祁彩霞，楊發(fā)勝

(1．陜西金裕制藥股份有限公司，陜西 西安 710075;2．西安利君精華藥業(yè)有限責任公司，陜西 西安 710075)

鹽酸左氧氟沙星為第3代喹諾酮類抗菌藥物，是氧氟沙星的左旋體，抗菌活性是氧氟沙星的2倍，具有抗菌譜更廣、抗菌作用更強、安全性更高的特點，臨床廣泛用于呼吸系統(tǒng)、胃腸道、泌尿道、口腔科及婦科等領(lǐng)域的感染。鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液的主要原料鹽酸左氧氟沙星在合成過程中需使用三氯甲烷、乙醇和二甲基亞砜，對于后兩種殘留溶劑較易檢測，而三氯甲烷沸點低，含有鹵素原子，且屬于一類溶劑，限度為0．006%，根據(jù)2010年修訂版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(GMP)和藥典規(guī)定“應(yīng)該避免使用”[1]。因此，三氯甲烷成了質(zhì)量控制的重點。經(jīng)過大量試驗[2-3]，筆者建立了檢測產(chǎn)品中三氯甲烷的氣相色譜法并進行了方法學驗證，報道如下。

1 儀器與試藥

GC7890II型氣相色譜儀(上海天美科學儀器有限公司);DK-3001A型頂空進樣器(北京中興匯利科技發(fā)展有限公司)，Sartorios CP2250D型電子天平;KQ5200型超聲波清洗器。鹽酸左氧氟沙星原料藥(上虞京新藥業(yè)有限公司，批號為DK20-1111264，DK20-1201124，DK20-1203162)。三氯甲烷對照品(天津科密歐色譜標樣，含量99．0%，5 mL/支，批號為20120605);乙醇對照品(天津科密歐色譜標樣，含量99．7%，5 mL/支，批號20100713);注射用水為溶劑。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:天美 TM-1非極性毛細管柱(30 m×0．25 mm，0．25 μm);檢測器:氫火焰離子化檢測器(FID);進樣口溫度:200℃;檢測器溫度:250℃;柱溫:40℃;載氣:N2;分流比:10∶1;頂空瓶平衡溫度:80℃，維持30 min，進樣量:1 mL。

2．2 溶液制備

精密吸取注射用水5 mL，用氣相進樣針吸取三氯甲烷對照品1 mL置頂空瓶中，搖勻，密封瓶口，作為三氯甲烷的定位溶液，同法制備乙醇的定位溶液;以注射用水為空白溶液。取鹽酸左氧氯沙星原料藥約1．50 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加水5 mL，使樣品溶解，搖勻，密封瓶口，作為供試品溶液。根據(jù)《中國藥典(二部)》附錄ⅧP殘留溶劑限度規(guī)定(三氯甲烷0．006%，乙醇0．5%)和供試品的取樣量，確定配制對照品溶液的質(zhì)量濃度。精密稱取三氯甲烷和乙醇對照品適量，置同一容量瓶中，用水稀釋成每1 mL中含三氯甲烷約0．018 mg、乙醇約1．5 mg的溶液，再精密吸取5．0 mL，置頂空瓶中，密封瓶口，作為對照品溶液。

2．3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗:按2．1項下色譜條件，取空白溶液、定位溶液、對照品溶液及供試品溶液，分別頂空進樣測定。結(jié)果見圖1。

線性關(guān)系考察:精密稱取三氯甲烷和乙醇對照品適量，置同一容量瓶中，用水稀釋成每1 mL中含三氯甲烷約0．18 mg、乙醇約15 mg的混合溶液，再分別精密量取此混合溶液適量，加水稀釋制成每 1 mL 中約含三氯甲烷 0．018，0．036，0．072 mg 和乙醇1．5，3．0，6．0 mg 的溶液，分別精密吸取 5 mL 置頂空瓶中，密封瓶口，作為線性關(guān)系試驗溶液。按2．1項下色譜條件進樣，測定峰面積，以質(zhì)量濃度為縱坐標、相應(yīng)的峰面積為橫坐標繪制曲線。得三氯甲烷回歸方程 Y1=(3．51 E-005)X1(r1=0．999 0)，進樣質(zhì)量濃度線性范圍為 0．018～0．18 g/L;乙醇回歸方程 Y2=(1．68 E-005)X2(r2=0．999 5)，進樣質(zhì)量濃度線性范圍為 1．5 ～15 g/L。

檢出限確定:以信噪比為3∶1，依法檢測。結(jié)果三氯甲烷和乙醇的檢出限分別為0．016 mg和0．078 mg。

精密度試驗:取同一份線性關(guān)系試驗溶液(含三氯甲烷0．018 g/L，乙醇 1．5 g/L)，連續(xù)進樣 5 次。結(jié)果以主峰峰面積計算，三氯甲烷的 RSD為 6．92%(n=5)，乙醇的 RSD為 5．45%(n=5)，完全符合藥典外標法測定的規(guī)定。

加樣回收試驗:精密稱取同一批原料藥(批號為DK20-1209101)5份，每份取約1．5 g，精密稱定，置頂空瓶中，分別精密加入線性關(guān)系試驗溶液(含三氯甲烷0．018 g/L，乙醇1．5 g/L)5 mL，混合使樣品充分溶解，密封瓶口，在2．1項下色譜條件下測定含量，計算回收率。結(jié)果三氯甲烷和乙醇的平均加樣回收率分別為85%和95%，RSD分別6．35%和7．74%(n=5)。對于三氯甲烷和乙醇這種易揮發(fā)的有機溶劑，回收率能達到80%以上，就是非常理想的檢測結(jié)果。

2．4 樣品含量測定

取鹽酸左氧氟沙星原料藥(上虞京新藥業(yè)有限公司)，按2．2項下方法配制供試品溶液，在2．1項下色譜條件下測定，按外標法計算三氯甲烷和乙醇的含量(三氯甲烷不超過0．006%，乙醇不超過 0．5%)。結(jié)果批號為 DK20-1111264，DK20-1201124，DK20-1203162的3批樣品中均未檢出三氯甲烷和乙醇。

3 討論

先后選擇非極性毛細管柱Agilent DB-1及AT-1、天美TM-1作為色譜柱，預試驗結(jié)果顯示，天美TM-1色譜柱對三氯甲烷和乙醇的分離效果最佳，故選擇天美TM-1。三氯甲烷為含鹵素原子的有機溶劑，用ECD檢測器時靈敏度較高，但考慮到同一樣品的殘留溶劑三氯甲烷和乙醇要用2個系統(tǒng)，為經(jīng)濟、環(huán)保，選擇應(yīng)用范圍廣泛的FID檢測器。對于測定方法，選擇2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅧP第一法毛細管柱頂空進樣等溫法。

鹽酸左氧氟沙星極易溶于水，故以水為溶劑。依據(jù)2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅧP的規(guī)定，以水為溶劑時采用頂空進樣，水的沸點為100℃，頂空平衡溫度應(yīng)低于溶劑的沸點10℃以下的原則，再根據(jù)乙醇的沸點為78．3℃，三氯甲烷的沸點為61．2℃，先后選擇頂空瓶平衡溫度為60，80℃;流速為1，2 mL/min為氣相色譜基礎(chǔ)條件進行試驗?；诜逍巍㈧`敏度和穩(wěn)定性的考慮，最終確定用頂空瓶平衡溫度80℃、流速1 mL/min作為原料藥日常檢驗的方法。

根據(jù)2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅧP規(guī)定，毛細管柱的理論板數(shù)一般不低于5 000，分離度應(yīng)大于1．5，待測峰面積的RSD應(yīng)不大于10%[3]。采用文中建立的方法，2次試驗中理論板數(shù)都在50 000以上(是藥典規(guī)定的10倍)，分離度均在14以上(接近藥典規(guī)定的10倍)，對照品溶液連續(xù)進樣5次所得待測物峰面積的 RSD在6% ～7%(如果實驗室溫度恒定，RSD不超過3%)，完全符合藥典規(guī)定。

本試驗中建立的氣相色譜法，用于測定鹽酸左氧氟沙星原料藥中三氯甲烷的殘留，方法簡便快捷、專屬性好，可作為生產(chǎn)企業(yè)或質(zhì)量控制部門檢測水溶性好的原料藥類產(chǎn)品中殘留溶劑三氯甲烷。

[1]國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認證管理中心．藥品GMP指南[M]．北京:中國醫(yī)藥科學出版社，2011:129．

[2]伍良勇，寥泰星．GC法測定深海魚油軟膠囊中EPA和DHA的含量[J]．中國藥品標準，2011，12(5):357-360．

[3]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(二部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科學出版社，2010:附錄ⅤE，附錄ⅩⅨF．