楊廣東 任淵 張蓉

1.南方醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510665；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬奉賢醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 201499；3.江蘇省常州市婦幼保健院婦產(chǎn)科，江蘇 常州 213003

SERPINA3在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)上調(diào)的臨床意義及功能研究

楊廣東1,2 任淵3 張蓉1,2

1.南方醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510665；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬奉賢醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 201499；3.江蘇省常州市婦幼保健院婦產(chǎn)科，江蘇 常州 213003

背景與目的：SERPINA3是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族的一員，已有研究證實(shí)其在多種腫瘤細(xì)胞中異常表達(dá)。然而，它在子宮內(nèi)膜癌中生物學(xué)功能及臨床意義尚不清楚。本研究旨在探討SERPINA3在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的功能和子宮內(nèi)膜癌預(yù)后評估中的價(jià)值。方法：①收集20對子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織，用實(shí)時(shí)定量PCR(quantitative real-time PCR)檢測SERPINA3 mRNA在內(nèi)膜組織中表達(dá)情況；②使用免疫組化方法，檢測組織芯片(子宮內(nèi)膜癌81例和正常對照37例)的SERPINA3表達(dá)情況，依據(jù)染色結(jié)果，用SPSS軟件分析SERPINA3與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征之間的關(guān)系；③檢測5株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中SERPINA3的表達(dá)情況，選取表達(dá)量最高的HEC-1A細(xì)胞，利用小片段干擾RNA(small interfering RNA)干擾SERPINA3基因在HEC-1A細(xì)胞中的表達(dá)；④蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)和qPCR檢測干擾后HEC-1A中SERPINA3基因在mRNA和蛋白水平表達(dá)情況，細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的變化。結(jié)果：①SERPINA3 mRNA在內(nèi)膜癌中表達(dá)明顯高于對照內(nèi)膜組織(n=20，P＜0.05)；②免疫組化結(jié)果顯示SERPINA3在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)水平高于正常子宮內(nèi)膜組織(P＜0.001)。SERPINA3的表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期、腫瘤細(xì)胞級別、脈管浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；③干擾SERPINA3組細(xì)胞遷移能力顯著減弱。結(jié)論：SERPINA3基因在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)顯著上調(diào)，可能與子宮內(nèi)膜癌的侵襲和轉(zhuǎn)移等相關(guān)。SERPINA3有望成為評估子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物，并可能作為子宮內(nèi)膜癌生物靶向治療的靶標(biāo)之一。

SERPINA3；子宮內(nèi)膜癌；組織微陣列；小干擾RNA干擾；遷移

Migration

子宮內(nèi)膜癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于乳腺癌、肺癌及結(jié)直腸腫瘤，目前認(rèn)為與生活方式密切相關(guān)［1］。在北美，僅美國2010年就約有43 470新發(fā)患者和7 950死亡患者，位居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之首［2］。在我國，隨著社會(huì)的發(fā)展和經(jīng)濟(jì)條件的改善，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率亦逐年升高，目前僅次于宮頸癌，居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第2位。SERPINA3是屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑家族A亞型，由423個(gè)氨基酸組成，包括一個(gè)位于氮端的信號(hào)肽以及一個(gè)具有絲氨酸蛋白酶抑制劑活性的serpin結(jié)構(gòu)域；有多個(gè)糖基化位點(diǎn)，總相對分子質(zhì)量為55×103～66×103［3］。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，SERPINA3與炎性反應(yīng)、阿爾茨海默氏病、惡性黑色素瘤、胃癌以及結(jié)腸癌等相關(guān)［4］。SERPINA3還能夠進(jìn)入細(xì)胞核與DNA結(jié)合促進(jìn)染色質(zhì)濃縮，抑制細(xì)胞分裂，進(jìn)而阻滯細(xì)胞增殖［5］。為探尋子宮內(nèi)膜癌新的治療靶標(biāo)提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要試劑

子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞A N 3 C A、K L E、Ishiakawa、HEC-1A和ECC-1購于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心；siRNA瞬轉(zhuǎn)片段及RNAi Mate轉(zhuǎn)染試劑購于上海吉瑪公司；TRIzol購于美國Invitrogen公司；RNA提取試劑盒，購于德國Qiagen公司；Prime Script RT reagent Kit SYBR Premix Ex Taq試劑盒購于Takara公司(大連寶生物)； SERPINA3兔抗人多克隆抗體和GAPDH鼠抗人單克隆抗體分別購于Abcam和Proteintech公司；山羊抗兔二抗購于武漢博士德公司；IRDye 800兔二抗和IRDye 680鼠二抗購于美國LI-COR公司；細(xì)胞培養(yǎng)DMEM/F12培養(yǎng)基、McCoy’5A培養(yǎng)基、PRMI-1640培養(yǎng)基、Opti-MEM培養(yǎng)基、胎牛血清以及胰蛋白酶購于美國GIBCO公司。Transwell小室購于德國Millipore公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

AN3CA、KLE、Ishikawa細(xì)胞培養(yǎng)在DMEM/F12培養(yǎng)基；HEC-1A細(xì)胞培養(yǎng)于McCoy’5A培養(yǎng)基，ECC-1細(xì)胞培養(yǎng)于PRMI-1640培養(yǎng)基，所有細(xì)胞培養(yǎng)基中都含有10% (V/V)胎牛血清(FBS)，100 U/mL的青霉素和100μg/mL的鏈霉素，在37 ℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為5%，100%濕度培養(yǎng)箱中溫育。

1.3 標(biāo)本收集

收集2007年10月—3013年5月在南方醫(yī)科大學(xué)附屬奉賢醫(yī)院和常州婦幼保健院的81例子宮內(nèi)膜癌組織和37例同期因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)的正常內(nèi)膜組織石蠟標(biāo)本，用于構(gòu)建組織芯片，其各取20例子宮內(nèi)膜癌和正常內(nèi)膜新鮮組織標(biāo)本用于提取總RNA，本研究選擇的子宮內(nèi)膜癌患者均有隨訪信息和臨床數(shù)據(jù)完整。所有子宮內(nèi)膜癌患者均接受改良根治性子宮切除術(shù)或全子宮切除術(shù)，聯(lián)合雙側(cè)輸卵管、卵巢切除和盆腔淋巴結(jié)清掃，有或無腹主動(dòng)脈旁淋巴結(jié)取樣，手術(shù)前均未接受過放化療，激素治療或其他相關(guān)的抗腫瘤治療。同期因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)的正常增生期子宮內(nèi)膜(15例)和分泌期子宮內(nèi)膜(22例)石蠟標(biāo)本和各10例新鮮組織被選為對照組。新鮮標(biāo)本離體后迅速至于液氮中，-80 ℃保存。子宮內(nèi)膜癌的診斷和組織學(xué)分類采用國際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(FIGO)分期標(biāo)準(zhǔn)和世界衛(wèi)生組織(WTO)提出腫瘤分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行?；颊叩呐R床資料和特征見表1。組織標(biāo)本的收集經(jīng)患者簽署知情同意書，并通過2所醫(yī)院人體研究倫理委員會(huì)審核許可。

表1 內(nèi)膜癌患者及正常子宮內(nèi)膜基本臨床信息Tab. 1 Clinical characteristics of normal endometrial tissues and patients with endometrial cancer

1.4 組織芯片的構(gòu)建

選取并標(biāo)記HE切片上具有代表性的腫瘤區(qū)域、正常內(nèi)膜組織相應(yīng)蠟塊，腫瘤組織，正常對照每例選取2個(gè)點(diǎn)。將所需的靶組織用直徑1.0 mm的吸針從供體蠟塊靶區(qū)取出，按芯片設(shè)計(jì)的排列順序定位裝載在受體蠟塊中。受體蠟塊連續(xù)4 μm切片備用。

1.5 免疫組織化學(xué)染色

白片經(jīng)70 ℃烤制1 h，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化至蒸餾水后行抗原修復(fù)，0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH=6.0) 100 ℃抗原修復(fù)10 min。1∶50稀釋的SERPINA3兔抗人多克隆抗體，4 ℃溫育過夜，1∶200山羊抗兔二抗室溫溫育1 h，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片。評分標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞所占百分比評分：陽性細(xì)胞0～10%為0分，陽性細(xì)胞＞l0%～30%為1分，陽性細(xì)胞＞30%～60%為2分，陽性細(xì)胞＞60%為3分。腫瘤2個(gè)點(diǎn)染色不一致時(shí)以高評分為準(zhǔn)。由2名病理醫(yī)師雙盲閱片和評分，結(jié)果一致者為最后判定結(jié)果。將結(jié)果分為2組：0～1分為低表達(dá)，2～3分的為高表達(dá)。

1.6 實(shí)時(shí)定量PCR

使用TRIzol試劑提取細(xì)胞和組織中總RNA，根據(jù)制造商的說明書通過PrimeScript RT試劑盒通過反向逆轉(zhuǎn)錄PCR(rt-PCR)獲得cDNA，反應(yīng)條件為37 ℃，30 min；85 ℃，5 s。隨后用ABI7300儀上進(jìn)行實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(real-time PCR)。引物如下：SERPINA3基因上游引物5’-TGCCAGCGCACTCTTCATC-3’，下游引物5’-TGTCGTTCAGGTTATAGTCCC TC-3’；GAPDH基因上游引物5’- TGCGAG TACTCAACACCAACA-3’，下游引物5’-GCATA TCTTCGGCCCACA-3’。兩步法PCR擴(kuò)增總反應(yīng)體系20 μL，各管分別含GAPDH或SERPINA3上下游引物0.8 μL，cDNA 7.6 μL，SYBR Premix Ex TaqTM(2×)10 μL，Rox Reference Dye(50×) 0.4 μL；PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，60 ℃退火31 s，40個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增過程、熒光信號(hào)檢查、數(shù)據(jù)儲(chǔ)存和分析均由ABI7300型PCR儀自帶軟件自動(dòng)完成，所獲數(shù)據(jù)導(dǎo)至Excle進(jìn)行計(jì)算和分析。

1.7 蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測

收集細(xì)胞，以含有100 μmol/L PMSF的細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，4 ℃，12 000 r/min離心15 min，取上清液采用Bradford法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。取50 μg蛋白上樣，經(jīng)10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，5%脫脂奶37 ℃ 封閉1 h，分別加1∶500稀釋的SERPINA3抗體和1∶10 000稀釋的GAPDH抗體4℃過夜，1∶10 000稀釋的IRDye 800兔二抗或1∶20 000稀釋的IRDye 680鼠二抗在室溫溫育1 h后，由Odyssey紅外成像系統(tǒng)檢測。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8 瞬轉(zhuǎn)干擾細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)

HEC-1A細(xì)胞生長至80%融合時(shí)傳代。轉(zhuǎn)染前l(fā) d，將對數(shù)生長期的細(xì)胞(1×105)接種于6孔培養(yǎng)板，每孔所加培養(yǎng)基為1.5 mL。轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞匯合率為40%～50%。每個(gè)細(xì)胞收集時(shí)間點(diǎn)設(shè)3個(gè)平行孔。配制工作母液：在含有的雙鏈siRNA干粉中加入125 μL的DEPC水，得到濃度為20 μmol/L的siRNA母液。將RNAi Mate試劑輕柔搖勻，取5 μL RNAi Mate試劑和20 μmol/L的siRNA母液分別與50 μL Opti-MEM混合。把稀釋后的siRNA與稀釋后的RNAi Mate進(jìn)行混合，形成siRNA與RNAi Mate稀釋液的轉(zhuǎn)染復(fù)合物，混合液加入培養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)6～8h換液。

1.9 Transwell小室體外遷移實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞轉(zhuǎn)染24 h后，胰酶消化，用無血清的DMEM/F12空培配制成4×105/mL的細(xì)胞懸液。將微孔直徑為8 μm的Transwell細(xì)胞趨化小室置于24孔板中，上室種入100 μL細(xì)胞濃度為4×105/mL細(xì)胞懸液，下室周圍加0.7 mL含10%血清的DMEM/F12培養(yǎng)基。每種細(xì)胞設(shè)3個(gè)復(fù)孔，常規(guī)培養(yǎng)24 h后取出小室，棉簽小心拭去濾膜上層剩余細(xì)胞，4%多聚甲醛固定30 min，晾干后，1%結(jié)晶紫染色30 min。取下微孔濾膜，反面朝上，用中性樹膠固定于載玻片上。200倍光鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野計(jì)數(shù)膜背面的穿膜細(xì)胞，取平均數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，F(xiàn)isher確切概率法以及 t 檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)如需描述均以表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 SERPINA3基因在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)上調(diào)

實(shí)時(shí)定量PCR檢測20例正常子宮內(nèi)膜組織和20例子宮內(nèi)膜癌組織中SERPINA3基因表達(dá)差異情況，結(jié)果顯示在mRNA水平上，SERPINA3 mRNA在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織(P＜0.05，圖1)。

2.2 SERPINA3與子宮內(nèi)膜癌病理分級、臨床分期、脈管浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)

免疫組化檢測結(jié)果顯示，SERPINA3在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織(P＜0.05，表2、圖2)。分析SERPINA3表達(dá)情況與內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)SERPINA3的表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌病理分級、臨床分期、脈管浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有密切的相關(guān)性(表2)。在Ⅰ期內(nèi)膜癌患者中SERPINA3高表達(dá)的患者約占35.8%(n=53)，而在Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者中，分別高達(dá)71.4%(n=14)和92.8%(n=14)，三者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，表明SERPINA3表達(dá)升高與腫瘤的進(jìn)展相關(guān)；在低分化的內(nèi)膜癌(G3)中SERPINA3表達(dá)明顯高于高分化的內(nèi)膜癌組織(G1)，SERPINA3高表達(dá)比率分別為69.6%(n=23)和36.8%(n=19)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.034)。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中SERPINA3均為高表達(dá)(n=6)，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中明顯降低，為48%(n=75)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026)。有脈管癌栓的患者中SERPINA3高表達(dá)率達(dá)81.8%(n=11)，而未發(fā)生脈管浸潤的為47.1%(n=70)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.049)。

2.3 SERPINA3 mRNA在內(nèi)膜細(xì)胞系中表達(dá)水平檢測及小片段干擾RNA干擾效率驗(yàn)證結(jié)果

為了進(jìn)一步研究SERPINA3在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況，選擇AN3CA、KLE、Ishiakawa、HEC-1-A和ECC-1，5株常用的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株，利用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測其SERPINA3 mRNA表達(dá)情況。結(jié)果顯示，HEC-1A細(xì)胞中SERPINA3 mRNA的表達(dá)最高(圖3A)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測，含3條SERPINA3特異小片段干擾RNA(siRNA)轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A后SERPINA3基因的mRNA水平表達(dá)變化。采用公式2-ΔΔCT值計(jì)算，設(shè)轉(zhuǎn)染無義片段的HEC-1A細(xì)胞(對照組)SERPINA3基因表達(dá)量為1，則2-ΔΔCT為轉(zhuǎn)染后SERPINA3基因較未轉(zhuǎn)染基因表達(dá)量的倍數(shù)，發(fā)現(xiàn)siRNA1組、siRNA2組、siRNA3組，SERPINA3 mRNA的表達(dá)量分別為27%、15%和20%(圖3B)。說明3條SERPINA3基因特異小片段干擾序列對SERPINA3基因均有抑制作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot檢測結(jié)果顯示，3對siRNA片段均能顯著下調(diào)HEC-1A細(xì)胞SERPINA3蛋白表達(dá)水平(圖3C)。在隨后的實(shí)驗(yàn)中選用siRNA2和siRNA3作為干擾組。

2.5 干擾SERPINA3基因后HEC-1A細(xì)胞遷移能力明顯減弱

懸浮于上室無血清空培中的腫瘤細(xì)胞為了逃避凋亡，向含有10%血清的完全培養(yǎng)基方向移動(dòng)，以24 h內(nèi)穿過Transwell小室膜細(xì)胞數(shù)表示細(xì)胞的體外遷移能力。結(jié)晶紫染色后鏡下可見穿膜細(xì)胞核呈藍(lán)色，實(shí)驗(yàn)組穿膜細(xì)胞數(shù)量明顯較對照組少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。表明轉(zhuǎn)染siRNA靶向干擾SERPINA3后，HEC-1A細(xì)胞遷移能力明顯降低(圖4)。

圖1 20對正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織SERPINA3表達(dá)分析Fig. 1 SERPINA3 expression was analyzed in 20 pairs of normal endometrial and endometrial cancer tissues

表2 SERPINA3表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征關(guān)系分析Tab. 2 Association of SERPINA3 expression level with the clinical parameters

圖2 免疫組化檢測正常內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中SERPINA3表達(dá)(SP法，組織芯片)Fig. 2 Immunohistochemical detection of normal endometrium and endometrial carcinoma SERPINA3 expression (SP method, tissue microarray)

圖3 5株內(nèi)膜癌細(xì)胞系SERPINA3表達(dá)情況及瞬轉(zhuǎn)干擾HEC-1A細(xì)胞SERPINA3表達(dá)效率驗(yàn)證Fig. 3 The expression of SERPINA3 in 5 endometrial cancer cell lines and evaluate the ef fi ciency of interference in HEC-1A cells

圖4 SERPINA3對HEC-1A細(xì)胞遷移能力的影響Fig. 4 SERPINA3 impact on migration of HEC-1A cells

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌是世界范圍內(nèi)女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。在歐盟國家，每年有81 500例新發(fā)患者，全球范圍內(nèi)，子宮內(nèi)膜癌在女性惡性腫瘤中列第7位［6-7］。雖然女性早期子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后相對較好，但仍然有部分患者因復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移而導(dǎo)致預(yù)后不良，而且子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率上升且呈低齡化趨勢［8］。我們迫切需要進(jìn)一步研究子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制為臨床治療提供有益的指導(dǎo)。在國內(nèi)，關(guān)于SERPINA3與子宮內(nèi)膜癌發(fā)病相關(guān)的研究性文章還鮮有報(bào)道。本研究結(jié)果證實(shí)，SERPINA3在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，而且體外細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)也與此一致。

SERPINA3表達(dá)于各種腫瘤細(xì)胞中，如：乳腺癌、胃癌、肝癌、前列腺癌、唾液腺腺腫瘤以及肺腺癌，但SERPINA3在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用尚不清楚［9］。本研究通過組織芯片篩查，發(fā)現(xiàn)SEPINA3在內(nèi)膜癌中表達(dá)顯著高于正常內(nèi)膜組織。進(jìn)一步分析其與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)臨床病理特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)SERPINA3與子宮內(nèi)膜癌病理分級、臨床分期、脈管癌栓和淋巴轉(zhuǎn)移等運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)，通過siRNA干擾SERPINA3表達(dá)后細(xì)胞遷移能力明顯降低。

最近的一些研究其他類型的腫瘤都支持高SERPINA3是不良預(yù)后的標(biāo)志物：例如SERPINA3作為炎性反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上的蛋白之一，在復(fù)發(fā)性卵巢腫瘤中表達(dá)上調(diào)，可能在卵巢癌的進(jìn)展和化療耐藥中發(fā)揮重要作用［10］；有研究顯示在人胎盤疾病中SERPINA3表達(dá)上調(diào)與基因的5’區(qū)域的甲基化相關(guān)，研究者通過在絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞中過表達(dá)SERPINA3后觀察到細(xì)胞免于凋亡［11］；此外，已發(fā)現(xiàn)肝癌、胰腺癌和前列腺癌患者血漿SERPINA3的含量增高［12-13］。

子宮內(nèi)膜癌仍然是一個(gè)缺乏有針對性治療的惡性腫瘤。雖然早期子宮內(nèi)膜癌子宮切除后，為一部分內(nèi)膜癌患者提供了治愈的可能，然而子宮內(nèi)膜癌患者總生存率并沒有顯著改善［14］。有效的生物靶向治療將可能提高部分內(nèi)膜癌患者的生存時(shí)間和延長復(fù)發(fā)時(shí)間［15］。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管浸潤是子宮內(nèi)膜癌獨(dú)立的預(yù)后因素［16-17］，本研究結(jié)果還證實(shí)SERPINA3與之密切相關(guān)。由此推測SERPINA3可能是子宮內(nèi)膜癌預(yù)后不良的標(biāo)志物。

總之，SERPINA3有望成為評估子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物，并可作為子宮內(nèi)膜癌生物靶向治療的靶標(biāo)之一。

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Identify effect of SERPINA3 up-regulated expression in endometrial cancer

YANG Guang-dong1,2, REN Yuan3, ZHANG Rong1,2(1. Third Clinical Medical College of Southern Medical University, Guangzhou Guangdong 510665, China; 2. Department of Obstetrics and Gynecology, Fengxian Hospital, Southern Medical University, Shanghai 201499, China; 3. Department of Obstetrics and Gynecology, Changzhou Maternal and Child Care Hospital, Changzhou Jiangsu 213003, China)

ZHANG Rong E-mail: rongzhang@163.com

Background and purpose:SERPINA3 is a protease inhibitor, belonging to the serpin super family. It has been reported that SERPINA3 expression up-regulated in various tumor cells. However, its clinical significance and biological function in endometrial cancer remains unclear. This study was aimed to investigate the effect and prognosis value of up-regulated SERPINA3 (α1-ACT) in endometrial cancer.Methods:①We collected 20 pairs of endometrial carcinoma and normal endometrial tissues then extracted total RNA, detected SERPINA3 mRNA expression by quantitative real-time PCR; ②Immunohistochemistry was used to detect the expression of SERPINA3 in tissue chip which contained 81 endometrial cancer tissue samples and 37 normal controls endometrial tissues, based on the results, using SPSS software to analyze the relationship between SERPINA3 expression with clinicopathological features of endometrial cancer;③The highest SERPINA3 expression was selected from 5 endometrial cancer cells, then small interfering RNA targeted interference SERPINA3 gene expression; ④With real-time quantitative PCR and Western blotmethods, we detected SERPINA3 gene expression in mRNA and protein levels after interference, at last, analyzed cell motility by cell migration assay.Results:①SERPINA3 mRNA expression in endometrial carcinoma was signi fi cantly higher than the control endometrial tissue (n=20, P＜0.05); ②Immunohistochemistry also showed SERPINA3 expression in endometrial carcinoma higher than in normal endometrial tissues (P＜0.001). The analysis showed that between the expression level of SERPINA3 with endometrial cancer clinical stage, tumor differentiation, vascular invasion, lymph node metastasis, there was a close correlation (P＜0.05); ③Interference expression of SERPINA3, endometrial cancer cells migration was signi fi cantly reduced.Conclusion:SERPINA3 gene expression in endometrial carcinoma was signi fi cantly increased and correlated with endometrial cancer invasion and metastasis; SERPINA3 is expected to become the pathological marker of diagnosis and determination in the prognosis of endometrial cancer. It may be used as one of the biological target of endometrial cancer targeted therapy.

SERPINA3; Endometrial cancer; Tissue microarrayer; Small interfering RNA interference;

10.3969/j.issn.1007-3969.2014.04.008

R737.33

A

1007-3639(2014)04-0284-08

2013-12-24

2014-03-05）

上海市衛(wèi)生局重點(diǎn)科研課題（No：2010249）。

張蓉 E-mail:rongzhang@163.com