節(jié) 妍妍

(保定市第一中醫(yī)院病理科，河北保定 071000)

環(huán)保生物組織透明脫蠟劑代替二甲苯在病理技術(shù)中的應(yīng)用

節(jié) 妍妍

(保定市第一中醫(yī)院病理科，河北保定 071000)

環(huán)保透明劑;二甲苯;組織透明;脫蠟

病理技術(shù)的首要任務(wù)是制作優(yōu)良的切片。而在HE常規(guī)石蠟制片技術(shù)中，組織透明、切片脫蠟、透明、封固劑制備都離不開(kāi)透明脫蠟劑的使用，透明、脫蠟效果的好壞直接影響石蠟制片的質(zhì)量。透明脫蠟劑是病理制片必須應(yīng)用的有機(jī)溶劑，常規(guī)組織石蠟制片技術(shù)過(guò)程中常用的二甲苯作為透明脫蠟劑具有脫蠟徹底，透明能力強(qiáng)，時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，但也有容易使病理組織收縮、變脆，不同組織透明時(shí)間不同，不易掌握的缺點(diǎn)，而且二甲苯屬于中度毒性的化學(xué)試劑，會(huì)對(duì)長(zhǎng)期在二甲苯環(huán)境下工作的技術(shù)人員的身體健康造成損害，并對(duì)環(huán)境造成污染[1]。環(huán)保生物組織透明脫蠟劑(以下簡(jiǎn)稱環(huán)保透明劑)能與水、乙醇及石蠟混合，兼有透明和脫蠟作用。我院病理科嘗試應(yīng)用環(huán)保透明劑代替二甲苯應(yīng)用于組織透明、脫蠟，獲得的組織塊收縮小，軟硬適中，易于切片，透明時(shí)間寬泛，作用溫和，適用于不同組織，而且對(duì)環(huán)境沒(méi)有污染，對(duì)人體沒(méi)有毒性作用，取得的結(jié)果非常滿意，現(xiàn)介紹如下:

1 材料與方法

1.1 材料 我院2011年10月-2012年10月臨床送檢的病理組織標(biāo)本，包括子宮肌瘤、闌尾、膽囊、甲狀腺、皮膚、淋巴結(jié)、食管、胃、腸、乳腺腫物、子宮內(nèi)膜、宮外孕等組織共400例，每例切片2張，應(yīng)用環(huán)保透明劑和二甲苯作為透明脫蠟劑制片各400張。

1.2 試劑 環(huán)保透明劑:(臺(tái)資)珠海貝索生物技術(shù)有限公司;二甲苯:分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;高效切片石蠟:上海華靈康復(fù)器械廠出品，上海醫(yī)科大學(xué)病理教研室監(jiān)制;蘇木素:天津市大茂化學(xué)試劑廠;伊紅:天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;中性樹(shù)膠:中國(guó)上海懿洋儀器有限公司。

1.3 儀器設(shè)備 全自動(dòng)生物組織脫水機(jī)(JTS-120P型)、組織攤烘片機(jī)(TP-D型)、生物組織包埋機(jī)(JBM-A型)，天津久圣醫(yī)療電子儀器有限公司;德國(guó)Leica石蠟切片機(jī)(RM-2235型);電熱恒溫干燥箱(SKG-02型)，湖北黃石市醫(yī)療器械廠。

1.4 操作方法

1.4.1 組織固定、脫水、透明及浸蠟:選取的400例病理組織標(biāo)本用同一批次配制的10%中性福爾馬林液固定6-8小時(shí)，經(jīng)病理醫(yī)師取材成2cm×1.5cm×0.2cm大小組織塊，每例標(biāo)本取材2塊分成二組，分別放入裝有環(huán)保透明劑和二甲苯的全自動(dòng)生物組織脫水機(jī)中，按常規(guī)脫水程序進(jìn)行脫水、透明和浸蠟。環(huán)保透明劑組僅在二甲苯組用時(shí)15-25分鐘的基礎(chǔ)上，再延時(shí)15分鐘左右。

1.4.2 包埋、切片、脫蠟和染色:使用與浸蠟相同的石蠟，包埋機(jī)包埋。Leica切片機(jī)連續(xù)切片，每塊切片2張，切片厚度為5 μm。常規(guī)烤片，溫度65℃，時(shí)間40min。然后分兩組行HE染色，環(huán)保透明劑組用環(huán)保透明劑脫蠟、透明，二甲苯組用二甲苯脫蠟、透明。僅是在脫蠟、透明過(guò)程中，環(huán)保透明劑組用時(shí)均比二甲苯組多10-15分鐘。

2 結(jié)果

2.1 石蠟塊評(píng)估 分別放置3個(gè)月、6個(gè)月、1年對(duì)制成的蠟塊進(jìn)行系統(tǒng)觀察，詳細(xì)記錄組織塊是否出現(xiàn)干燥、破碎、異味、回縮等情況，在1年后做出評(píng)估。結(jié)果見(jiàn)表1:

表1 兩組標(biāo)本石蠟組織塊評(píng)估比較(1年)

2.2 透明、脫蠟及HE染色切片效果評(píng)估 細(xì)胞核均染成鮮明的藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)、纖維和肌組織等染成深淺不同艷麗的紅色，核漿染色分明，對(duì)比清晰，充分顯示出相應(yīng)的組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)，達(dá)到優(yōu)質(zhì)HE切片的要求。兩組透明、脫蠟、HE染色切片及環(huán)保效果比較見(jiàn)表2:

表2 兩組透明、脫蠟、HE染色切片及環(huán)保效果比較

3 討論

二甲苯作為病理石蠟制片中的透明脫蠟劑效果優(yōu)良，但二甲苯具有較低的燃點(diǎn)(25℃)和沸點(diǎn)(137-143℃，100kpa)，極其易燃、易揮發(fā)[3]。研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期使用二甲苯可以對(duì)機(jī)體造成更多危害:吸入二甲苯蒸氣可引起眼、鼻、喉的刺激;通過(guò)呼吸道吸入和皮膚接觸二甲苯，可損害神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是對(duì)血液系統(tǒng)造成損害;長(zhǎng)期接觸可引起神經(jīng)衰弱綜合征和植物神經(jīng)功能紊亂，以及皮膚黏膜刺激癥狀，還可引起免疫功能低下、貧血、白細(xì)胞減少、皮炎、濕疹和皮膚干燥，尿中也可出現(xiàn)蛋白管型等;吸入高濃度的二甲苯可致嚴(yán)重的呼氣困難，甚至死亡[4-5]。衛(wèi)生部在《工業(yè)企業(yè)設(shè)計(jì)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中對(duì)二甲苯的最高容許濃度做了具體規(guī)定，并把二甲苯中毒定為職業(yè)病之一[6]。因此，需要一種優(yōu)質(zhì)且無(wú)毒的試劑替代二甲苯。

本研究中使用的環(huán)保透明劑是一種化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的烷類生物油混合物，是不含苯、甲苯、二甲苯類的綠色有機(jī)溶劑，燃點(diǎn)196℃、沸點(diǎn)250℃(100kpa)，無(wú)明顯揮發(fā)性，加熱也不會(huì)產(chǎn)生對(duì)人體不利的有害氣體，符合GB18583-2001標(biāo)準(zhǔn)要求，它既具有二甲苯的與乙醇、石蠟及樹(shù)膠互溶的物理特點(diǎn)，又沒(méi)有二甲苯的毒性作用[3]。而且，它還有以下幾點(diǎn)優(yōu)于二甲苯:①燃點(diǎn)高，較小的火災(zāi)隱患;②對(duì)組織的收縮作用比二甲苯小，利于真實(shí)反應(yīng)組織結(jié)構(gòu);③組織透明效果軟硬適中，對(duì)于含纖維較多的致密組織(子宮肌瘤、纖維瘤、皮膚等)、血塊、子宮內(nèi)膜和淋巴結(jié)等日常工作中的切片難點(diǎn)，也不會(huì)造成過(guò)硬、變脆，切片困難，對(duì)病理診斷有較高的實(shí)用價(jià)值，切片組織也可在環(huán)保透明劑中停留相對(duì)較長(zhǎng)時(shí)間不致受損，容易切出3-5μm的完整切片。同時(shí)，經(jīng)環(huán)保透明劑透明脫蠟后的組織切片進(jìn)行HE染色、免疫組化染色和特殊染色能清晰顯示組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)和其它組織成分，如網(wǎng)狀纖維、膠原纖維、中性粘液物質(zhì)和基底膜等，也能很好的將組織中的特異性抗原顯示出來(lái)，背景清楚干凈，無(wú)特異性著色，定位準(zhǔn)確，制片效果優(yōu)良，與二甲苯?jīng)]有明顯差別[3]。

環(huán)保透明劑的缺點(diǎn)是價(jià)格較貴，使用有效期較二甲苯短。為此，在工作中為節(jié)約開(kāi)支，我們大約每月更換一次試劑，并做記錄，每次更換試劑時(shí)，僅把第一缸環(huán)保透明劑倒掉，第二缸環(huán)保透明劑作為下一次制片時(shí)的第一缸，以此類推，最后一缸換上新試劑。這樣不但可以降低成本，組織脫水、透明時(shí)試劑的濃度梯度間隔更小，過(guò)程更加柔和，也起到了更好的緩沖作用。

本研究表明，采用環(huán)保透明劑制作病理組織切片效果與二甲苯制片效果相當(dāng)，組織塊長(zhǎng)期保存效果良好，不會(huì)對(duì)組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組織細(xì)胞內(nèi)其它成分(如組織抗原)造成破壞，能夠制作出符合臨床病理診斷和科研要求的優(yōu)質(zhì)切片;同時(shí)，符合實(shí)驗(yàn)室環(huán)保要求，利于工作人員的身體健康，完全可以替代二甲苯應(yīng)用于病理制片技術(shù)中。

[1]王曉萌，丁洋，王曉梅，等.正丁醇替代二甲苯在組織脫水與透明中的應(yīng)用[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2011，27(12): 1371-1372.

[2]羅小平，賴均鵬，呂志倩，等.環(huán)保型BT生物組織透明劑替代二甲苯在病理組織透明中的應(yīng)用及比較[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2011，27(8):903-904.

[3]蘭淼，李艷紅，鞏麗，等.環(huán)保透明劑替代二甲苯在病理制片技術(shù)中的應(yīng)用[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2012，41(10):1306-1307.

[4]馬錫慧，石炳毅，韓永，等.環(huán)保脫蠟液替代二甲苯在肝腎標(biāo)本病理制片中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012,27(4): 119-120.

[5]丁文清，潘小川.室內(nèi)污染物與白血病關(guān)系研究進(jìn)展[J].環(huán)境與健康雜志，2006，23(1):83-84.

[6]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.工業(yè)企業(yè)設(shè)計(jì)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1979.1112.

(技術(shù)方法欄目編輯:張 健)

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