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(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117)

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·方藥研究·

HPLC測(cè)定痛風(fēng)貼中姜黃素的含量

苗艷平，王丹，廉冬雪，張小東，王沛*

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117)

目的 建立痛風(fēng)貼制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定姜黃素的含量，色譜柱：Agilent C18色譜柱(46 mm×250 mm，5 Micron)；流動(dòng)相：乙腈-4%醋酸(48∶52)；檢測(cè)波長(zhǎng)：428 nm,柱溫：(30±2) ℃。結(jié)果 姜黃素在0.025～0.150 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為99.7%，RSD為0.7%。結(jié)論 該試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，提取物性質(zhì)穩(wěn)定，重復(fù)性好，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可信，可為痛風(fēng)貼制劑質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

痛風(fēng)貼；姜黃素；高效液相色譜法

痛風(fēng)貼制劑是以姜黃、萆 、木瓜、烏藥等為主要原料藥制成的純中藥復(fù)方制劑，具有活血化瘀，消腫止痛，排除血尿酸，疏風(fēng)通絡(luò)等功效。本文研究采用HPLC測(cè)定痛風(fēng)貼中姜黃素的含量，進(jìn)一步完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 LCC-10AT型高效液相色譜設(shè)備，期中包含LC-10AT輸液泵設(shè)備、LC-15C輸液泵、SPD-10AV紫外可見(jiàn)檢測(cè)儀器、色譜工作站；DK-S26型電熱恒溫水浴鍋；AL204電子天平；KQ-250型超聲波處理器。

1.2 試劑 甲醇色譜純，冰醋酸優(yōu)級(jí)純,乙腈色譜純,其余化學(xué)試劑均為分析純。

1.3 藥品 姜黃素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)A2K8-8GZG，規(guī)格約20 mg)；姜黃購(gòu)自吉林大藥房，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室鑒定為藥典所載正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Agilent C18色譜柱(46 mm×250 mm，5 Micron)；流動(dòng)相：乙腈-4%醋酸(48∶52)；檢測(cè)波長(zhǎng)：428 nm，柱溫：(30±2)℃；理論塔板數(shù)按姜黃素峰計(jì)算，不低于4 000。

2.2 試液的配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取姜黃素對(duì)照品適量，加乙腈-4%醋酸(48∶52)溶解并制成每1 mL含姜黃素10 μg的溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，作為對(duì)照溶液[1]。

2.2.2 供試品溶液的制備 取復(fù)方藥材適量，研成細(xì)粉，取粉末約1 g，精密稱(chēng)定，置實(shí)驗(yàn)燒瓶中，精密吸入甲醇25 mL，密塞，稱(chēng)定重量，加熱回流提取30 min，稱(chēng)定重量，再用甲醇補(bǔ)足回餾提取損失的重量，搖勻，濾過(guò)，初濾液另器盛裝，再接取續(xù)濾液，精密吸取續(xù)濾液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液[2]。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 取除姜黃以外的其他藥材，按藥典要求制備陰性對(duì)照品,按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液[3]。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣20 μL。結(jié)果：陰性樣品色譜在姜黃素相應(yīng)的位置上無(wú)吸收峰，表明陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15 μL注入液相色譜設(shè)備，測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)品姜黃素的進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，以測(cè)試設(shè)備所獲峰面積(A)為縱坐標(biāo)[4]，進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計(jì)的線性回歸處理，得回歸方程：Y=7 7750X112 510(r=0.999 8)。結(jié)果表明，姜黃素在0.02～0.15 μg范圍內(nèi)與測(cè)試設(shè)備所獲峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取姜黃素對(duì)照品溶液10 μL，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定姜黃素峰面積的RSD為0.90%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所用實(shí)驗(yàn)儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液20 μL，室溫放置，分別于0、1、2、3、6 h進(jìn)樣，測(cè)定其姜黃素面積積分值，峰面積的RSD為1.87%。實(shí)驗(yàn)表明所制供試品室溫放置6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批復(fù)方樣品粉末，按上述方法制備供試品實(shí)驗(yàn)溶液，按上述色譜條件，測(cè)定其姜黃素含量，連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果平均質(zhì)量含量為1.086%,RSD為1.47%。表明本品含量測(cè)定方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收率測(cè)定法[5],分別取已知含量的供試品粉末共9分，分別加入姜黃素對(duì)照溶液(0.1 mg/mL)4、5、6 mL各3分，分別按上述方法制備供試品溶液[6]。各取20 μL注入液相色譜儀器中,記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.7%，RSD為0.74%[7]。

2.9 樣品含量測(cè)定 精密量取上述所制供試品溶液20 μL，注入同一臺(tái)液相色譜儀器，按外標(biāo)法測(cè)定，以峰面積計(jì)算，結(jié)果測(cè)得制劑中姜黃素含量為1.035%。

3 小結(jié)

通過(guò)對(duì)試驗(yàn)過(guò)程的多方考察和驗(yàn)證，經(jīng)過(guò)科學(xué)的數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的校驗(yàn)等的研究，筆者確定，本試驗(yàn)儀器和方法的精密度良好，試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，提取物性質(zhì)穩(wěn)定，質(zhì)量檢測(cè)方法和結(jié)果準(zhǔn)確、可信。

[1]鄧航,陳薇,黃桂紅,等.HPLC法測(cè)定姜黃素明膠微球中姜黃素的含量[J].華夏醫(yī)學(xué),2011,24(2):125-127.

[2]畢曉黎,孫冬梅,羅文匯,等.HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方姜黃微囊中姜黃素和胡椒堿的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(2):20-22.

[3]李富賢,楊亮,米彩峰.HPLC測(cè)定骨傷黃藥散中姜黃素含量[J].中外醫(yī)療,2010(30):118-119.

[4]楊以平,張師愚.HPLC法同時(shí)測(cè)定如意金黃散中大黃素、姜黃素、小檗堿的含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,14(9):213-214.

[5]斯俊英.HPLC法測(cè)定如意金黃軟膏中姜黃素的含量[J].海峽藥學(xué),2011,23(6):70-72.

[6]張立新,易翠華.RP-HPLC法測(cè)定四味姜黃膠囊中姜黃素的含量[J].中國(guó)藥事,2010,24(2):170-181.

[7]王巖,陳洪濤,盧方正,等.HPLC法測(cè)定四味姜黃湯散中姜黃素的含量[J].中國(guó)藥劑學(xué)雜志,2011(5):15-16.

DeterminationofCurcuminContentinGoutpatchbyHPLC

MIAO Yanpin,WANG Dan,LI Dongxue,ZHANG Xiaodong,WANG Pei*

(Changchun university of Chinese medicine,Changchun 130117,China)

ObjectiveTo establish Gout-patch quality control standards.MethodsUsing HPLC to determine the content of curcumin,chromatographic column:Agilent C18 chromatographic column (46 mm×250 mm,5 Micron);Mobile phase:acetonitrile and 4% acetic acid (48:52);wavelength by detection:428 nm and column temperature:(30±2)℃.ResultsCurcumin has a good linear relationship with peak area in the scope of 0.025 ug～0.025 ug.The average recovery was 99.67% and RSD was 0.74%.ConclusionThe test method operation is simple and the properties of extractives are stable.It has good repeatability.The detection results are accurate and credible which can provide scientific basis for a Gout-patch quality control.

gout-paste;curcumin;HPLC

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.01.008

吉林省中醫(yī)藥管理局中藥研究課題(2012-049)。

苗艷平(1971-)，女，大學(xué)本科，實(shí)驗(yàn)師。研究方向：藥代動(dòng)力學(xué)與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

] 王 沛，教授，碩士研究生導(dǎo)師，電話：13578701293，電子信箱:wapa1988@163.com。

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