MMP-1、IL-6及VEGF與川崎病患兒冠狀動(dòng)脈損傷的關(guān)系

馬春利，薛 滿

(寶雞市人民醫(yī)院兒科，陜西 寶雞 721000)

川崎病又稱皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征，其基本病理改變是全身性血管炎，最主要和嚴(yán)重的并發(fā)癥是合并冠狀動(dòng)脈損傷(coronary artery lesions,CAL)，早期表現(xiàn)為冠狀動(dòng)脈炎及冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張，后期表現(xiàn)為冠狀動(dòng)脈狹窄、冠狀動(dòng)脈瘤甚至猝死[1-2]，受累患兒中約有5%最終出現(xiàn)嚴(yán)重的CAL[3]，是引發(fā)兒童后天性心臟病的重要因素之一。然而，CAL發(fā)病機(jī)制仍未完全明確。本研究通過檢測(cè)不同時(shí)期川崎病患兒血清基質(zhì)金屬蛋白酶1(matrix metalloproteinases-1,MMP-1)、白細(xì)胞介素6(interleukin-6,IL-6)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平，探討其在小兒川崎病CAL中的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2011年5月至2013年5月寶雞市人民醫(yī)院收治的川崎病患兒54例作為川崎病組，其中男33例、女21例，年齡7個(gè)月至8歲，平均年齡(4.4±1.4)歲。患兒病程分為急性期(3～10 d；起病至靜脈注射液免疫球蛋白治療前)和緩解期(>21 d)。靜脈注射液免疫球蛋白治療前行超聲心動(dòng)圖檢查冠狀動(dòng)脈情況，將川崎病患兒分為CAL組30例，男19例、女11例，年齡7個(gè)月至8歲，平均(4.1±1.4)歲；無冠狀動(dòng)脈損傷(not coronary artery lesions，NCAL)組24例，男14例、女10例，年齡8個(gè)月至7歲，平均(4.1±1.4)歲。并且選取同期健康體檢兒童20例為健康對(duì)照組，男11例、女9例，年齡6個(gè)月至7歲，平均(4.2±1.3)歲。各組間在性別、年齡等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn) 川崎病診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：①持續(xù)發(fā)熱5 d以上；②雙眼球結(jié)膜充血；③口唇和口腔改變，唇干裂鮮紅，草莓舌，口腔及咽黏膜彌漫性充血；④多形性紅斑或猩紅熱樣皮疹；⑤四肢末端改變，急性期手足硬性水腫，掌趾及指趾末端紅斑，恢復(fù)期甲床皮膚移行處膜樣蛻皮；⑥急性非化膿性頸淋巴結(jié)炎。以上6項(xiàng)中含有5項(xiàng)即可診斷。

冠狀動(dòng)脈病變?cè)\斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：①正常(0度)為血管壁灰度增強(qiáng)，冠狀動(dòng)脈內(nèi)徑正常，1～3歲<3.5 mm或冠狀動(dòng)脈內(nèi)徑與主動(dòng)脈根部?jī)?nèi)徑之比各年齡組均<0.3；②輕度(Ⅰ度)為冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張明顯但局限，冠狀動(dòng)脈內(nèi)徑<4 mm；③中度(Ⅱ度)為內(nèi)徑4～7 mm，可單處、多處或彌漫性；④重度(Ⅲ度)為巨大冠狀動(dòng)脈瘤，冠狀動(dòng)脈內(nèi)徑≥8 mm，彌漫性或累及1支以上。

1.3治療方法 入院明確診斷后給予免疫球蛋白(上海生物制品研究所有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號(hào):118355)1.0～2.0 g/kg，靜脈滴注，連用2 d，同時(shí)口服阿司匹林(上海信誼藥廠有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20110503A)50 mg/(kg·d)治療。

1.4血液樣本采集 分別采集川崎病患兒急性期和緩解期時(shí)靜脈血及健康對(duì)照組兒童靜脈血4～5 mL，用微量移液器取留取血清1～2 mL，-80 ℃保存待測(cè)。實(shí)驗(yàn)過程中血標(biāo)本采集經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，并且所有入選研究對(duì)象均由監(jiān)護(hù)人代為簽署知情同意書。

1.5檢測(cè)方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法分別檢測(cè)血清MMP-1、IL-6及VEGF水平。MMP-1與IL-6試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司(批號(hào):028649)，VEGF試劑盒購(gòu)自上海滬宇生物科技有限公司(批號(hào)：110566)。實(shí)驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行，后在Infinite F200型多功能酶標(biāo)儀(瑞士Tecan公司)上進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用ALCYON300(雅培)全自動(dòng)生化分析儀及雅培生化試劑(批號(hào)：453A5)檢測(cè)川崎病患兒血清白蛋白水平，應(yīng)用德國(guó)拜耳公司ADVIA70全自動(dòng)學(xué)細(xì)胞分析儀測(cè)定患兒血白細(xì)胞水平。

2 結(jié) 果

2.1川崎病患兒急性期和緩解期血清MMP-1、IL-6及VEGF水平變化 川崎病患兒急性期和緩解期血清MMP-1、IL-6及VEGF,白細(xì)胞，白蛋白水平顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)；緩解期血清MMP-1、IL-6及VEGF，白細(xì)胞，白蛋白水平均有顯著下降，但仍高于健康對(duì)照組(P<0.05)(表1)。

2.2川崎病患兒CAL組與NCAL組血清MMP-1、IL-6及VEGF水平比較 無論急性期還是緩解期，CAL組MMP-1、IL-6及VEGF水平均高于NCAL組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

2.3急性期川崎病患兒血清MMP-1、IL-6及VEGF水平相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，MMP-1及IL-6與外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)(r=0.69，P<0.05；r=0.78，P<0.01)，然而，VEGF水平與血清白蛋白呈負(fù)相關(guān)(r=-0.63，P<0.01)。

表1 川崎病患兒急性期和緩解期血清MMP-1、IL-6及VEGF水平變化

表2 川崎病患兒CAL組與NCAL組血清MMP-1、IL-6及VEGF水平比較

CAL:合并冠狀動(dòng)脈損傷；NCAL:無冠狀動(dòng)脈損傷

3 討 論

川崎病的基本病理改變?yōu)槿硇匝苎?，主要累及中小?dòng)脈，特別是冠狀動(dòng)脈最易受累，其嚴(yán)重程度是決定川崎病預(yù)后的主要因素[6]。然而，截至目前川崎病CAL的發(fā)生機(jī)制還不清楚。近年研究表明，川崎病患兒體內(nèi)單核/巨噬細(xì)胞大量激活，產(chǎn)生大量炎性細(xì)胞因子直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞[7]，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)代謝紊亂、血管基膜破壞通透性增加、細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞)凋亡和遷移以及血管結(jié)構(gòu)重建等病理變化，最終促使冠狀動(dòng)脈早期炎癥及擴(kuò)張，晚期冠狀動(dòng)脈狹窄、冠狀動(dòng)脈瘤等[8]。

MMP-1又稱間質(zhì)膠原酶，是MMPs家族中的重要成員之一。研究發(fā)現(xiàn)MMP-1參與多種炎性反應(yīng)，與血管病變關(guān)系密切，在腹主動(dòng)脈瘤、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化及急性冠狀動(dòng)脈綜合征等心血管疾病時(shí)MMP-1表達(dá)明顯增加[9-10]。IL-6主要來源于巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，是一種重要的促炎性因子[11]，其過度表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞損傷，多項(xiàng)研究表明[12-13]，川崎病患兒血漿IL-6水平較健康對(duì)照組兒童明顯增高，提示其可能參與川崎病的發(fā)生。VEGF是一種特異性作用于血管內(nèi)皮的多功能糖蛋白，具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分裂及增加微血管通透性等功能。Ueno等[14]通過研究川崎病患兒急性期血管炎，發(fā)現(xiàn)血清VEGF水平異常增高，并發(fā)CAL者增高更加明顯。

基于以上炎癥因子的作用及相關(guān)研究，本試驗(yàn)觀察川崎病患兒不同時(shí)期(急性期及緩解期)血清MMP-1、IL-6及VEGF水平，發(fā)現(xiàn)其較健康對(duì)照兒童顯著升高，與先前研究結(jié)果[6,11]一致。同時(shí)本研究結(jié)果進(jìn)一步顯示，伴有CAL的川崎病患兒血清MMP-1、IL-6及VEGF水平升高較NCAL者更為顯著。另外，Pearson相關(guān)分析顯示，MMP-1和IL-6與外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)，而VEGF水平與血清白蛋白呈負(fù)相關(guān)。

綜上所述，川崎病時(shí)免疫系統(tǒng)過度激活，單核/巨噬細(xì)胞大量增殖與活化，致與血管炎癥相關(guān)的MMP-1、IL-6及VEGF水平明顯增加，且與病變呈趨勢(shì)一致的動(dòng)態(tài)變化，表明三者水平的增高可能參與川崎病冠狀動(dòng)脈損害的病理生理過程。因此，對(duì)于懷疑川崎病的患兒，聯(lián)合測(cè)定血清MMP-1、IL-6及VEGF水平，可作為診斷川崎病及其冠狀動(dòng)脈損害的可靠實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，為臨床診斷、治療及預(yù)防冠狀動(dòng)脈損害提供依據(jù)。

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