粕的特性及營(yíng)養(yǎng)成分(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表2 4種菜籽餅粕氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ)，g/100 g)

1.3 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在室內(nèi)長(zhǎng)為6 m、寬為3 m、水深1.2 m的水泥池中進(jìn)行，每個(gè)水泥池掛5個(gè)網(wǎng)箱（1.5 m×1 m×1 m），每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)3個(gè)重復(fù)，共24個(gè)網(wǎng)箱。養(yǎng)殖水體為池塘水經(jīng)過(guò)曝氣后抽入，每周換水1次，換水量不超過(guò)1/3。每個(gè)水泥池加充氧頭10個(gè)，保證水體連續(xù)不斷的充氧。養(yǎng)殖時(shí)間為9月25～11月25日，正式試驗(yàn)共62 d。

在整個(gè)養(yǎng)殖試驗(yàn)期間，水溫22～28℃、溶氧＞6.0 mg/l、pH值為(7.4±0.3)、氨態(tài)氮＜0.1 mg/l、亞硝酸鹽＜0.01 mg/l、硫化物＜0.05 mg/l。試驗(yàn)期間每天投喂量為魚(yú)體重的3%～5%，每隔1～2周根據(jù)攝食情況調(diào)整投飼量，每天分3次投喂（08:00、12:30、17:00）。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 測(cè)定指標(biāo)

測(cè)定飼料、全魚(yú)、肌肉、肝胰臟干樣的17種蛋白氨基酸及血清、肌肉、全魚(yú)的游離氨基酸，并分析全魚(yú)、肌肉、肝胰臟氨基酸與原料、飼料氨基酸之間的相關(guān)性。

1.4.2 測(cè)定方法

稱(chēng)取適量全魚(yú)、肌肉、肝胰臟干樣 (含蛋白 7.5～25 mg，準(zhǔn)確至 0.1 mg)于 20 ml安瓿瓶中，加 6 mol/l鹽酸 10 ml后液氮冷凍，真空封口，置于(110±1)℃烘箱中水解 22～24 h。水解完成后，取出冷卻至室溫，混勻、開(kāi)管、過(guò)濾，取0.5 ml濾液置于試管內(nèi)。將試管放置真空干燥箱中，低于60℃真空蒸干。蒸干后，加入3～5 ml樣品稀釋液到試管，使氨基酸濃度達(dá)到50～250 nmol/ml，振蕩混勻，0.22 μm 濾膜過(guò)濾后，用S-433D氨基酸分析儀（德國(guó)SYKAM公司）測(cè)定蛋白質(zhì)氨基酸含量。色氨酸因酸水解破壞沒(méi)有單獨(dú)測(cè)定。

表3 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表4 試驗(yàn)飼料氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))

取適量離心后的血清，加入等量磺基水楊酸（8%），混合搖勻后置于4℃的冰箱中存放30 min以上除蛋白，取出后12 000 r/min離心20 min，取上清液，用鋰鹽的樣品稀釋液按1∶1將其溶解，用0.22 μm濾膜過(guò)濾后上機(jī)。

準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的肌肉、全魚(yú)鮮樣樣品，加入10倍體積的3%磺基水楊酸后勻漿，12 000 r/m、4℃離心20 min，取上清液用0.22 μm的微孔濾膜過(guò)濾后上機(jī)。

用S-433D氨基酸分析儀（德國(guó)SYKAM公司）測(cè)定游離氨基酸含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)結(jié)果用Excel與SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，在雙因素方差分析的基礎(chǔ)上，采用Duncan's多重比較法檢驗(yàn)組間差異，以P＜0.05表示差異顯著。相關(guān)系數(shù)的處理方法采用Microsoft Office(2003)中的 Excel表中“CORREL”函數(shù)計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同菜籽餅粕對(duì)草魚(yú)全魚(yú)氨基酸組成的影響(見(jiàn)表5)

表5 不同菜籽餅粕及其添加水平對(duì)全魚(yú)氨基酸組成的影響（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

由表5可知，各試驗(yàn)組的全魚(yú)氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的氨基酸組成相關(guān)系數(shù)無(wú)明顯差異，除GEⅠ組的相關(guān)系數(shù)為0.88外，其他的均在0.90以上；與原料氨基酸組成的相關(guān)系數(shù)在0.90～0.95之間，并無(wú)明顯差異。各試驗(yàn)組全魚(yú)的必需氨基酸總量的變異系數(shù)為11.71%，氨基酸總量的變異系數(shù)為12.17%。各必需氨基酸中蛋氨酸的變異系數(shù)最大，達(dá)到16.47%，其他必需氨基酸變異系數(shù)在10.02%～13.60%之間。非必需氨基酸中脯氨酸變異系數(shù)最大為15.57%，其他非必需氨基酸變異系數(shù)在12.30%～15.49%之間。

以上結(jié)果表明，4種菜籽餅粕沒(méi)有顯著影響草魚(yú)全魚(yú)的氨基酸組成。

2.2 不同菜籽餅粕對(duì)草魚(yú)肌肉氨基酸組成的影響（見(jiàn)表6)

由表6可知，草魚(yú)肌肉的氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的相關(guān)系數(shù)各試驗(yàn)組間無(wú)差異，都在0.87以上；與對(duì)應(yīng)的原料的氨基酸組成的相關(guān)系數(shù)在0.85～0.92之間，變異系數(shù)為2.12%；肌肉的必需氨基酸變異系數(shù)為3.52%，氨基酸總量的變異系數(shù)為3.73%。各試驗(yàn)組必需氨基酸的變異系數(shù)在2.68%～6.75%之間，其中組氨酸的變異系數(shù)最高；非必需氨基酸的變異系數(shù)均在5.66%以內(nèi)。

以上結(jié)果表明，4種菜籽餅粕沒(méi)有顯著影響草魚(yú)肌肉的氨基酸組成。

2.3 不同菜籽餅粕對(duì)草魚(yú)肝胰臟氨基酸組成的影響（見(jiàn)表7）

由表7可知，草魚(yú)肝胰臟的氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的相關(guān)系數(shù)各試驗(yàn)組間無(wú)差異，都在0.88～0.91之間，變異系數(shù)為1.01%；與原料氨基酸組成的相關(guān)系數(shù)在0.87～0.91之間，變異系數(shù)為1.76%，各試驗(yàn)組并無(wú)明顯差異。各試驗(yàn)組必需氨基酸的變異系數(shù)在8.70%～15.75%之間，其中蛋氨酸的變異系數(shù)最高，達(dá)15.75%；非必需氨基酸的變異系數(shù)最高的是脯氨酸，其值為13.73%。肝胰臟的必需氨基酸變異系數(shù)為9.84%，氨基酸總量的變異系數(shù)為9.98%。

表6 不同菜籽餅粕及其添加水平對(duì)草魚(yú)肌肉氨基酸組成的影響（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

表7 不同菜籽餅粕及其添加水平對(duì)草魚(yú)肝胰臟氨基酸組成的影響（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

以上結(jié)果表明，4種菜籽餅粕沒(méi)有顯著影響草魚(yú)全魚(yú)肝胰臟的氨基酸組成。

2.4 不同菜籽餅粕對(duì)草魚(yú)血清游離氨基酸組成及含量的影響（見(jiàn)表8）

由表8可知，各試驗(yàn)組草魚(yú)的血清游離氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的氨基酸組成相關(guān)系數(shù)均成負(fù)相關(guān)，其變異系數(shù)為14.34%。各試驗(yàn)組血清游離氨基酸的必需氨基酸總量的變異系數(shù)為3.92%，其中苯丙氨酸的變異系數(shù)最大，達(dá)到12.39%；氨基酸總量的變異系數(shù)為4.41%，各氨基酸變異系數(shù)在4.12%～16.36%之間。各試驗(yàn)組之間的血清游離氨基酸的相關(guān)系數(shù)在0.974～0.995之間，表明各試驗(yàn)組草魚(yú)的血清游離氨基酸組成接近。

表8 不同菜籽餅粕及其添加水平對(duì)草魚(yú)血清游離氨基酸組成及含量的影響

以上結(jié)果顯示：①各試驗(yàn)組草魚(yú)的血清游離氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的氨基酸組成的相關(guān)性不強(qiáng)。②依據(jù)血清游離氨基酸的含量，計(jì)算各試驗(yàn)組之間血清游離氨基酸整體的相關(guān)系數(shù)，結(jié)果均在0.974以上(見(jiàn)表8)，表明不同試驗(yàn)組之間血清氨基酸組成模式基本一致，處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。

2.5 不同菜籽餅粕及其添加水平對(duì)草魚(yú)肌肉游離氨基酸組成及含量的影響（見(jiàn)表9）

由表9可知，各試驗(yàn)組的肌肉游離氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的氨基酸組成相關(guān)系數(shù)均成負(fù)相關(guān)，其變異系數(shù)為15.03%。各試驗(yàn)組肌肉游離氨基酸的必需氨基酸總量的變異系數(shù)為2.8%，其中蛋氨酸的變異系數(shù)最大，達(dá)到18.6%；氨基酸總量的變異系數(shù)為1.7%，各氨基酸變異系數(shù)在2.6%～18.6%之間。各試驗(yàn)組之間的肌肉游離氨基酸的相關(guān)系數(shù)在0.993～0.999之間，表明各試驗(yàn)組間草魚(yú)的肌肉游離氨基酸組成接近。

表9 不同菜籽餅粕及其添加水平對(duì)草魚(yú)肌肉游離氨基酸組成及含量的影響

以上結(jié)果顯示：①各試驗(yàn)組草魚(yú)的肌肉游離氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的氨基酸組成的相關(guān)性不強(qiáng)。②依據(jù)肌肉游離氨基酸的含量，計(jì)算各試驗(yàn)組之間肌肉游離氨基酸整體的相關(guān)系數(shù)，結(jié)果均在0.993以上(見(jiàn)表9)，表明不同試驗(yàn)組之間肌肉氨基酸組成模式基本一致，處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。

2.6 不同菜籽餅粕及其添加水平對(duì)草魚(yú)全魚(yú)游離氨基酸組成及含量的影響（見(jiàn)表10）

由表10可知，各試驗(yàn)組的草魚(yú)全魚(yú)游離氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的氨基酸組成相關(guān)系數(shù)在0.332～0.450之間，變異系數(shù)為9.03%。各試驗(yàn)組的全魚(yú)游離氨基酸的必需氨基酸總量的變異系數(shù)為1.3%，變異系數(shù)最大的是蛋氨酸，達(dá)6.5%；氨基酸總量的變異系數(shù)為2.2%，各氨基酸的變異系數(shù)在2.0%～20.4%之間。各試驗(yàn)組之間的全魚(yú)游離氨基酸的相關(guān)系數(shù)在0.989～0.997之間，表明各試驗(yàn)組草魚(yú)的全魚(yú)游離氨基酸組成接近。

以上結(jié)果顯示：①各試驗(yàn)組草魚(yú)的全魚(yú)游離氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的氨基酸組成的相關(guān)性不強(qiáng)。②依據(jù)全魚(yú)游離氨基酸的含量，計(jì)算各試驗(yàn)組之間全魚(yú)游離氨基酸整體的相關(guān)系數(shù)，結(jié)果均在0.989以上(見(jiàn)表10)，表明不同試驗(yàn)組之間的全魚(yú)氨基酸組成模式基本一致，處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。

3 討論

魚(yú)蝦對(duì)蛋白質(zhì)的需要量實(shí)際是對(duì)必需氨基酸和非必需氨基酸混合比例數(shù)量的需要。魚(yú)類(lèi)必需氨基酸有10種，它們的總含量應(yīng)不低于飼料中粗蛋白含量的1/3，而動(dòng)物性蛋白含量應(yīng)不低于飼料蛋白質(zhì)含量的1/3，在魚(yú)類(lèi)的日糧中必需氨基酸與非必需氨基酸之間的比例大致是40%∶60%。本試驗(yàn)所用飼料的∑EAA/pr值在0.33～0.38之間，其必需氨基酸和非必需氨基酸之間的比例大約為45%∶55%，符合魚(yú)體對(duì)蛋白的需求。葉元土等認(rèn)為飼料氨基酸的平衡效果對(duì)草魚(yú)的養(yǎng)殖效果有密切影響，其影響規(guī)律成正相關(guān)關(guān)系。本試驗(yàn)結(jié)果表明各試驗(yàn)飼料與其相對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)組的全魚(yú)、肌肉、肝胰臟相關(guān)系數(shù)均在0.87～0.95之間，并無(wú)顯著差異，表明各試驗(yàn)組的氨基酸含量均能滿足草魚(yú)的生長(zhǎng)需要。

表10 不同菜籽餅粕及其添加水平對(duì)草魚(yú)全魚(yú)游離氨基酸組成及含量的影響

各試驗(yàn)組草魚(yú)肌肉的各種必需氨基酸的變異系數(shù)在2.68%～6.75%之間，說(shuō)明各試驗(yàn)組肌肉的必需氨基酸組成非常接近，并且與飼料的必需氨基酸相關(guān)性不顯著（P＞0.05），這表明試驗(yàn)飼料對(duì)肌肉的必需氨基酸組成沒(méi)有影響。這一結(jié)果與黃更生等[6]研究結(jié)果相同。Kaushi飼喂不同試驗(yàn)飼料的大菱鲆全魚(yú)必需氨基酸組成沒(méi)有顯著性差異；Mambrini、Akiyama推斷全魚(yú)必需氨基酸的穩(wěn)定性可以延用到大部分的硬骨魚(yú)類(lèi)上。Mai等研究表明大黃魚(yú)肌肉其它必需氨基酸不受飼料中蛋氨酸的影響，蛋氨酸和異亮氨酸含量受飼料中蛋氨酸水平的影響。林仕梅等發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充D-蛋氨酸對(duì)羅非魚(yú)全魚(yú)氨基酸含量不產(chǎn)生任何影響，但魚(yú)體組氨酸和脯氨酸含量受飼料中蛋氨酸水平的影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明試驗(yàn)中的飼料氨基酸組成對(duì)草魚(yú)全魚(yú)、肌肉、肝胰臟氨基酸組成沒(méi)有明顯影響。

施瑔芳認(rèn)為，飼料中的蛋白質(zhì)在魚(yú)體內(nèi)經(jīng)過(guò)消化轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N氨基酸，由腸壁吸收后進(jìn)入魚(yú)體的血液，其中一部分經(jīng)肝門(mén)靜脈進(jìn)入肝臟；另一部分氨基酸隨血液循環(huán)分布到魚(yú)體內(nèi)各組織細(xì)胞中，用來(lái)合成魚(yú)體自身的特殊蛋白質(zhì)或各種活性物質(zhì)，血液中的游離氨基酸是魚(yú)體肌肉組織中游離氨基酸和蛋白質(zhì)的主要來(lái)源。不同器官組織游離氨基酸的組成和來(lái)源有差異，不同組織蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)代謝存在差異。羅莉等研究表明，對(duì)草魚(yú)飼喂不同氨基酸模式的日糧發(fā)現(xiàn)，氨基酸模式越平衡，蛋白質(zhì)合成和降解速率越高，蛋白質(zhì)合成的增加更占優(yōu)勢(shì)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，各試驗(yàn)組草魚(yú)的血清、肌肉、全魚(yú)游離氨基酸組成與對(duì)應(yīng)飼料的氨基酸組成的相關(guān)性均不強(qiáng)，但不同試驗(yàn)組之間的草魚(yú)同一器官組織的游離氨基酸組成的相關(guān)系數(shù)均在0.9以上。

4 結(jié)論

4種菜籽餅粕在草魚(yú)膨化飼料中的使用不會(huì)顯著影響草魚(yú)全魚(yú)、肌肉、肝胰臟的氨基酸組成；不同試驗(yàn)組之間的草魚(yú)同一器官組織的游離氨基酸組成模式基本一致，處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。

（參考文獻(xiàn)14篇，刊略，需者可函索）