痛風(fēng)立消制劑的處方基質(zhì)篩選

楊 莉， 王佳腩， 顧雪竹，任 方， 楊世梅， 王 沛＊

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)繼續(xù)教育學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130117；2.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林長(zhǎng)春 130000；3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700）

0 引 言

痛風(fēng)立消是經(jīng)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單價(jià)廉的化合物羥基苯甲醛和氯化丙酮加成環(huán)合，經(jīng)黃鳴龍反應(yīng)，再經(jīng)?；?、脫甲基、鹵代化等步驟制得商品名為痛風(fēng)立消的具有抗痛風(fēng)活性的化合物。為了臨床應(yīng)用的目的，對(duì)該化合物的制劑基質(zhì)進(jìn)行了較為科學(xué)的篩選工作。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

天平，上海精密儀器有限公司；

干燥箱，上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司；

藥物溶出度儀（型號(hào)：RC-2-6C-2），上海藥檢儀器有限公司；

紫外可見分光光度計(jì)，日本島津。

1.2 試劑

二硫化碳（分析純），沈陽市試劑五廠；

氯化鋅（分析純），天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；

芐基三乙基氯化銨，薩恩化學(xué)技術(shù)（上海）有限公司；

硫酸鎂（無水），上海山浦化工有限公司；

石油醚（60～90℃），天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司；

三氯甲烷（分析純），北京化工廠；

硅膠GF254，青島海洋化工廠分廠；

微晶纖維素（MCC），湖州展望有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 含量測(cè)定方法的建立

2.1.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定

取痛風(fēng)立消化合物原料（標(biāo)準(zhǔn)品）適量，加氯仿溶解，定容。以氯仿為空白對(duì)照，按紫外分光光度法［1－2］在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。確定痛風(fēng)立消化合物原料（標(biāo)準(zhǔn)品）的吸收波長(zhǎng)為284 nm。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

取痛風(fēng)立消化合物原料（標(biāo)準(zhǔn)品）適量，精密稱量，置于25 m L容量瓶中，加氯仿溶解、稀釋至刻度，搖勻，制得0.1 mg／m L的對(duì)照品溶液［3］。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取對(duì)照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 m L，分別置于10 m L容量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻，制成每1 m L含1，2，3，4，5，6μg的溶液，即得。以氯仿為空白對(duì)照，按紫外分光光度法［2］在284 nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液吸收度（0.086，0.172，0.258，0.312，0.461，0.430），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)品濃度在1.0～6.0μg／m L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。線性關(guān)系曲線為：

式中：y——吸光度值；

x——濃度。

結(jié)果表明，待測(cè)物質(zhì)在該范圍內(nèi)線性良好。

標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系考察結(jié)果見表1和圖1所示。

表1 標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系考察結(jié)果

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.4 精密度實(shí)驗(yàn)

按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.3 m L共6份，按上述操作進(jìn)行操作，測(cè)定吸收度值，結(jié)果RSD為0.198%（n＝6）。表明實(shí)驗(yàn)儀器精密度良好，結(jié)果的重現(xiàn)性較好，所得數(shù)據(jù)精確可用。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.3 m L和供試品溶液適量，分別置于10 m L容量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻，即得。分別在室溫下放置0，2，4，6，8，12 h，再量取溶液適量，過濾，取續(xù)濾液，以氯仿為空白對(duì)照，按紫外分光光度法［2］在284 nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液吸光度值，并計(jì)算含量及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（%）。

標(biāo)準(zhǔn)品和供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2結(jié)果表明，對(duì)照品和供試品穩(wěn)定性的RSD值分別為1.47%，2.65%，表明它們?cè)?2 h內(nèi)較為穩(wěn)定。

表2 標(biāo)準(zhǔn)品和供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.1.6 痛風(fēng)立消制劑的含量測(cè)定

取痛風(fēng)立消制劑適量，精密稱量，置于25 m L容量瓶中，加氯仿溶解、稀釋至刻度，搖勻，即得。以氯仿為空白對(duì)照，按紫外分光光度法［2］在284 nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液吸光度，按2.1.3線性關(guān)系式求出含量。

2.2 釋放度測(cè)定

2.2.1 釋放條件

釋放條件采用中華人民共和國(guó)藥典附錄轉(zhuǎn)籃法［4］進(jìn)行操作。

2.2.2 測(cè)定方法

完全按中華人民共和國(guó)藥典附錄轉(zhuǎn)籃法［4］進(jìn)行測(cè)定，最終繪制時(shí)間－溶出度曲線。

2.3 痛風(fēng)立消制劑制備工藝

運(yùn)用擠出－滾圓方法制備，稱取本品原料粉末，加入MCC等輔料至足量，使用適量潤(rùn)濕、黏合劑制軟材后，于多功能制丸機(jī)制成微丸，依據(jù)預(yù)先實(shí)驗(yàn)所確定的工藝條件參數(shù)控制制丸機(jī)轉(zhuǎn)速和滾圓時(shí)間。將所得成品微丸于42℃烘箱中烘干4.0～4.5 h，以18～24目篩來篩分。確定的工藝參數(shù)為：擠出轉(zhuǎn)速35 r／min，滾圓機(jī)頻率50 Hz，滾圓時(shí)間7 min［5］。

2.4 處方基質(zhì)的單因素考察

2.4.1 載藥量的考察

賦形劑承載著化合物，賦予化合物以一定的形狀，臨床上稱其為劑型，微丸，尤其是以擠出滾圓技術(shù)制備的微丸，通常微晶纖維素（MCC）作為輔料是首選，其原因被認(rèn)為是一種成球促進(jìn)劑［6］。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用微晶纖維素（MCC）制成的微丸，與其它輔料相比，有丸粒硬度大、堆密度好、表面光滑、圓整度佳等優(yōu)點(diǎn)。因此，本實(shí)驗(yàn)選取微晶纖維素（MCC）為主要輔料［7］?；衔镌谥苿┲械牧渴侵苯佑绊戓尫?、吸收，乃至于療效的關(guān)鍵所在。所以，首先考察化合物原料與其輔料質(zhì)量的配比，分別為1∶3，1∶5，1∶10，1∶12及1∶15，結(jié)果見表3和圖2所示。

表3 載藥量的考察表

圖2 不同化合物配比對(duì)制劑中化合物釋放的影響（n＝7）

結(jié)果顯示，載藥量越大，開始釋藥速度越快，藥物累積釋放量也就越多，當(dāng)30 min左右，各種載藥比例的藥物釋放水平基本趨于一致，到5 min時(shí)，各釋藥組藥物釋放量均已基本達(dá)到完全釋放。在同樣給藥劑量下，如果載藥量小，則患者所服用藥量就小。但載藥量比主要是要結(jié)合臨床給藥劑量來決定，從微丸形成圓整度來看，本實(shí)驗(yàn)選擇化合物粉末與其輔料質(zhì)量比的各個(gè)比例所形成的丸粒質(zhì)量差別不明顯。在下面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，將結(jié)合臨床給藥劑量選取1∶5，1∶10，1∶12三個(gè)載藥配比水平。

2.4.2 潤(rùn)濕劑的考察

潤(rùn)濕劑種類的選擇與物料的粘性及載藥量有關(guān)［8］。根據(jù)選擇的輔料的性質(zhì)及其所具有的黏性情況，選擇了潤(rùn)濕劑——乙醇作為考察對(duì)象，選取了乙醇所占積分?jǐn)?shù)的0%，10%，25%，50%及75%，按照設(shè)計(jì)的制備工藝，以制劑的外觀、得率為指標(biāo)進(jìn)行考察，結(jié)果見表4。

表4 潤(rùn)濕劑的考察表

上述體積百分比乙醇對(duì)制劑中化合物累積釋放度的影響，結(jié)果如圖3所示。

圖3 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對(duì)制劑中化合物釋放的影響（n＝7）

結(jié)果顯示，藥品粉末具有一定粘性，乙醇比例較大時(shí)微丸成形性差，幾乎不能形成圓整度很好的微丸；由于乙醇的加入量亦受生產(chǎn)場(chǎng)地溫度、濕度的影響，所以乙醇的實(shí)際加入量只能根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)所制軟材的性狀、擠出物的外觀性狀和經(jīng)驗(yàn)判斷。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)選用10%，25%及50%乙醇為黏合劑作進(jìn)一步篩選。

2.4.3 賦形劑的考察

經(jīng)過多次預(yù)實(shí)驗(yàn)和文獻(xiàn)的查閱，以微晶纖維素為主要賦形劑，以殼聚糖作為輔助賦形劑，這樣，分別選取殼聚糖的量占整個(gè)處方的比例為5%，12.5%，25%，37.5%及50%，其它處方成分用量不變，按照上述制備工藝，以制劑的得率、外觀為考察指標(biāo)，結(jié)果見表5。

表5 賦形劑的考察表

分別測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的累積釋藥率，結(jié)果如圖4所示。

圖4 不同處方的比例的殼聚糖對(duì)制劑中化合物釋放量的影響（n＝6）

殼聚糖作為輔助賦形劑，可以有減緩本品釋放的作用。其所占比例越大，釋放就越慢。當(dāng)輔助賦形劑殼聚糖所占比例過高或過低，則藥物釋放太慢或不完全，達(dá)不到30 min速釋要求［8］。所以選擇殼聚糖所占比例在5%，12.5%及25%作進(jìn)一步篩選。

2.5 正交設(shè)計(jì)篩選處方

根據(jù)單因素考察結(jié)果，選定本品粉末和其輔料的載藥質(zhì)量比例因素（A），殼聚糖所占含量比例（B）及乙醇百分比（C）三個(gè)因素，采用正交試驗(yàn)篩選處方，每個(gè)因素選定三個(gè)水平，設(shè)計(jì)成三因素三水平實(shí)驗(yàn)，見表6。

表6 因素水平設(shè)計(jì)表

按L9（33）正交設(shè)計(jì)表安排實(shí)驗(yàn)，以微丸的成型性（成顆粒率），丸劑的累積釋放因子（S）為主要評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，選擇最佳處方。試驗(yàn)正交設(shè)計(jì)方案和結(jié)果見表7。

成顆粒率：

成顆粒率越高，細(xì)粉率越低，小丸成型性越好。

累積釋放因子：

式中：Q5，Q30，Q60——分別代表5，30，60 min時(shí)藥物的累積釋放率。

S值越低，表明所定的標(biāo)準(zhǔn)［10］越接近，因素的水平數(shù)越佳。

表7 L 9（33）正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案和結(jié)果

表7結(jié)果顯示，因素對(duì)成型率影響大小順序?yàn)?＞1＞2；對(duì)釋放影響的順序?yàn)?＞2＞1。綜合2個(gè)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，因素最優(yōu)水平組合為：A1B1C2。

因此，得出制備痛風(fēng)立消制劑的最優(yōu)處方為：藥物粉末與其輔料質(zhì)量之比為1∶10（當(dāng)然，載藥質(zhì)量比例要結(jié)合臨床給藥劑量具體來定），殼聚糖為5%，乙醇百分比為25%。

3 小結(jié)與討論

3.1 處方單因素考察討論

本實(shí)驗(yàn)選取微晶纖維素為輔料，其具有較強(qiáng)的結(jié)合力，亦有“干粘合劑”之稱。與其它類型輔料相比，使用它制得的微丸硬度適中、堆密度大、表面光滑、圓整度好；選用一定體積分?jǐn)?shù)乙醇作為潤(rùn)濕劑，乙醇揮發(fā)性較強(qiáng)，如制軟材時(shí)間過長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致乙醇揮發(fā)過多，使得潤(rùn)濕劑（黏合劑）的加入量不便于控制，從而給制粒帶來不便，由于時(shí)間和條件的關(guān)系，未做進(jìn)一步的考察。查閱相關(guān)文獻(xiàn)，可考慮加入表面活性劑，表面活性劑的加入能有效防止乙醇（潤(rùn)濕劑）的揮發(fā)，同時(shí)，還可以克服擠出物表面缺陷，減少擠出物與篩網(wǎng)的摩擦力，從而顯著降低擠出操作時(shí)的能耗［11］，使成丸表面變得更加光滑；選用殼聚糖為補(bǔ)充賦形劑，殼聚糖是甲殼素經(jīng)脫N-乙?；难苌?，有一定疏水性，生物相容性好，可生物降解，是目前有發(fā)展前途的多糖類天然高分子材料。在輔料中加入一定比例的殼聚糖，有減慢藥物釋放的作用，以免藥物釋放過快，達(dá)不到速釋要求。

3.2 最佳處方

以乙醇為潤(rùn)濕劑、微晶纖維素為骨架材料賦形劑、以殼聚糖為減緩釋放賦形劑分別進(jìn)行單因素考察優(yōu)化，得出最佳處方。即化合物粉末與其輔料質(zhì)量之比為1∶10，殼聚糖為5%，乙醇百分比為25%。采用該處方比例所制備的微丸圓整度好，硬度適宜，收率高，可滿足設(shè)計(jì)制劑的要求，且藥物釋放的重現(xiàn)性良好。

［1］ 陸彬.藥劑學(xué)［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2003：392-398.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（第二部）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：附錄ⅣA.

［3］ 唐星.口服緩控釋制劑［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：121-122.

［4］ 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（第二部）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄73.

［5］ 李丹，宋洪濤，陳大為，等.擠出滾圓法制備復(fù)方丹參速釋微丸［J］.中草藥，2007，38（1）：36.

［6］ Becrt I，Remon J P.Influence of granulation liquid on the drug release rate from pelletsmade by extrusion spheronization［J］.Int.J.Pharm.，1993，95（1）：135-141.

［7］ 洪燕龍，馮怡，徐德生，等.擠出滾圓法制備大川芎方速釋微丸的處方工藝研究［J］.中草藥，2007，30（12）：1597-1598.

［8］ 陳紅霞，賈曉斌，潘國(guó)梁，等.擠出滾圓法制備中藥復(fù)方杞芪微丸及其性質(zhì)考察［J］.中國(guó)中藥雜志，2005，40（21）：1640-1642.

［9］ 劉陽，張志榮，韓靜，等.6-巰基嘌呤結(jié)腸黏附緩釋微丸的處方篩選及體外釋放的研究［J］.中國(guó)新藥雜志，2008，17（17）：1516-1517.

［10］ 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（第二部）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：附錄75.

［11］ Umpragn K，Chitropas P，Amarekajorm S.Influence of process variables on physicall properties of the pellets using extruder and spheronizer［J］. Drug Dev.Ind.Pharm.，1999，25（1）：45-46.