王微等

[摘要] 目的 觀察針刺與氟尿嘧啶、益氣解毒中藥復(fù)方聯(lián)合應(yīng)用對(duì)荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞的抑制性作用。 方法 制備小鼠肝癌H22細(xì)胞實(shí)體瘤模型，分成肝癌模型組、化療藥物組（氟尿嘧啶腹腔注射）、益氣解毒方組（中藥灌胃）、針刺大椎穴組、化療藥物+針刺大椎穴組、益氣解毒方+針刺大椎穴組，并與正常小鼠進(jìn)行對(duì)照。觀察荷瘤小鼠一般生存狀態(tài)，并計(jì)算各組腫瘤抑制率。 結(jié)果 化療藥物組小鼠一般狀態(tài)較差，益氣解毒方組及針刺組一般狀態(tài)均優(yōu)于化療藥物組，針?biāo)幝?lián)用組小鼠的一般生存狀態(tài)優(yōu)于模型組與單一療法組；各實(shí)驗(yàn)組對(duì)腫瘤均有明顯抑制作用（P<0.01）。 結(jié)論 針刺聯(lián)合藥物對(duì)小鼠腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)具有較好的抑制作用。

[關(guān)鍵詞] 針刺；中藥復(fù)方；小鼠腫瘤細(xì)胞；腫瘤抑制率

[中圖分類號(hào)] R73-3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）02（b）-0100-03

針灸是中國(guó)傳統(tǒng)特色療法之一，能補(bǔ)偏救弊，平陰潛陽(yáng)，具有雙向調(diào)節(jié)臟腑經(jīng)脈氣血運(yùn)行的治療與保健作用。臨床研究證明，對(duì)腫瘤患者施以針灸療法，能縮小瘤體、緩解癌性疼痛，改善放化療后的惡心及嘔吐等消化道反應(yīng)、疲勞、口干等[1-2]，在改善患者一般癥狀方面效果顯著。本研究以肝癌細(xì)胞H22荷瘤小鼠作為試驗(yàn)對(duì)象，觀察針刺與藥物聯(lián)合應(yīng)用對(duì)荷瘤小鼠一般狀態(tài)及腫瘤抑制率的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及動(dòng)物瘤株

ICR小鼠，體重25～28 g，雌雄兼用，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物移植性腫瘤小鼠肝癌細(xì)胞H22購(gòu)于吉林省腫瘤研究所。

1.2 藥品

化療陽(yáng)性藥：氟尿嘧啶（上海旭東海普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）；益氣解毒方（以下簡(jiǎn)稱“YJP”）由本校附屬醫(yī)院臨床驗(yàn)方加減而成，主要由黃芪、當(dāng)歸、丹參、鱉甲、菊花、半枝蓮等補(bǔ)益解毒中藥組成，經(jīng)過(guò)水煎醇沉處理，制成濃度為1.25 g/ml（生藥）的藥液備用。

1.3 儀器與設(shè)備

0.5 mm×30 mm針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠）；二氧化碳培養(yǎng)箱（Hera Cell-150型，德國(guó)Heraeus公司）；研究用倒置顯微鏡（Olympus IX-70，日本）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（Bio-Rad 680型，美國(guó)）；超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備廠）；低速離心機(jī)（上海飛鴿）。

1.4 方法

1.4.1 模型制備 取體外培養(yǎng)或小鼠腹腔內(nèi)傳代的生長(zhǎng)良好的H22腫瘤細(xì)胞，生理鹽水洗滌1次，用生理鹽水調(diào)整濃度為5×106/ml，小鼠右腋皮下接種，每只0.2 ml（1×106/ml）。24 h后隨機(jī)分組。

1.4.2 動(dòng)物分組 從70只ICR小鼠中隨機(jī)抽取60只接種H22腫瘤細(xì)胞，次日隨機(jī)分為6組，每組10只，雌雄各半，即肝癌模型組（模型組）、化療藥物組（FU組）、益氣解毒方組（YJP組）、針刺大椎穴組（ac組）、化療藥物+針刺大椎穴組（FU+ac組）、益氣解毒方+針刺大椎穴組（YJP+ac組）；剩余10只小鼠作為正常對(duì)照組，按時(shí)給予食水，不做其他任何處理。

1.4.3 處理方法 接種次日起，給予5-FU組腹腔注射氟尿嘧啶10 mg/kg[3]；YJP組給予益氣解毒方以20 ml/kg的劑量灌胃；ac組取大椎穴，順經(jīng)脈走行斜刺皮下約0.2 mm，用均勻手法小幅度捻轉(zhuǎn)1 min，留針15 min，間歇行針2次[4]；FU+ac組以上述手法針刺大椎穴，10 min后腹腔注射氟尿嘧啶10 mg/kg；YJP+ac組以上述手法針刺大椎穴，10 min后取益氣解毒方以20 ml/kg的劑量灌胃。上述處理1次/d；模型組每天腹腔注射生理鹽水20 ml/kg；對(duì)照組按時(shí)給予食水，不做其他任何處理。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 小鼠一般狀態(tài)的觀察 自接種后每天稱量動(dòng)物體重，觀察記錄各組動(dòng)物毛色、進(jìn)食、活動(dòng)及死亡狀況。

1.5.2 腫瘤抑制率 于給藥結(jié)束次日頸椎脫臼處死全部動(dòng)物，剝?nèi)×鼋M織稱重，計(jì)算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)組瘤重/模型組瘤重）×100%。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel 2010軟件統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

給藥前，各組小鼠體重差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，平均體重為27.4 g；給藥后，從各組情況看，在皮下接種H22瘤細(xì)胞后，模型組小鼠進(jìn)食量明顯減少，且精神狀態(tài)較差，行動(dòng)遲緩，運(yùn)動(dòng)欠靈活，毛色逐漸變得缺乏光澤，接種側(cè)水腫明顯；給藥10 d后，模型組小鼠與對(duì)照組比較，體重顯著增加（P<0.01）。FU組小鼠毛皮晦暗雜亂，進(jìn)食飲水均差，糞便不成形，身體瘦弱無(wú)力，行動(dòng)極為遲緩；給藥10 d后，該組小鼠與模型組比較，體重明顯降低（P<0.01）。YJP組小鼠進(jìn)食量少于模型組而多于FU組，精神狀態(tài)、自主行動(dòng)及毛色與模型組基本相同，整體狀態(tài)優(yōu)于FU組；給藥10 d后，該組小鼠與模型組比較，體重明顯降低，與對(duì)照組小鼠比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.01）。FU+ac組小鼠一般狀態(tài)優(yōu)于FU組，YJP+ac組小鼠一般狀態(tài)優(yōu)于YJP組，給藥10 d后，這兩組小鼠與模型組比較，體重明顯降低（P<0.01），與對(duì)照組小鼠比較，體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。說(shuō)明針刺具有改善荷瘤小鼠治療過(guò)程中的一般生存狀態(tài)的作用，且各治療組對(duì)腫瘤均具有明顯的抑制作用（P<0.01）（表1）。

3 討論

現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)研究表明，針灸具有良好的緩解癌性疼痛的作用[5]，并能不同程度地協(xié)調(diào)機(jī)體免疫，作用靶點(diǎn)分布于多個(gè)免疫環(huán)節(jié)[6-7]，如提高癌癥患者的T淋巴細(xì)胞功能以及提高巨噬細(xì)胞的吞噬活性等[8]，此外還有明確的調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能的作用[9-10]。大椎穴通手足三陽(yáng)經(jīng)，兼為督脈上之要穴，具有調(diào)節(jié)諸陽(yáng)經(jīng)陽(yáng)氣的作用[11]，從而提高機(jī)體免疫力及患者帶瘤生存質(zhì)量。

本研究采用單側(cè)右腋皮下接種H22腫瘤細(xì)胞復(fù)制荷瘤小鼠模型，并分別施以化療藥物、中藥制劑及藥物與針刺療法聯(lián)合應(yīng)用等治療，結(jié)果顯示，針刺大椎穴組腫瘤抑制率為9.90%，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明針刺對(duì)于惡性腫瘤具有一定的抑制作用。同時(shí)，針灸在與化療藥物氟尿嘧啶和益氣解毒方聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，均取得了較好的療效，尤其是與益氣解毒方聯(lián)用時(shí)，取得了較單一療法更高的腫瘤抑制率。聯(lián)用組荷瘤小鼠的一般生存狀態(tài)較模型組及單一療法組為優(yōu)，說(shuō)明針灸與其他中西藥物療法間或存在協(xié)同作用，但其作用機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2013-12-10 本文編輯：袁 成）

本研究采用單側(cè)右腋皮下接種H22腫瘤細(xì)胞復(fù)制荷瘤小鼠模型，并分別施以化療藥物、中藥制劑及藥物與針刺療法聯(lián)合應(yīng)用等治療，結(jié)果顯示，針刺大椎穴組腫瘤抑制率為9.90%，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明針刺對(duì)于惡性腫瘤具有一定的抑制作用。同時(shí)，針灸在與化療藥物氟尿嘧啶和益氣解毒方聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，均取得了較好的療效，尤其是與益氣解毒方聯(lián)用時(shí)，取得了較單一療法更高的腫瘤抑制率。聯(lián)用組荷瘤小鼠的一般生存狀態(tài)較模型組及單一療法組為優(yōu)，說(shuō)明針灸與其他中西藥物療法間或存在協(xié)同作用，但其作用機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2013-12-10 本文編輯：袁 成）

本研究采用單側(cè)右腋皮下接種H22腫瘤細(xì)胞復(fù)制荷瘤小鼠模型，并分別施以化療藥物、中藥制劑及藥物與針刺療法聯(lián)合應(yīng)用等治療，結(jié)果顯示，針刺大椎穴組腫瘤抑制率為9.90%，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明針刺對(duì)于惡性腫瘤具有一定的抑制作用。同時(shí)，針灸在與化療藥物氟尿嘧啶和益氣解毒方聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，均取得了較好的療效，尤其是與益氣解毒方聯(lián)用時(shí)，取得了較單一療法更高的腫瘤抑制率。聯(lián)用組荷瘤小鼠的一般生存狀態(tài)較模型組及單一療法組為優(yōu)，說(shuō)明針灸與其他中西藥物療法間或存在協(xié)同作用，但其作用機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。

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[9] 李昕.針灸治療惡性腫瘤化療致白細(xì)胞減少癥36例臨床分析[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2009，16（24）：142-143.

[10] 張海燕，劉忠錦，馮化杰.電針對(duì)阿爾茨海默病大鼠海馬PKC和GDNF表達(dá)的影響[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2013， 20（7）：20-21.

[11] 裴建，魏海，劉志丹.艾灸大椎對(duì)荷瘤小鼠腦皮質(zhì)白介素（IL）-1B、IL-2、IL-6 mRNA及蛋白表達(dá)的影響[J].針刺研究，2010，35（8）：249-243.

（收稿日期：2013-12-10 本文編輯：袁 成）