吳思思 戴偉娟
溫脾湯由附子、干姜、人參、大黃、甘草組成,作用是溫補(bǔ)脾陽,攻下冷積。主治脾陽不足,常用于急性單純性腸梗阻或不全梗阻等屬中陽虛寒,冷積內(nèi)阻者。臨床多用于治療慢性腎衰竭、潰瘍性結(jié)腸炎、腦缺血缺氧、貧血等病癥。本實驗應(yīng)用雙側(cè)頸動脈結(jié)扎制造的腦缺血模型,測定溫脾湯對腦組織中MDA和SOD含量的影響,以探討溫脾湯是否對缺血腦組織有保護(hù)作用。
1.1藥物與試劑 草藥:人參、大黃、附子、干姜、甘草,均由濟(jì)寧邦爾中藥飲片有限公司提供。
溫脾湯制備:取上述藥物,先用水浸泡6 h,然后放入500 ml水熬制,煎煮2次,合并兩次的濾液至200 ml。置于冰箱中保存,臨用前搖勻。
丙二醛(MDA)測定試劑盒:由南京建成科技有限公司提供。超氧化物歧化酶(SOD測定試劑盒:由南京建成科技有限公司提供。蛋白測定試劑盒:由南京建成科技有限公司提供。
1.2動物 昆明種小鼠,雄性,體重18~22 g,購自山東省防疫站實驗動物室。
1.3儀器 紫外分光光度劑 UV754N 上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。
2.1分組與給藥 昆明種小鼠40只,隨機(jī)分4組:模型組、溫脾湯低、中、高劑量組[灌胃0.4,2.0,10.0 ml/(kg·d)]。模型組灌服同容積的生理鹽水。各小鼠連續(xù)灌胃8 d。
2.2小鼠腦缺血后腦組織勻漿液的制備 末次給藥后1 h,各組在結(jié)扎兩側(cè)頸總動脈1.5 h后斷頭,小心剝?nèi)蓚?cè)大腦半球,稱重,按重量∶體積=1∶9的比例加入預(yù)冷的生理鹽水(4℃),用組織勻漿器充分勻漿,將勻漿液以3000轉(zhuǎn)/min離心12 min,取上清液。
2.3超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的測定 嚴(yán)格按照試劑盒說明,測定蛋白含量,繼而測定SOD和MDA的含量。
2.4統(tǒng)計學(xué)方法 實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析均應(yīng)用t檢驗。
3.1超氧化物歧化酶(SOD)測定 結(jié)果表明,與模型相比,溫脾湯中、高劑量組小鼠腦組織中SOD含量顯著增高(P<0.01),溫脾湯低劑量組小鼠腦組織中SOD含量明顯增高(P<0.05),但不如中、高劑量顯著。見表1。
表1 溫脾湯對小鼠腦組織SOD含量的影響
注:與模型組比較,aP<0.05,bP<0.01
3.2丙二醛(MDA)測定 結(jié)果表明,與模型組相比,溫脾湯組小鼠腦組織中MDA含量顯著下降。見表2。
表2 溫脾湯對小鼠腦組織MDA含量的影響
注:與模型組相比,aP<0.05
溫脾湯由人參、大黃、附子、干姜、甘草組成,近年來研究發(fā)現(xiàn)其成分或其有效成分對缺血有保護(hù)作用,但對復(fù)方湯劑未有明確研究。
本實驗采用小鼠雙側(cè)頸動脈結(jié)扎制造腦缺血模型,測定溫脾湯對腦組織中MDA和SOD含量的影響。結(jié)果表明與模型組相比溫脾湯組小鼠腦組織中SOD的含量明顯增加,且有明顯的劑量依賴性(低、中劑量組與模型組比較,P<0.05;高劑量組與模型組比較,P<0.01)。MDA含量顯著下降(給藥組與模型組比較,P<0.05)。
自由基代謝異常是腦缺血再灌注損傷的重要原因,腦缺血時,自由基的生成增加,防御機(jī)制活性降低,造成自由基損傷,腦缺血后,血清中MDA含量明顯升高,說明其脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng),SOD受到抑制,自由基清除能力降低,兩者呈負(fù)相關(guān)。因此,SOD和MDA的水平直接反映機(jī)體氧自由基的變化。
據(jù)有關(guān)資料報道,溫脾湯的有效成分有升高SOD和降低MDA含量的作用。呂風(fēng)亞等[1]在實驗中發(fā)現(xiàn),大鼠腦缺血再灌注后應(yīng)用人參總皂苷治療可提高腦組織SOD含量,降低MDA的含量。李建生等[2]在研究大黃苷及苷元對腦缺血損傷大鼠自由基代謝的影響時指出,大黃苷及苷元能明顯提高大鼠SOD活性,降低MDA含量。宋鐵山等[3]在實驗中發(fā)現(xiàn)甘草總黃酮對腸缺血再灌注大鼠,能明顯降低血清和腸組織中的MDA的含量,提高體內(nèi)SOD的活性。 孫慧蘭研究四逆湯的實驗[4]發(fā)現(xiàn)附子生物堿、干姜揮發(fā)油及甘草粗提取品都可不同程度地提高心肌缺血/再灌注損傷心肌的SOD活性,降低其MDA含量。閻惠英等[5]用榨出的生姜汁研究對黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)所產(chǎn)生的超氧陰離子自由基有抑制作用,結(jié)果表明姜汁可使小鼠離體血清和肝勻漿超氧化物歧化酶(SOD)活力顯著增加。 由此可進(jìn)一步證明溫脾湯的各個組成成分都有升高SOD和降低MDA的作用為本實驗提供了重要依據(jù)。而本實驗的結(jié)果,證明了溫脾湯這種復(fù)方湯劑用于保護(hù)缺血腦組織的可行性。
[1] 呂風(fēng)亞.人參總皂甙對大鼠腦缺血再灌注后MDA、SOD及細(xì)胞凋亡的影響.腦與神經(jīng)疾病雜志,2005,13(3):189-191.
[2] 李建生,劉敬霞,梁生旺,等.大黃苷及苷元對腦缺血損傷大鼠自由基代謝的影響.中國臨床康復(fù),2004,8(34):7748-7750.
[3] 宋鐵山,李湘楚.甘草總黃酮對大鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,咸寧學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2004,18(5):330-331,334.
[4] 孫慧蘭,吳偉康,羅漢川,等.四逆湯有效部位抗心肌缺血/再灌注損傷神經(jīng)酰胺機(jī)制的研究.中成藥,2005,27(12):1429.
[5] 閆慧英,張杰梅,喬曉君.姜和蒜抑制活性氧作用的研究.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1997,13(1):10-12.