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(天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院,天津市食品生物技術(shù)重點實驗室,天津 300134)

西南委陵菜(Potentillafulgens)薔薇科委陵菜屬植物，在我國主要分布于湖北、安徽、四川、貴州、云南和廣西等地。委陵菜的營養(yǎng)成分較為豐富，VC的含量甚至可達(dá)到每百克鮮樣含92mg[1]。委陵菜在我國民間常作為食用野菜利用，是藥食同源植物[2]。西南委陵菜具有清熱解毒，澀腸止瀉，涼血止血等療效[3]。目前，西南委陵菜的研究已有少量報道，翁貴英等[4]分別以乙醇和甲醇為提取劑提取西南委陵菜根和葉部分的黃酮，發(fā)現(xiàn)70%乙醇溶液的提取率最高，其根部和莖葉部分的黃酮含量分別為24.15%和9.62%。Jaitak等[5]從喜馬拉雅山委陵菜中分離出了Afzelchin-4α→8″-兒茶素、表兒茶素和蘆丁，以及一種新的雙黃酮Potifulgene。ABTS、DPPH和FRAP實驗顯示Potifulgene的抗氧化活性比表兒茶素更高[6]。Radhika等[7]發(fā)現(xiàn)西南委陵菜根的甲醇提取物能降低乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)癌細(xì)胞活性，并提高攜帶埃利希腹水瘤細(xì)胞小鼠的存活率。前期[8]本研究組從總體抗氧化能力、對Fe2+誘發(fā)卵黃脂蛋白PUFA過氧化體系的抑制能力、清除羥基自由基能力、清除超氧陰離子自由基能力、清除DPPH自由基能力五個方面評價了委陵菜中黃酮類化合物的活性。

本文利用微波輔助提取法對西南委陵菜黃酮進(jìn)行提取。與傳統(tǒng)方法相比，微波輔助提取縮短了提取時間，成分損失更少[9]。利用細(xì)胞模型來測定抗氧化活性物質(zhì)的抗氧化活性，是一種新的抗氧化活性評價方法，較完整地反映了抗氧化活性物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的吸收、代謝和分布，以及抗氧化活性物質(zhì)通過抑制自由基產(chǎn)生或提高人體內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)的水平來達(dá)到抗氧化效果方面的信息。細(xì)胞模型法比化學(xué)法更具有生物相關(guān)性，能夠較好地預(yù)測抗氧化活性物質(zhì)在人體內(nèi)的抗氧化活性。該方法彌補(bǔ)了化學(xué)抗氧化方法忽視在人體及細(xì)胞內(nèi)的生物利用率和代謝等缺陷，在抗氧化活性評價方面發(fā)揮出非常重要的作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

西南委陵菜 亳州市真源堂藥業(yè)有限公司，產(chǎn)地為河北，洗凈后烘干備用；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(分析純) 北京化學(xué)試劑公司；D101大孔吸附樹脂 天津南開和成科技有限公司；DPPH 美國Sigma公司；HT-29細(xì)胞 北京康為世紀(jì)生物科技有限公司；RAW264.7細(xì)胞 美國模式培養(yǎng)物集存庫；MTT試劑 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液研究所科技公司；96孔板 Nalge Nunc International(美國)；DCFH-DA熒光探針 江蘇碧云天生物技術(shù)研究所。

MAS-1微波萃取儀 上海新儀微波化學(xué)科技有限公司；U-3900紫外可見分光光度計 日本Hitachi High-Technologies Corporation；HERACELL 150i CO2培養(yǎng)箱 Thermo Scientific(德國)；FHC-1200A生物安全柜 美國Frontline公司；SpectraMax M5酶標(biāo)儀 美國Molecular Devices公司；Eclipse Ti-U倒置顯微鏡 日本Nikon公司；RE52-86A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；LGJ-10冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技發(fā)展有限公司；HZS-H型水浴振蕩器 哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司；80-1離心機(jī) 上海手術(shù)器械廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 西南委陵菜黃酮的微波提取 稱取0.5g西南委陵菜粉末，按1∶30的料液比加入50%(v/v)乙醇溶液為提取劑，放入微波萃取儀的樣品瓶中，選擇微波功率為400W，在60℃下用微波萃取儀萃取5min，待提取液稍冷后進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)石油醚萃取，棄掉石油醚層，再于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至粗提液中無乙醇，冷凍干燥得到西南委陵菜粗黃酮的干燥粉末。試驗以黃酮得率為指標(biāo)，通過單因素試驗來確定乙醇濃度、料液比、提取溫度、微波功率和提取時間的最佳條件，以得到微波輔助提取西南委陵菜黃酮的最佳工藝參數(shù)。按以下公式計算黃酮得率：

式(1)

其中Ce為提取液中黃酮濃度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出(mg/mL)；Ve為提取液體積(mL)；Mm為物料質(zhì)量，500mg。

1.2.2 西南委陵菜黃酮溶液的配制 使用D101大孔吸附樹脂純化粗黃酮。純化條件：粗黃酮樣品液(pH4)以吸附流速為2BV/h上樣，解吸劑為60%乙醇溶液(pH8)。洗脫液收集后置于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓除去乙醇后，取適量提純后的黃酮加蒸餾水稀釋至濃度為1.0mg/mL作為樣品液。再配制1.0mg/mL的抗壞血酸(VC)溶液作為對照液。

1.2.3 總抗氧化活性的測定 采用磷鉬絡(luò)合物法[10]測定黃酮總抗氧化活性。

1.2.4 清除羥自由基(·OH)能力的測定 目前清除羥自由基的研究方法可分為四類：Fenton反應(yīng)、催化劑作用下的非Fenton反應(yīng)、含巰基的有機(jī)物質(zhì)發(fā)生自身氧化還原反應(yīng)、紫外線照射。本文采用結(jié)晶紫法(Fenton反應(yīng))[11]測定黃酮清除羥自由基(·OH)能力。

1.2.6 清除DPPH自由基能力的測定 本文按照文獻(xiàn)[13]的方法測定并計算IC50值。

1.2.7 Fe2+誘發(fā)脂蛋白不飽和脂肪酸過氧化體系中抗氧化活性的測定 本文按照文獻(xiàn)[14]的方法測定。

1.2.8 對細(xì)胞生存能力的影響 根據(jù)文獻(xiàn)的方法[15]，并適當(dāng)改進(jìn)，測定了西南委陵菜黃酮對結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和小鼠巨噬細(xì)胞RAW-264.7的抑制能力。具體操作是：在96孔板中接種HT-29和RAW264.7，接種密度為1×105/mL，接種量為100μL，設(shè)置三個復(fù)孔，在37℃、5% CO2環(huán)境下培養(yǎng)24h。除去培養(yǎng)基，用PBS緩沖液沖洗兩次，用0.0001、0.001、0.01、0.1、1mg/mL的西南委陵菜黃酮溶液處理細(xì)胞24h，每個濃度設(shè)置三個復(fù)孔。除去培養(yǎng)基，用PBS緩沖液沖洗兩次，加入5mg/mL噻唑藍(lán)溶液(MTT)20μL，培養(yǎng)4h。加入100μL二甲基亞砜，溶解結(jié)晶物，在570nm下測定光密度值ODs。同時測定空白組ODb：不培養(yǎng)細(xì)胞，不加入黃酮溶液，其它操作同上。對照組ODc：培養(yǎng)細(xì)胞但不加入黃酮溶液，其它操作同上。根據(jù)以下公式，計算經(jīng)西南委陵菜黃酮處理后人類結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和小鼠巨噬細(xì)胞RAW-264.7的抑制能力：

式(2)

1.2.9 細(xì)胞內(nèi)抗氧化實驗 根據(jù)文獻(xiàn)的方法[16]，并適當(dāng)改進(jìn)，測定了西南委陵菜黃酮在HT-29和RAW264.7細(xì)胞內(nèi)的抗氧化活性。具體操作是：將HT-29和RAW264.7細(xì)胞接種于96孔板，接種密度為1×105/mL，接種量為100μL，培養(yǎng)24h。棄掉培養(yǎng)基，用PBS緩沖液沖洗96孔板。用0.025、0.05、0.1、0.25、0.5mg/mL西南委陵菜黃酮溶液100μL處理細(xì)胞，每個濃度設(shè)置三個復(fù)孔，10μmol/L的DCFH-DA熒光探針溶液100μL，在37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)1h。用PBS緩沖液沖洗96孔板，加入300μmol/L的H2O2溶液100μL。在激發(fā)波長488nm、發(fā)射波長525nm下，每隔5min測定熒光強(qiáng)度1h，并在熒光下拍照。同時測定空白組：用DCFH-DA處理，不加入H2O2和黃酮溶液，其它操作同上；對照組：用DCFH-DA和H2O2處理，不加黃酮溶液，其它操作同上。將細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性表達(dá)為相對熒光強(qiáng)度。

2 結(jié)果與討論

2.1 西南委陵菜黃酮微波提取條件的優(yōu)化

按1.2.1方法進(jìn)行提取，固定其它條件，分別研究乙醇濃度、料液比、提取溫度、微波功率及提取時間對西南委陵菜黃酮得率的影響，結(jié)果見圖1和圖2。

圖1 提取劑乙醇濃度、料液比和提取溫度對西南委陵菜黃酮得率的影響 Fig.1 The effect of concentration of ethanol extractant,material ratio and extraction temperature on the yield of Potentilla fulgens flavonoids

圖1表明，當(dāng)乙醇在溶液中的濃度小于50%時，黃酮得率隨著乙醇濃度的增加而顯著增加；當(dāng)乙醇濃度大于50%時，黃酮得率急劇下降。一方面，根據(jù)“相似相溶”原理，提取得率與提取劑極性直接相關(guān)；另一方面，當(dāng)提取劑中的乙醇濃度超過某一值時，一定量水的存在增加了植物原料在水中的膨脹，從而擴(kuò)大了物料與提取劑的接觸面積。黃酮得率隨料液比的增加而增加，并在1∶30時達(dá)到最大值5.68%，當(dāng)料液比大于1∶30時減少。這可能是因為較大體積的提取劑含水也較多，導(dǎo)致物料在水中膨脹并吸收所要提取的成分。在溫度小于60℃時，黃酮得率隨溫度的增加而顯著增加，大于60℃時，黃酮得率有下降的趨勢。選擇60℃為最佳提取溫度。在高溫下，溶劑粘度減小，擴(kuò)散性增加，提取效率增加，但超過一定溫度時，影響黃酮類化合物的穩(wěn)定性，造成其分解[17]。

圖2表明當(dāng)微波功率增加至400W時，較多電磁能量被快速轉(zhuǎn)移至提取系統(tǒng)并提高提取效率。黃酮的高效提取與微波能量通過離子傳導(dǎo)和偶極旋轉(zhuǎn)對生物分子的直接影響有關(guān)，微波會導(dǎo)致能量分布于溶劑和植物物料內(nèi)，然后造成分子移動和升溫[17]。起初，黃酮得率隨微波輻射時間的延長而增加，并在400W下5min時達(dá)到最大值5.68%，然后緩慢下降。同樣，長時間大功率的微波輻射所產(chǎn)生的熱效應(yīng)也會造成黃酮類化合物的分解為取代基，如羥基和甲氧基[18]。

圖2 微波功率與提取時間對黃酮得率的影響 Fig.2 The effect of microwave power and extraction time on the yield of Potentilla fulgens flavonoids

2.2 西南委陵菜黃酮純度計算

按照文獻(xiàn)[19]的方法繪制標(biāo)準(zhǔn)蘆丁曲線，吸光度與溶液濃度的關(guān)系為得線性回歸方程A=12.660C+0.0013(R2=0.9999)。計算得提取出的提取西南委陵菜黃酮粉末純度為28.2%，純化后黃酮粉末的純度為46.6%。

2.3 總抗氧化活性

根據(jù)實驗方法1.2.3，測定西南委陵菜黃酮溶液和VC溶液在不同濃度下的吸光度，得到其抗氧化活性，結(jié)果如圖3。

圖3 吸光度與樣品液濃度的關(guān)系 Fig.3 Relationship between absorbance and concentration of samples

磷鉬方法是基于樣品將Mo(VI)還原為Mo(V)，以及隨后綠色磷鉬絡(luò)合物的形成，在695nm處具有最大吸收[20]。因此，溶液吸光度越大，樣品液還原力越強(qiáng)。圖3表明西南委陵菜黃酮具有一定的抗氧化活性，并且隨濃度的增加而提高。在濃度為2.73×10-2mg/mL時，西南委陵菜黃酮和VC的吸光度分別為0.48和1.36。即該濃度下西南委陵菜黃酮的抗氧化能力約為VC的1/3。

2.4 清除羥自由基能力

根據(jù)實驗方法1.2.4，測定各溶液的吸光度，計算對羥自由基的清除率，結(jié)果如圖4。

圖4 羥自由基清除率與樣品液濃度的關(guān)系 Fig.4 Relationship between scavenging rate of hydroxyl free radicals and concentration of samples

在人體內(nèi)，羥自由基能夠殺死紅細(xì)胞，降解DNA、細(xì)胞膜和多糖化合物。羥自由基是最具反應(yīng)性活性基團(tuán)，其在有金屬離子存在的情況下(如銅或鐵)由超氧陰離子和過氧化氫形成。當(dāng)羥自由基與芳香族化合物反應(yīng)，羥自由基能插入雙鍵，形成羥基環(huán)己二烯基。所產(chǎn)生的基團(tuán)繼續(xù)反應(yīng)，例如與氧反應(yīng)，提供氫過氧游離基，通過脫水分解為苯氧基形式的基團(tuán)[21]。圖4表明西南委陵菜黃酮具有較強(qiáng)的羥自由基清除能力，在濃度在5×10-4～1×10-3mg/mL時，西南委陵菜黃酮和VC的羥自由基清除率分別為48.8%～58.1%和7.9%～11.0%。可見該濃度范圍內(nèi)，西南委陵菜黃酮的羥自由基清除能力約為VC的6倍。此外，西南委陵菜黃酮的羥自由基清除能力隨濃度有明顯提高，而VC的羥自由基清除能力隨濃度的變化不明顯。

2.5 清除超氧陰離子自由基能力

2.5.1 光譜條件的選擇 鄰苯三酚自氧化的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜如圖5。

圖5 鄰苯三酚自氧化的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 Fig.5 Excitation and emission spectra of autoxidation of pyrogallol

在Tris-HCl緩沖液(pH8.20)中，通過鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生超氧陰離子，鄰苯三酚自氧化的產(chǎn)物為3-羥基環(huán)己酮-3,5-二烯-1,2-二酮[22]。圖5表明，鄰苯三酚自氧化的最佳激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為444、509nm，熒光強(qiáng)度隨時間而增加，并在4～20min內(nèi)呈線性關(guān)系。

2.5.2 清除超氧陰離子自由基的作用 西南委陵菜黃酮和VC抑制鄰苯三酚自氧化的熒光動力學(xué)曲線如圖6。

圖6 西南委陵菜黃酮和VC抑制鄰苯三酚自氧化的熒光動力學(xué)曲線 Fig. 6 Fluorescence kinetics curves of Potentilla fulgens flavonoids and VC inhibiting autoxidation of pyrogallol

人體內(nèi)有一定數(shù)量的超氧陰離子存在，與羥基結(jié)合后的產(chǎn)物會導(dǎo)致DNA損壞，破壞人類機(jī)體功能。圖6表明，西南委陵菜黃酮和VC的濃度越大，曲線的斜率Ss越小，說明樣品液對鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生超氧陰離子的抑制作用越強(qiáng)。擬合動力學(xué)曲線得到曲線斜率，并計算在不同濃度下西南委陵菜黃酮和VC對超氧陰離子自由基的抑制率，結(jié)果見圖7。

圖7 樣品液和對照品液對超氧陰離子自由基的抑制率 Fig. 7 Inhibition rates of flavonoids and reference substance to the supraoxygen anion free radicals

結(jié)果表明，西南委陵菜黃酮對超氧陰離子自由基具有一定的清除能力，并且隨濃度的增加而提高。在濃度1.92×10-2～3.85×10-2mg/mL時，西南委陵菜黃酮和VC的超氧陰離子自由基清除率分別為45.0%～51.4%和91.0%～97.8%?？梢娫摑舛确秶鷥?nèi)，西南委陵菜黃酮的清除超氧陰離子自由基能力約為VC的1/2。

2.6 清除DPPH自由基能力

西南委陵菜黃酮對DPPH·的清除率結(jié)果如圖8。

圖8 DPPH·清除率與樣品液濃度的關(guān)系 Fig.8 Relationship between DPPH· scavenging and concentration of samples

DPPH·是一種穩(wěn)定的自由基團(tuán)，但它對光、氧、pH以及所用的溶劑敏感。此反應(yīng)是基于DPPH·中氮的孤電子通過其中氮的孤電子接受抗氧化劑的氫原子而被還原，因此發(fā)生顏色消褪[23]。圖8表明西南委陵菜黃酮對DPPH·具有明顯的清除力，但小于VC。擬合線性方程，西南委陵菜黃酮：S=1448.6C-1.7595(R2=0.9901)；VC：S=5450.0C-0.4347(R2=0.9979，橫坐標(biāo)范圍：0～0.015mg/mL)，得西南委陵菜黃酮清除DPPH自由基的IC50為0.036mg/mL；VC為0.009mg/mL，IC50為西南委陵菜黃酮的1/4。

2.7 Fe2+誘發(fā)脂蛋白VC多不飽和脂肪酸過氧化體系中抗氧化活性

西南委陵菜黃酮對卵黃脂蛋白過氧化的抑制作用結(jié)果如圖9。

圖9 樣品液對Fe2+誘發(fā)卵黃脂蛋白過氧化的抑制作用 Fig.9 Inhibition of samples on Fe2+ yolk lipoprotein peroxide

脂質(zhì)過氧化過程中發(fā)生的ROS氧化生物膜的過程，從而使細(xì)胞膜的流動性和通透性發(fā)生改變，最終導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變。圖9表明，西南委陵菜黃酮對Fe2+誘發(fā)卵黃脂蛋白過氧化具有抑制作用，明顯高于VC。并且其抑制能力隨濃度的增加而增強(qiáng)。在低濃度時(0.016mg/mL)西南委陵菜黃酮和VC的抑制能力分別為67.1%和22.7%，約為VC的3倍。黃酮類化合物其的抗氧化性是因為捕獲過氧化自由基的抗氧化能力，也可能是因為黃酮類化合物與白蛋白之間的反應(yīng)和與小分子物質(zhì)(如維生素、谷胱甘肽)的協(xié)同作用[24]。

2.8 對細(xì)胞生存能力的影響

西南委陵菜黃酮對細(xì)胞生存能力的影響結(jié)果如圖10。

圖10 西南委陵菜黃酮對細(xì)胞生存能力的影響 Fig.10 Potentilla fulgens flavonoids effects on cell viabilities

MTT賦予淡黃色水溶液，當(dāng)被脫氫酶和在活細(xì)胞中的還原劑還原時，產(chǎn)生不溶于水、藍(lán)紫色的化合物甲瓚，脂溶性的甲瓚可被有機(jī)溶劑溶解并可通過分光光度法測定[25]，因此可用MTT法測定細(xì)胞的生存能力。圖10表明了在西南委陵菜黃酮處理后活細(xì)胞的百分比。西南委陵菜黃酮溶液使HT-29的生存能力從116.08%降至88.00%，使RAW264.7的生存能力從87.85%降至74.65%。HT-29和RAW264.7活細(xì)胞的相對數(shù)量隨黃酮劑量的增加而減少，但HT-29的相對數(shù)量在兩個高濃度下均無明顯變化，RAW264.7在四個高濃度下均無明顯變化。

2.9 細(xì)胞內(nèi)抗氧化實驗

西南委陵菜黃酮的細(xì)胞內(nèi)抗氧化結(jié)果如圖11～圖13。

圖11 HT-29細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞的熒光照片 Fig.11 Fluorescent photos of HT-29 cell and RAW264.7 cell

圖12 西南委陵菜黃酮在HT-29細(xì)胞中的抗氧化活性 Fig.12 Antioxidant activity of Potentilla fulgens flavonoids in HT-29 cells

圖13 西南委陵菜黃酮在RAW264.7細(xì)胞中的抗氧化活性 Fig.13 Antioxidant activity of Potentilla fulgens flavonoids in RAW264.7 cells

熒光探針被廣泛用于監(jiān)控細(xì)胞中的氧化活性。細(xì)胞內(nèi)的酯酶將DCFH-DA轉(zhuǎn)化為DCFH，通過與活性氧的反應(yīng)無熒光的DCFH被氧化為DCF。DCFH的氧化是與H2O2或過氧硝酸鹽反應(yīng)的結(jié)果[26]，如圖11。西南委陵菜黃酮避免了DCFH的氧化，這表明西南委陵菜黃酮具有抗氧化性。在生物系統(tǒng)中正常代謝持續(xù)產(chǎn)生有毒的活性氧，因此研究對抗活性氧的物質(zhì)很有必要。圖12和圖13表明西南委陵菜黃酮減少了在HT-29細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞DCF的熒光性，表明它們減少了DCFH的氧化，并且隨著濃度的增加黃酮溶液在細(xì)胞內(nèi)的抗氧化性增強(qiáng)。

西南委陵菜黃酮在HT-29中的抗氧化性較弱，并且黃酮溶液的濃度在0.25mg/mL和0.5mg/mL時，二者的抗氧化性變化不明顯。這表明當(dāng)黃酮的濃度達(dá)到0.25mg/mL，HT-29細(xì)胞內(nèi)黃酮的濃度已經(jīng)基本達(dá)到飽和，繼續(xù)增加黃酮的濃度并不能引起細(xì)胞內(nèi)黃酮濃度的改變。所以當(dāng)濃度大于0.25mg/mL時，黃酮的抗氧化性趨于定值?？紤]到不同濃度的黃酮溶液對HT-29細(xì)胞生存能力的抑制性差異，因此選取0.25mg/mL為HT-29細(xì)胞的最佳應(yīng)用濃度。西南委陵菜黃酮在RAW264.7中的抗氧化性較強(qiáng)，不同濃度的黃酮溶液在RAW264.7中的抗氧化性變化明顯，并考慮不同濃度的黃酮溶液對RAW264.7細(xì)胞生存能力的抑制差異較小，因此，對于RAW264.7細(xì)胞確定0.5mg/mL為最佳應(yīng)用濃度。

2.10 環(huán)境因素對西南委陵菜黃酮的影響

前期研究[8]發(fā)現(xiàn)在總體抗氧化能力、對Fe2+誘發(fā)卵黃脂蛋白PUFA過氧化體系的抑制能力、清除羥基自由基能力和清除超氧陰離子自由基能力方面，河北產(chǎn)西南委陵菜高于福建產(chǎn)西南委陵菜，但在清除DPPH自由基方面，福建產(chǎn)西南委陵菜高于河北產(chǎn)西南委陵菜。即河北產(chǎn)委陵菜的抗氧化活性總體優(yōu)于福建產(chǎn)西南委陵菜，其可能的原因為：河北省平均海拔1200～1500m，福建小于1000m，河北的海拔高度更接近西南委陵菜的主要產(chǎn)地中國西南地區(qū)；河北年日照時間為2400～3100h，福建為1700～2300h，因此河北的日照時間更有利于植物的光和作用；河北的年均降水量為300～800mm，福建為年降水量1400～2000mm，降雨所產(chǎn)生的臭氧不利于植物代謝。特別是，臭氧的氧化作用導(dǎo)致不飽和的有機(jī)分子的破裂，使臭氧分子結(jié)合在有機(jī)分子的雙鍵上，生成臭氧化物。

3 結(jié)論

本文考察了微波提取西南委陵菜黃酮的最佳條件：乙醇濃度50%、料液比1∶30、提取溫度60℃、微波功率400W、提取時間5min，最佳得率5.68%。測定了西南委陵菜黃酮的總抗氧化活性、清除羥自由基能力、清除超氧陰離子自由基能力、清除DPPH自由基能力和對卵黃脂蛋白過氧化的抑制作用，并以抗氧化劑VC為對照，結(jié)果表明西南委陵菜黃酮是一種優(yōu)良的天然抗氧化劑，西南委陵菜黃酮清除羥自由基抑制能力和對卵黃脂蛋白過氧化的抑制作用明顯高于VC。此外，西南委陵菜黃酮在HT-29和RAW264.7兩種細(xì)胞中表現(xiàn)出明顯的抗氧化性，其抗氧化性隨濃度增加遞增。

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