肖婧凡，王 玥，張?jiān)d，雷霽霖

(1.華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200237；2.中國水產(chǎn)科學(xué)院黃海水產(chǎn)研究所，山東青島266071)

1 前言

21世紀(jì)人類社會(huì)面臨著“人口劇增、資源匱乏、環(huán)境惡化”三大問題的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，隨著陸地資源的日益減少及天然漁業(yè)的日漸枯竭，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)顯得日益重要。由于水土資源有限，從提高養(yǎng)殖面積來增加產(chǎn)量難以持續(xù)發(fā)展。因此，規(guī)?；?、集約化、高密度養(yǎng)殖模式逐漸成為我國海水魚類養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展主流。工廠化養(yǎng)殖模式和高密度網(wǎng)箱養(yǎng)殖模式也成為今后海水養(yǎng)殖的一個(gè)必然趨勢。

隨著海水養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，各種病害問題日益突出，對(duì)養(yǎng)殖的產(chǎn)量及成長造成嚴(yán)重影響。目前，我國的海水養(yǎng)殖水產(chǎn)動(dòng)物的病害種類達(dá)200余種，常年養(yǎng)殖病害發(fā)病率達(dá)50%以上，損失率30%左右，估計(jì)每年因水產(chǎn)養(yǎng)殖病害問題而造成的直接經(jīng)濟(jì)損失就達(dá)百億元，并且還有上升的趨勢，病害問題已成為制約海水養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的重要因素[1]。根據(jù)2006年統(tǒng)計(jì)的我國水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病種類的檢測結(jié)果可知：在128種病害中病毒性疾病17種，細(xì)菌性疾病61種，真菌性疾病4種，寄生蟲疾病28種，藻類性疾病6種，其他病害3種，不明病因9種[2]，細(xì)菌性疾病的比例約占一半。由此可見，由細(xì)菌性感染引起的養(yǎng)殖魚類病害已成為造成我國水產(chǎn)養(yǎng)殖魚種經(jīng)濟(jì)損失的一個(gè)主要原因。

2 國內(nèi)外海水養(yǎng)殖主要細(xì)菌性病害

水產(chǎn)養(yǎng)殖病害研究一直是世界各國學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)，國外對(duì)養(yǎng)殖魚類病害的研究歷史較早，也較深入，其中針對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖細(xì)菌性病害的研究占到很大比例，主要集中在造成較大經(jīng)濟(jì)損失的致病性弧菌、嗜水氣單胞菌、假單胞菌、愛德華氏菌等細(xì)菌性病原[3]。

2.1 弧菌病

弧菌病是國內(nèi)外海水養(yǎng)殖業(yè)中常見的疾病，常見的致病菌有鰻弧菌（Vibrio anguillarum）、副溶血弧菌（V.parahaemolyticus）、創(chuàng)傷弧菌（V.vulnificus）、哈維氏弧菌（V.harveyi）、溶藻弧菌（V.alginolyticus）、殺鮭弧菌（V.salmonicida）等，其中鰻弧菌是弧菌病的典型病原菌，在國內(nèi)外均對(duì)重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖品種造成嚴(yán)重的病害。殺鮭弧菌為冷水弧菌病的病原，主要出現(xiàn)在加拿大和北歐國家（主要是挪威和英國），對(duì)大馬哈魚和鱈魚養(yǎng)殖造成了很大危害[4～6]。此外，哈維氏弧菌、創(chuàng)傷弧菌及溶藻弧菌也是海水養(yǎng)殖中常見的致病菌，對(duì)花鱸魚、石斑魚、鰻鱺、對(duì)蝦和大黃魚養(yǎng)殖造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[7～9]。

2.2 愛德華氏菌病

由遲鈍愛德華氏菌(E.tarda)引起的愛德華氏菌病是一種危害巨大的魚類病害，在世界許多國家都有相關(guān)病例的報(bào)道，可感染多種魚類。目前遲鈍愛德華氏菌病已成為鰻鱺養(yǎng)殖中危害最大的一種病，2002年在中國北方大菱鲆養(yǎng)殖區(qū)出現(xiàn)E.tarda感染病例。到2004年，該病已呈頻繁暴發(fā)態(tài)勢，給大菱鲆養(yǎng)殖帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)報(bào)道，大連地區(qū)養(yǎng)殖的大菱鲆由于E.tarda感染而引發(fā)的出血性腹水病的發(fā)病率高達(dá)70%～80%，體長10～15 cm的病魚死亡率高達(dá)90%～95%[10]。

2.3 假單胞菌病

鰻敗血假單胞菌（Pseudomonas anguilliseptica）被認(rèn)為是養(yǎng)殖魚種的重要病原。該菌在1972年被描述為紅點(diǎn)病的發(fā)病病原，造成養(yǎng)殖日本鰻大量死亡[11]。此后，該菌在臺(tái)灣、蘇格蘭和丹麥的歐洲鰻的養(yǎng)殖場被報(bào)道[12]。除感染鰻魚，該菌還是大菱鲆和黑斑小鯛魚種的新發(fā)病原[13]，主要在冬季時(shí)低溫條件下發(fā)?。?6℃以下），感染此敗血癥的魚腹部膨大、表皮和內(nèi)臟出現(xiàn)出血潰瘍點(diǎn)。

2.4 細(xì)菌性腎?。╞acterial kidney disease，BKD）

BKD是由鮭魚腎桿菌（Renibacterium salmoninarum）造成的，對(duì)于淡水和海水養(yǎng)殖魚種有很高的致死率[14～16]。BKD在北美、日本、西歐和智利已有所報(bào)道，對(duì)太平洋鮭魚的經(jīng)濟(jì)效益影響尤其大。在出現(xiàn)感染的臨床癥狀前該病原菌能通過有性垂直傳播給下一代，目前主要的治療手段對(duì)此疾病都基本無效。

3 國內(nèi)外海水養(yǎng)殖品種主要病害檢測方法

針對(duì)以上養(yǎng)殖魚種主要細(xì)菌性病害，各國研究人員為開發(fā)快速、準(zhǔn)確、有效的診斷方法廣泛開展工作。筆者等將目前已報(bào)道的國內(nèi)、國外主要海水養(yǎng)殖細(xì)菌性病害檢測方法總結(jié)為以下幾種類型進(jìn)行敘述。

3.1 基于微生物生理生化檢測的方法

針對(duì)養(yǎng)殖魚種細(xì)菌性病原的檢測，最經(jīng)典的鑒定方法是對(duì)病原進(jìn)行分離純化，基于形態(tài)學(xué)檢測、生理學(xué)和通過一系列的生理生化實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物的初步鑒定[17]。然而，這種方法耗時(shí)長、操作繁瑣，不利于細(xì)菌性病害的快速診斷。法國生物梅里埃公司于1970年開發(fā)出一系列微生物鑒定用生理生化檢測試劑盒，使細(xì)菌鑒定更簡單快捷。該系列試劑盒已成為國際公認(rèn)的鑒定細(xì)菌的參考標(biāo)準(zhǔn)，目前在海水養(yǎng)殖魚類細(xì)菌性病害的診斷中，已將API系列試紙條檢測結(jié)果作為鑒定的輔助手段之一。Abdel-Aziz等[18]采用API 20NE生理生化檢測試劑盒與分子鑒定相結(jié)合，對(duì)導(dǎo)致埃及沿海養(yǎng)殖金頭鯛和歐洲海鱸大量死亡的病原進(jìn)行了鑒定，確定了溶藻弧菌、副溶血弧菌和美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種造成病害的主要病原。潘曉藝等[19]根據(jù)API20E結(jié)果結(jié)合16S rDNA和gyrB基因序列比對(duì)，確定從發(fā)病養(yǎng)殖中華鱉肝臟分離得到的一株致病菌為遲鈍愛德華氏菌。

除了API系列檢測試劑盒，針對(duì)一些特殊的細(xì)菌性病原還可以采取更為簡便的顯色培養(yǎng)技術(shù)[20]。該技術(shù)在培養(yǎng)基中加入細(xì)菌特異性酶的顯色底物，使菌落出現(xiàn)不同顏色而達(dá)到分離鑒定的目的，如硫檸膽蔗瓊脂（thiosulfate citrate bile salts sucrose agar，TCBSagar）已經(jīng)被廣泛用于霍亂弧菌和副溶血弧菌的分離鑒定。近年來還有很多新型顯色培養(yǎng)基被開發(fā)出來，如選擇性顯色弧菌培養(yǎng)基（vibriobiochrome medium，BCVM），副溶血弧菌在其上生長形成的菌落呈紫色，而其他弧菌則呈藍(lán)綠色，可以更有效的將副溶血弧菌與其他致病性弧菌區(qū)分開來。目前這種方法不僅被廣泛用于人類病原菌的初步分離鑒定，也越來越多地被應(yīng)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)病害檢測中。

3.2 基于分子生物學(xué)技術(shù)的檢測方法

基于分子生物學(xué)技術(shù)的養(yǎng)殖魚類細(xì)菌性病害的檢測方法在已有報(bào)道文獻(xiàn)中占到50%以上，該方法與傳統(tǒng)的生理生化檢測方法相比簡潔、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)，可用于細(xì)菌性病害疾病的預(yù)警和診斷。

3.2.1 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)

聚合酶鏈反應(yīng)或稱多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)，是根據(jù)生物信息學(xué)等方法尋找特定病原菌特異性基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，擴(kuò)增后產(chǎn)生特異性片段從而達(dá)到檢測病原菌的目的[21]。目前多數(shù)文獻(xiàn)針對(duì)不同細(xì)菌性病害的特異性基因序列設(shè)計(jì)引物，建立了靈敏有效的檢測方法。Pinto等[22]以toxR，tlh，tdh和trh作為目的基因?qū)崿F(xiàn)了副溶血弧菌的檢測；Lee等[23]以創(chuàng)傷弧菌溶血素為靶標(biāo)，設(shè)計(jì)特異性引物建立其PCR檢測方法。隨著PCR技術(shù)的成熟，基于多種病菌的同時(shí)檢測的多重PCR技術(shù)逐漸發(fā)展起來。Kong等[24]建立了一種以嗜水氣單胞菌的氣單胞菌溶素基因、弗氏志賀菌ipaH基因、鼠傷寒沙門氏菌ipaB基因、霍亂弧菌epsM基因和副溶血弧菌16 S-23 S rDNA為目標(biāo)基因，設(shè)計(jì)六對(duì)擴(kuò)增后可產(chǎn)生6種不同長度的片段的特異性引物來快速同時(shí)檢測水產(chǎn)品中這6種致病菌。此檢測方法可在12 h內(nèi)完成，檢測限可以達(dá)到100～102CFU/m L。

3.2.2 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（loop-mediated isothermal amplification， LAMP）

由于傳統(tǒng)的PCR技術(shù)需要精確控制擴(kuò)增反應(yīng)各階段溫度，一定程度上限制了其在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用。Notomi等[25]于2000年提出的一種只需在恒溫條件下就可以進(jìn)行核酸擴(kuò)增的LAMP技術(shù)。LAMP通過設(shè)計(jì)兩對(duì)特別的引物（內(nèi)引物和外引物）在一種有鏈置換活性的DNA聚合酶作用下進(jìn)行的一種自動(dòng)鏈置換DNA合成反應(yīng)。因?yàn)镈NA在65℃左右處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，任何一個(gè)引物向雙鏈DNA的互補(bǔ)部位進(jìn)行堿基配對(duì)延伸時(shí)，另一條鏈就會(huì)解離成為單鏈，所以該技術(shù)在恒溫下就可以進(jìn)行核酸擴(kuò)增[26]，已被用于多種水產(chǎn)養(yǎng)殖細(xì)菌性病害的檢測。Yeh等[27]根據(jù)鯰魚愛德華氏菌eip18基因設(shè)計(jì)引物進(jìn)行LAMP擴(kuò)增，在65℃反應(yīng)60m in后可得到鯰魚愛德華氏菌基因特異性條帶，檢測限可達(dá)到20 CFU/m L，可以從養(yǎng)殖水體樣本中實(shí)現(xiàn)鯰魚愛德華氏菌的檢出。Surasilp等[28]將LAMP與橫向流動(dòng)試紙條分析相結(jié)合，以rpoS基因?yàn)榘谢蚪⒘艘环NLAMP-LFD方法來檢測創(chuàng)傷弧菌，對(duì)于純培養(yǎng)檢測限可達(dá)到1.5×103CFU/m L。

3.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)（quantitative real-time polymerase chain reaction， qRT-PCR）

qRT-PCR目前也被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖病害的定量檢測。該技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好，可同時(shí)檢測同一樣本中不同靶序列。Blackstone等[29]以TaqMan探針為基礎(chǔ)，采用qRT-PCR技術(shù)以副溶血弧菌特異性tdh基因來檢測副溶血弧菌，檢測限可達(dá)到每PCR體系1 CFU。Panicker等[30]針對(duì)vvh基因設(shè)計(jì)寡核苷酸引物，建立了以SYBRGreen I染料為基礎(chǔ)的qRT-PCR快速、特異性地檢測牡蠣組織勻漿和墨西哥灣水體中的創(chuàng)傷弧菌。該方法對(duì)于純基因組DNA的最低檢測量為1 pg，水體中檢測限可達(dá)10CFU/m L。許龍巖等[31]根據(jù)副溶血弧菌toxR基因和tdh基因設(shè)計(jì)引物對(duì)副溶血弧菌建立了一種基于TaqMan探針的雙重?zé)晒釶CR檢測法。該方法具有良好的特異性，水體中常見非副溶血弧菌細(xì)菌均呈陰性，副溶血弧菌的菌濃度與Ct值的反向線性關(guān)系良好，檢測限為3.6×102CFU/m L。

3.2.4 基因探針技術(shù)

自1975年DNA探針雜交技術(shù)被首次提出，基因探針技術(shù)已得到了很大的進(jìn)步和發(fā)展。該技術(shù)的基本依據(jù)是核酸雜交，針對(duì)決定病原菌生物體特性的DNA序列設(shè)計(jì)特異性標(biāo)記的DNA或RNA探針，就可以通過樣品與探針雜交是否形成雜交分子來檢測是否存在目標(biāo)病原菌?；蛱结樀臉?biāo)記方法主要有放射性標(biāo)記法和非放射性標(biāo)記法兩種。目前常用的標(biāo)記物為堿性磷酸酶（AP）和地高辛（DIG）。該技術(shù)除用于人類病原診斷，也被用于水產(chǎn)養(yǎng)殖病原檢測中。周鳳麗等[32]針對(duì)溶藻弧菌膠原蛋白酶基因和外膜蛋白基因設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物對(duì)溶藻弧菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物以DIG標(biāo)記制備基因探針用于檢測溶藻弧菌，發(fā)現(xiàn)膠原蛋白酶基因探針有較高特異性，可用于對(duì)溶藻弧菌的檢測鑒定分析。Raghunath等[33]用AP來標(biāo)記基因探針檢測海洋食品中的trh+副溶血弧菌，對(duì)40株副溶血弧菌、45株其他弧菌和55株非弧菌進(jìn)行探針雜交，特異性達(dá)100%，檢測限達(dá)到5.0×102～3.4×103CFU/g。

3.3 基于免疫學(xué)相關(guān)技術(shù)的檢測方法

除分子生物學(xué)技術(shù)外，免疫學(xué)相關(guān)技術(shù)也被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖品種病害診斷?；诿庖邔W(xué)相關(guān)的檢測方法利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，目前應(yīng)用較多的有酶聯(lián)免疫吸附法和免疫層析技術(shù)。

3.3.1 酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）

ELISA技術(shù)最早出現(xiàn)于1971年，該技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體特異性反應(yīng)，常用的ELISA方法有競爭法測抗原、間接法測抗體和雙抗體夾心法，其特異性取決于抗體的特異性[34]。Sm ith等[35]最早將ELISA應(yīng)用于魚癤病的診斷，靈敏度達(dá)102CFU/m L。Kumar等[36]建立了快速檢測水產(chǎn)品中副溶血弧菌的ELISA方法。吳曉春等[37]以魚腸道弧菌為抗原制備多克隆抗體，用ELISA法來檢測對(duì)海水魚造成危害的弧菌屬致病菌，靈敏度可達(dá)到每孔105CFU/m L。

3.3.2 免疫層析技術(shù)

傳統(tǒng)ELISA技術(shù)操作繁瑣、耗時(shí)長，限制了其在養(yǎng)殖場現(xiàn)場檢測中的應(yīng)用。目前，研究工作者將免疫層析技術(shù)應(yīng)用于快速檢測，如側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)(lateral-flow technology，LFT)被用于快速檢測試紙條的研發(fā)。與傳統(tǒng)檢測方法相比，該檢測技術(shù)具有快速、簡便、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)。LFT的原理與ELISA相似，以固定了捕獲蛋白(通常為抗體或抗原)的硝酸纖維素膜作為基板，采用乳膠、膠體金、碳以及新型材料(上轉(zhuǎn)磷光或量子點(diǎn))作為標(biāo)記物對(duì)抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，其檢測結(jié)果可以用肉眼直接觀測。目前已商業(yè)化用于診斷的免疫層析試紙產(chǎn)品大多為以納米級(jí)膠體金顆粒為標(biāo)記材料。此技術(shù)操作簡便，一般5～15min就可得到結(jié)果，已廣泛用于藥殘檢測、食品安全、臨床診斷中，也有用于水產(chǎn)養(yǎng)殖品種病害檢測的報(bào)道。Sithigorngul等[38]制備了抗哈維氏弧菌的鼠單克隆抗體和羊多克隆抗體，將這兩種抗體用于膠體金免疫層析試紙條的制備，結(jié)果表明樣品檢測量只需100μL，針對(duì)哈維氏弧菌的檢測限可達(dá)106CFU/m L以上，而檢測時(shí)間小于15m in。秦璞等[39]利用膠體金免疫層析技術(shù)研制了一種快速檢測遲鈍愛德華氏菌的試紙條，該試紙條對(duì)遲鈍愛德華氏菌有良好特異性，5～10m in就可以得到檢測結(jié)果，敏感度達(dá)到105CFU/m L。

近年來，出現(xiàn)了基于新型材料和免疫層析技術(shù)，如目前報(bào)道較多的有量子點(diǎn)（quantum dots，QDs）、上轉(zhuǎn)磷光（up-converting phosphor，UCP）、納米磁珠、熒光微球等標(biāo)記抗體的免疫層析。其中量子點(diǎn)與抗體偶聯(lián)后用于免疫層析顯示出良好的穩(wěn)定性和熒光強(qiáng)度，在人類病原菌檢測上已經(jīng)有所應(yīng)用。Tully等[40]初步建立了一種以量子點(diǎn)標(biāo)記抗體檢測李斯特單增桿菌（Listeria monocytogenes）表面蛋白InlB，檢測限可以達(dá)到12 ng/m L。上轉(zhuǎn)磷光材料則因其背景干擾小、靈敏度高等特點(diǎn)，被應(yīng)用于耶爾森氏菌和布魯氏菌[41，42]的檢測中，其靈敏度是膠體金免疫層析技術(shù)的10倍。目前，以上新型材料還未見用于魚類病原菌檢測的報(bào)道，但這些材料在未來檢測試紙條研制中顯示出良好的應(yīng)用前景。

3.4 芯片技術(shù)

隨著近年來生物芯片技術(shù)的發(fā)展，以及病害檢測對(duì)大規(guī)模、高通量的要求，芯片技術(shù)越來越多被用到病原菌的檢測中。其中，應(yīng)用最多的是基因芯片和蛋白芯片技術(shù)?；蛐酒夹g(shù)可以高通量、平行化對(duì)多種靶基因進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定，為菌種鑒定提供了技術(shù)平臺(tái)。Panicker等[43]也通過多重PCR與DNA芯片相結(jié)合建立了一種主要針對(duì)創(chuàng)傷弧菌、霍亂弧菌和副溶血弧菌檢測沿海水域和甲殼類動(dòng)物中的致病弧菌的方法，檢測靈敏度為102～103CFU/m L。

蛋白芯片又稱蛋白微陣列，蛋白芯片是將各蛋白有序排列固定在載體上，之后用特異性標(biāo)記的抗體或抗原蛋白與微陣列作用，經(jīng)過掃描后確定蛋白間是否有相互作用。與基因芯片相比，蛋白芯片的研究仍處于摸索階段。究其原因是由于蛋白質(zhì)分子本身結(jié)構(gòu)功能的復(fù)雜性與特殊性造成的。目前蛋白芯片用于水產(chǎn)養(yǎng)殖細(xì)菌性病害檢測的報(bào)道較少。

4 現(xiàn)有海水養(yǎng)殖細(xì)菌性病害檢測方法的利弊及發(fā)展方向

綜上所述，目前已報(bào)道多種海水養(yǎng)殖細(xì)菌性病害的檢測方法，這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，相比較而言，基于細(xì)菌富集培養(yǎng)及生理生化指標(biāo)檢測的方法耗時(shí)、費(fèi)力、精度和可靠性有限；基于分子生物學(xué)技術(shù)的檢測方法雖然靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速準(zhǔn)確，能夠檢測出樣品中的微量核酸，但是需要特定儀器設(shè)備并由專業(yè)技術(shù)人員操作，無法應(yīng)用于基層養(yǎng)殖單位；基于免疫學(xué)技術(shù)ELISA檢測方法操作流程耗時(shí)繁瑣，無法實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的實(shí)時(shí)檢測。目前廣泛采用的膠體金免疫層析技術(shù)雖然操作簡便、耗時(shí)短、不需要專業(yè)技術(shù)人員操作，可以用于基層養(yǎng)殖場現(xiàn)場檢測，但靈敏度不夠高，導(dǎo)致一些發(fā)病癥狀不明顯或特異的病害無法在感染初期檢出并采取有效措施；基因芯片可高通量并行檢測，人為操作的誤差小，然而也存在價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)。蛋白芯片技術(shù)雖然有著高特異性、高通量的特點(diǎn)，然而蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，合成困難，且蛋白較DNA更脆弱，易變性失活從而影響其性質(zhì)和功能。

如何選擇有效的水產(chǎn)病害檢測方法，應(yīng)根據(jù)施用單位的情況而異。對(duì)于具有一定實(shí)驗(yàn)室條件的水產(chǎn)品檢驗(yàn)檢疫單位或大型養(yǎng)殖企業(yè)，可以采用分子生物學(xué)技術(shù)，輔助以生理生化檢測手段，實(shí)現(xiàn)常規(guī)樣品的檢測。對(duì)于大量樣品，則可采用芯片技術(shù)進(jìn)行高通量檢測，用于病害預(yù)警或附加值較高的水產(chǎn)品食品安全檢測。由于芯片制備復(fù)雜且檢測設(shè)備成本較高，影響了該技術(shù)的推廣。開發(fā)低成本芯片制備技術(shù)同時(shí)降低檢測設(shè)備成本是今后的發(fā)展方向。針對(duì)基層養(yǎng)殖單位或個(gè)體養(yǎng)殖戶，免疫層析試紙條因其操作簡單快速，攜帶方便而顯示出極大的優(yōu)勢，但該技術(shù)靈敏度有限，無法實(shí)現(xiàn)病害感染早期診斷，限制了其在海水養(yǎng)殖細(xì)菌性病害檢測方面的進(jìn)一步應(yīng)用。制備具有更好親和力的單克隆抗體，采用新型抗體標(biāo)記材料配合相應(yīng)的便攜式熒光讀取器，不僅有助于免疫層析試紙條靈敏度的提高，還可以用于病害的半定量分析及多元化檢驗(yàn)。目前已有研究人員研制出靈敏度是膠體金免疫層析試紙條10～100倍的免疫層析試紙條，雖然還處于實(shí)驗(yàn)室階段，且生產(chǎn)成本還有待進(jìn)一步降低，但相信未來此類產(chǎn)品將成為廣大養(yǎng)殖基層單位病害檢測的主流產(chǎn)品。

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