周露，趙欣，李貴節(jié)，付利平

（重慶第二師范學(xué)院 生物與化學(xué)工程系，重慶 400067）

巫山神茶水提物的體外抗氧化及抗突變效果

周露，趙欣，李貴節(jié)，付利平

（重慶第二師范學(xué)院 生物與化學(xué)工程系，重慶 400067）

對(duì)購(gòu)買的巫山神茶進(jìn)行體外抗氧化及抗突變效果評(píng)價(jià).通過體外實(shí)驗(yàn)分析，研究巫山神茶的功能性效果.研究結(jié)果表明，高濃度的巫山神茶水提取物比低濃度茶具有更好的羥基自由基和DPPH自由基清除能力.1000 mg/kg濃度巫山神茶水提取物也表現(xiàn)出最好的抗突變效果.綜合分析得出，一定濃度的巫山神茶水提取物具有較好的體外功能性效果.

巫山神茶；抗氧化；抗突變

巫山神茶是產(chǎn)于重慶巫山長(zhǎng)江三峽流域的野生林擒樹葉加工而成的一種茶葉品種.林擒樹葉內(nèi)含有氮、磷、鉀，鈣、鎂、鋅、錳等礦物質(zhì)，同時(shí)還含有部分氨基酸和黃酮類化合物[1].檢驗(yàn)抗氧化和抗突變能力是判斷功能性食品功效的重要部分，現(xiàn)在巫山神茶作為地方特產(chǎn)已經(jīng)推向市場(chǎng)，但是關(guān)于其功能性效果的科學(xué)研究還未開始，為了初步驗(yàn)證巫山神茶的抗氧化及抗突變效果，本研究對(duì)巫山神茶進(jìn)行了體外功能性研究.

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

市售重慶市巫山縣老高山茶葉基地出品的野生巫山神茶加工茶.

無水乙醚（色譜純），上海士瑞化工實(shí)業(yè)有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH），美國(guó)Sigma公司；DMSO日本純正化學(xué)株式會(huì)社；致突變物N-甲基-N‘-硝基-N-亞硝基胍（N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine，MNNG），美國(guó)Aldrich公司.

標(biāo)準(zhǔn)菌株：TA100營(yíng)養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙氏菌，美國(guó)Sigma公司.

1.2 儀器與設(shè)備

LS-B75L型高壓蒸氣滅菌鍋，江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司；WPL-30型恒溫培養(yǎng)箱，江東精密儀器有限公司；UV-1750型紫外分光光度計(jì)，日本島津公司.

1.3 方法

1.3.1 茶水提物制備

參照大眾飲茶習(xí)慣，將粉碎的巫山神茶樣品在-50℃，2.0 Pa下進(jìn)行冷凍干燥后按茶水比1：10混合，然后用95℃蒸餾水提取，每次20 min，重復(fù)3次，合并提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后得到水提物待用.

1.3.2 羥基自由基清除能力測(cè)定

將6 mol/L濃度的脫氧核糖溶液0.2 mL，pH值7.4的磷酸鈉緩沖溶液0.2 mL，400 mmol/L濃度的FeCl3

溶液0.2 mL，400 mmol/L濃度的FeSO4-EDTA溶液0.2 mL，3 mol/L濃度的H2O2溶液0.2 mL，400 mmol/L濃度的抗壞血酸溶液0.2 mL和0.2 mL巫山神茶水提物溶液混合，在37℃水浴中放置60 min，再加入1 mL的三氯乙酸，1 mL的2-硫代巴比妥酸，混合溶液在90℃水浴中煮沸20～25 min后在532 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算清除自由基能力[2].

1.3.3 DPPH自由基清除能力測(cè)定

將100μL不同巫山神茶水提物和60μL的0.15 mmol/L的DPPH試劑混勻后加入96孔板中室溫下避光放置30 min，再在540 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值.測(cè)得的OD數(shù)值按公式計(jì)算：

清除DPPH自由基能力=[（對(duì)照值-對(duì)照空白值）-（樣品值-樣品空白值）]/（對(duì)照值-對(duì)照空白值）×100%，對(duì)照組為沒有加入樣品孔，空白組為加入樣品但沒有加入DPPH試劑孔[3].

1.3.4 Ames抗突變實(shí)驗(yàn)

巫山神茶水提物設(shè)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)劑量組（1.25 mg/皿和2.5 mg/皿）、自發(fā)回變組和對(duì)照組，每組設(shè)3個(gè)平行皿.滅菌的試管中加入磷酸鹽緩沖液，濃度為1～2×109個(gè)/m L的培養(yǎng)12 h后的菌液0.1 mL、樣品物質(zhì)提取物溶液0.05 mL和致突變物（MNNG）0.05 mL.輕微震蕩后37℃下放置30 min后加入頂層培養(yǎng)基2 mL混合，再倒在底層培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)48 h后進(jìn)行平板計(jì)數(shù)計(jì)算結(jié)果[4].

抑制率=（對(duì)照組菌落數(shù)-樣品處理組菌落數(shù)）/（對(duì)照組菌落數(shù)-自發(fā)回變組菌落數(shù)）×100%.

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

使用SAS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得到數(shù)據(jù)采用one-way ANOVA法分析數(shù)據(jù)結(jié)果是否存在差異性（p＜0.05）.

2 結(jié)果與分析

2.1 巫山神茶的抗氧化效果

已有的研究表明，通過判斷羥基自由基和DPPH自由基清除能力的強(qiáng)弱可以檢驗(yàn)茶葉的抗氧化能力[5].通過預(yù)試驗(yàn)，可以確定在0.2～1.0 mg/m L濃度下巫山神茶水提物的清除自由基能力呈梯度表示，過低濃度下水提物清除自由基能力未能顯示出，過高濃度下能力接近100%，所以本研究選用0.2、0.5和1.0 mg/m L濃度為試驗(yàn)濃度.由圖1和圖2可知，在0.2、0.5和1.0 mg/m L這三個(gè)濃度下，隨著濃度的升高，巫山神茶水提物的羥基自由基和DPPH自由基清除能力均得到提高，并且各濃度下巫山神茶水提物的自由基清除能力具有明顯差異（p＜0.05），可以看出巫山神茶是一種具有較強(qiáng)抗氧化效果的茶葉.

2.2 巫山神茶的抗突變效果

巫山神茶水提物對(duì)致突變物N—甲基—N′硝基—N—亞硝基胍（MNNG，0.4 mg/皿）誘導(dǎo)的TA100菌具有一定的抑制作用.由表1可知，巫山神茶水提物濃度為1.25和2.5 mg/皿時(shí)抑制率分別為51.6%和76.3%，

在增加樣品濃度后，抗突變效果也明顯增加.茶葉中提取物具有很強(qiáng)的抗突變效果，它不僅有促進(jìn)細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)功能，也有減少誘變劑活化表現(xiàn)抗誘變功能，可以作為去突變劑[6].食品的抗氧化效果與抗突變效果相對(duì)應(yīng)，抗氧化性強(qiáng)的食品常常也表現(xiàn)出強(qiáng)的抗突變性[7-8].由此可見，巫山神茶具有抗突變作用，并且抗突變效果隨濃度的增加而增強(qiáng).

3 結(jié)論

巫山神茶是一種新近開發(fā)的茶葉品種，現(xiàn)已作為一種保健茶被飲用.本文以巫山神茶為研究對(duì)象進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)，從抗氧化和抗突變的實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出巫山神茶具有較強(qiáng)的體外功效，為指導(dǎo)人們更好地飲用巫山神茶這種保健品提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù).

[1]李保國(guó)，徐愛春，齊國(guó)輝，等.紅富士蘋果葉片主要礦質(zhì)元素含量變化規(guī)律研究[J].河南林果研究，2006，21（3）：296-299.

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In Vitro Antioxidant and Antimutagenic Effects of Wu Shan Shen Cha Aqueous Extract

ZHOU Lu,ZHAO Xin,LIGui-jie,FU Li-ping
(Department of Biological and Chem ical Engineering,The Second Normal College of Chongqing,Chongqing 400067,China)

One Wu Shan Shen Cha productwas purchased for the evaluation of in vitro antioxidant and antimutagenic effects.In vitro experiments were used to check its functional effects.High concentration of Wu Shan Shen Cha aqueous extract increased the hydroxyl and DPPH radicals scavenging abilities compared to the low concentration.In this study,at the concentration of 1000 mg/kg,Wu Shan Shen Cha aqueous extract showed the best antimutagenic effect.These results suggest that Wu Shan Shen Cha aqueous extract proved good in vitro functional effect.

Wu Shan Shen Cha;antioxidant;antimutagenicity

TS201.4

A

1008-2794（2014）04-0075-03

2013-09-07

趙欣，教授，博士，研究方向：功能性食品，E-mail：foods@live.cn.