劉一錦

（賀蘭縣農(nóng)牧漁業(yè)局，寧夏賀蘭 750200）

冷凍精液稀釋液保護(hù)劑成分探究

劉一錦

（賀蘭縣農(nóng)牧漁業(yè)局，寧夏賀蘭 750200）

為了長時(shí)間的保存種畜精液并且能夠擴(kuò)大精液的劑量，在鮮精中加入一定的保護(hù)溶液，即通常所說的“稀釋液”。盡管目前稀釋液的種類較多，其目的都是為了保護(hù)精子有一個(gè)適于的存活環(huán)境，它需要維持適合的滲透壓和電解質(zhì)平衡，保證精子細(xì)胞膜的完整不受到損害，維持精清的環(huán)境，能供給精子營養(yǎng)，提高其耐低溫性，抗凍性，精子的活力和頂體完整，降低精子畸形，因此在稀釋液中常加入一些保護(hù)劑成分。

冷凍精液稀釋液； 保護(hù)劑

1 糖類

糖類對(duì)于精子營養(yǎng)作用是補(bǔ)充精子的能量消耗。如在稀釋液中加葡萄糖、果糖，可為精子提供能量，糖類物質(zhì)是維持活力的能源，目前稀釋液中常用的有蔗糖、葡萄糖、果糖。應(yīng)該注意到的是不同畜種在對(duì)糖類選擇上有所不同，也有1—2種并用，普遍認(rèn)為以果糖更好，但是果糖價(jià)格貴，在大批量凍精生產(chǎn)中，要盡可能適量給與補(bǔ)充。糖類對(duì)精子在低溫情況下有保護(hù)作用，其機(jī)理目前尚未清楚。牛的精液稀釋液中以糖溶液為基礎(chǔ)液，在國內(nèi)常用的有12%蔗糖、3%葡萄糖和2.5%果糖。

2 卵黃

國內(nèi)使用較為普遍，因?yàn)槁腰S中脂蛋白、卵磷脂類對(duì)精細(xì)胞在受到降溫和冷刺激時(shí)可以起到較好的保護(hù)作用，目前對(duì)保護(hù)作用的解釋有兩種，一是精子自身所含有的卵磷脂類為縮醛磷脂，其融點(diǎn)高，受到低溫影響時(shí)發(fā)生凝固而使精子遭受冷休克，而卵磷脂能夠替代精細(xì)胞中縮醛磷脂，使用含卵黃比含磷脂的稀釋液對(duì)精子的存活更有利。另一種解釋的是精子遭受冷休克，頂體蛋白會(huì)受到破壞，稀釋液中加入卵黃可以防止精子損失頂體蛋白。稀釋液中卵黃的比例一般在15～20%，稀釋液中加入卵黃后充分?jǐn)嚢?；卵黃的來源應(yīng)是來自健康雞場(chǎng)的新鮮雞蛋。

3 抗凍劑

在0～10℃區(qū)間時(shí)精細(xì)胞的代謝和活動(dòng)力都很低，這是維持生命的最好溫區(qū)，在冷凍精液技術(shù)開發(fā)前，被廣泛采用。而在正常動(dòng)物體溫—0℃區(qū)間時(shí)精子的代謝能力降低，活力減弱，緩慢的降低溫度對(duì)精子的存活力沒有不良的影響。將精液從體溫狀態(tài)下緩慢降至-15℃左右溫度保存可便于長途運(yùn)輸。

各種試驗(yàn)證明在精液稀釋液中添加乙二胺四乙酸（EDTA）、丙三醇（甘油）、二甲基亞砜、低濃度甲醛（0.025%）可作為抗凍劑，在這其中甘油仍是公認(rèn)的一種較理想的抗凍劑。甘油在冰點(diǎn)（0℃）以下，甘油的理化特性具有溶于水不宜發(fā)生結(jié)晶、吸水性強(qiáng)和降低水溶液冰點(diǎn)的特點(diǎn)；當(dāng)精液冷凍時(shí)，主要受到危害是冰晶從精細(xì)胞原生質(zhì)中抽去的水，使細(xì)胞造成脫水狀態(tài)，發(fā)生不可逆的變化死亡，而甘油可以減少和降低這種對(duì)精細(xì)胞的損害作用，牛冷凍精液稀釋液中添加甘油量，一般以精液稀釋后最終甘油濃度在3.5～5.0%之間為宜。

4 緩沖劑（調(diào)整pH值）

精子在副睪中處于弱酸，射精后副性腺分泌物偏堿中和，射出后的精液pH在7.0左右，精子呼吸、活動(dòng)等代謝產(chǎn)物可影響精液pH，緩沖劑能夠起到調(diào)整酸堿度（pH）的作用，防止pH值過大或過小酸或堿過大，常用的有檸檬酸鈉、磷酸二氫鈉（鉀）、三羥甲基甲烷（Tris），這些對(duì)精子代謝性酸中毒和酶活動(dòng)反應(yīng)具有良好的緩沖作用，國內(nèi)目前稀釋液中常用的基礎(chǔ)液是2.9%的檸檬酸鈉溶液，其pH接近精液并且與精液基本等滲透壓，國外很多國家在稀釋液中添加Tris對(duì)提高冷凍精液質(zhì)量有較好的作用。

5 非電解質(zhì)

副性腺分泌物的電離度，比副睪中精液高很多，射出后可能會(huì)使精子短時(shí)間失去電荷發(fā)生凝結(jié)現(xiàn)象，因此稀釋液中添加非電解質(zhì)物質(zhì)緩和副性腺分泌物的電離程度，常用的非電解質(zhì)有各種糖類，還有氨基乙酸等，有的稀釋液有糖類，也適當(dāng)可加入氨基乙酸。

6 抑菌物質(zhì)

為抑菌稀釋液中添加抗菌素，應(yīng)該注意到添加抗菌素的量是否足夠?？咕刈詈脤?shí)現(xiàn)用現(xiàn)添加，國外有建議，在應(yīng)用前6h內(nèi)添加抗菌素。國內(nèi)目前用青、鏈霉素較普遍，每100ml稀釋液中加青、鏈霉素5～10萬IU。

7 抗氧化物質(zhì)

精子生精過程中的各抗氧化酶活性相互協(xié)調(diào)、相互影響?？寡趸缸鳛橐粋€(gè)完整的抗氧化體系保證精子的發(fā)生。生精過程中，各酶的活性并不是處于一個(gè)恒定水平，而是隨著生精細(xì)胞發(fā)育與分化的不同階段或周期呈現(xiàn)有規(guī)律性的動(dòng)態(tài)變化，在雄性動(dòng)物曲細(xì)精管不同的生精上皮周期 SOD 活性水平并不相同。生精細(xì)胞中抗氧化酶mRNA的水平隨雄性動(dòng)物不同日齡及不同的生精上皮周期而呈現(xiàn)階段性特異性。與其相關(guān)的添加成分主要包括鋅、硒、銅、鈣和鎂和維生素C維生素B12和維生素C以及氧化物歧化酶（SOD）等，它可以進(jìn)入細(xì)胞并具有抗自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的作用，從理論上優(yōu)于超氧化物歧化酶（SOD），用來治療由于自由基損傷所致的各種疾病。

8 結(jié)語和展望

維生素在精液保存中的應(yīng)用研究具有廣闊的前景，尤其對(duì)于提高人工授精的精子受精率也有非常重要意義。但各種維生素在不同家畜精液保存中應(yīng)用的研究報(bào)道結(jié)果不盡一致，還需要進(jìn)一步的深入研究。另外，此前的研究大都集中在單一維生素對(duì)精液保存的效果，而很少涉及到兩種或更多種維生素同時(shí)添加對(duì)精子質(zhì)量的影響。因?yàn)榫S生素B12、維生素E和C在精液保存過程中的作用機(jī)理不同，而且各種維生素在精液保存中所起的有利作用也有所不同，如果研究將多種維生素同時(shí)應(yīng)用于精液保存，勢(shì)必會(huì)更有利于精液的長期保存。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)提及亞硒酸鈉維生素E對(duì)牛冷凍精液影響的實(shí)驗(yàn)性資料甚少，但就理論依據(jù)如前面所指出，仍具有可行性。以此為筆者展開探究向冷凍精液的Tris卵黃稀釋液中添加了不同濃度的維生素和微量元素對(duì)精子的活力、精子的畸形、精子的頂體和存活時(shí)間都有一定積極的影響，對(duì)維持精子線粒體螺旋狀排列結(jié)構(gòu)起重要作用，維持精子頂體細(xì)胞膜的機(jī)能，防止細(xì)胞、組織免受氧化物損害。也可被認(rèn)為是一種營養(yǎng)補(bǔ)充劑，促進(jìn)輔酶Q的合成。