郝少君，李文俊，范莉莉，張正臣

（中國(guó)人民解放軍第371中心醫(yī)院，新鄉(xiāng) 453000）

HPLC法測(cè)定康腎口服液中人參皂苷的含量*

郝少君，李文俊，范莉莉，張正臣

（中國(guó)人民解放軍第371中心醫(yī)院，新鄉(xiāng) 453000）

[目的]研究康腎口服液用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定其人參皂苷的含量。[方法]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水（18∶82）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm。理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。[結(jié)果]人參皂苷Rg1濃度在0.053～0.265 g/L范圍內(nèi)，人參皂苷Re濃度在0.037～0.185 g/L范圍內(nèi)，峰面積與濃度線性關(guān)系良好，平均回收率為99.12%。[結(jié)論]HPLC法測(cè)定康腎口服液中人參皂苷的含量，操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，可有效控制康腎口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

HPLC；康腎口服液；人參皂苷；含量測(cè)定

康腎口服液由人參、生黃芪、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、山藥、地龍、紅花、金櫻子、芡實(shí)、甘草等組成，具有益氣溫陽(yáng)，固本澀精，活血通絡(luò)之功[1-5]，用于慢性腎炎、腎病綜合癥、陽(yáng)痿早泄等作用[6-8]。為更好的控制藥品的質(zhì)量，對(duì)康腎口服液用高效液相色譜法測(cè)定其人參皂苷的含量進(jìn)行了研究[9-12]。

1 儀器和試藥

儀器：島津LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測(cè)器，N2000色譜工作站，試劑：乙腈為色譜純，水為二次重蒸水。藥品：康腎口服液由解放軍371醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)：20110425。人參皂苷Rg1對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110703-200322。人參皂苷Re對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110754-200320。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 取人參皂苷Rg1以乙腈-水（18∶82）流動(dòng)相為溶劑在200～400 nm范圍內(nèi)對(duì)人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行掃描，結(jié)果在203 nm處有最大吸收，故檢測(cè)波長(zhǎng)選定為203 nm。見(jiàn)圖1。

2.2 流動(dòng)相的選擇 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道及《中國(guó)藥典》中采用的流動(dòng)相，比較了3種流動(dòng)相，1）乙腈-水（18: 82），2）乙腈-0.05%磷酸溶液（19∶81），3）乙腈-0.1%磷酸溶液（19∶81），并設(shè)定柱溫為30℃。實(shí)驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為流動(dòng)相1）較理想，分離效果較好，保留時(shí)間適中。

圖1 人參皂苷Rg1以乙腈-水（18∶82）的流動(dòng)相為溶劑的紫外全波長(zhǎng)掃描圖Fig.1 The whole ultraviolet wavelength scanning figure of ginsenoside Rg1 with acetonitrile-water(18:82）mobile phase as the solvent

經(jīng)調(diào)整，將色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)確定為：色譜柱C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-水（18∶82），流速：1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10 μL，理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。色譜圖見(jiàn)圖2～4。

圖2 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re混合對(duì)照品色譜圖Fig.2 Chromatography of mixture reference substance of ginsenoside Rg1 and ginsenoside Re

圖3 康腎口服液樣品色譜圖Fig.3 Chromatogram of Kangshen oral liquid

圖4 缺人參的陰性樣品色譜圖Fig.4 Chromatogram of negative sample without ginseng

2.3 線性范圍、最小檢出量 將人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對(duì)照品制成不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣10 μL，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣濃度（X，g/L）進(jìn)行線性回歸，人參皂苷Rg1回歸方程為Y^=2E+07X-31862，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6；人參皂苷Re回歸方程為Y^= 79 249X-3 259.3，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7。結(jié)果表明，人參皂苷Rg1濃度在0.053～0.265 g/L范圍內(nèi)，人參皂苷Re濃度在0.037～0.185 g/L范圍內(nèi)，峰面積與濃度線性關(guān)系良好。

取線性關(guān)系試驗(yàn)項(xiàng)下的1號(hào)溶液，精密量取2mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，色譜圖中，信噪比>10∶1，所以最小檢出量<0.2 μg/mL。

2.4 溶液的制備

2.4.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，搖勻，即得。

2.4.2 供試品溶液的制備 取本品10 mL，用水飽和正丁醇振搖提取3次（30、20、10 mL），合并正丁醇液，依次用氨試液20 mL、水20 mL洗滌，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下的3號(hào)溶液，精密量取10 μL，連續(xù)測(cè)定6次，表明本法精密度良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD< 2%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品6份，分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果表明，樣品平均含量為0.195 g/L，RSD=0.95%，所考察方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備樣品，得樣品供試品溶液，取供試品溶液與對(duì)照品溶液，于0、1、2、4、8及24 h分別進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量10 μL，記錄峰面積值。結(jié)果對(duì)照品及樣品供試液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的樣品（批號(hào)：20110806），研細(xì)，取1 g，精密稱定，加人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液（0.53 g/L）2.5 mL和人參皂苷Re對(duì)照品溶液（0.37 g/L）2 mL，按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定峰面積，計(jì)算測(cè)得量，結(jié)果平均回收率為99.12%，RSD為1.02%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of sample recovery rate

2.9 樣品含量測(cè)定 取批號(hào)為20110806、20111011、20111208的3批康腎口服液樣品，分別進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=2）Tab.2 Results of the sample content determination（n=2）

由以上結(jié)果可知，此含量測(cè)定方法可運(yùn)用于康腎口服液的含量測(cè)定。

3 討論

康腎口服液以人參、黃芪為君藥，兩藥為辛、溫之品，入脾腎二經(jīng)，補(bǔ)腎健脾，固本澀精。山藥、白術(shù)等健脾生精化源為臣藥，重在補(bǔ)后天之本，以助先天之本。淫羊藿、芡實(shí)、金櫻子溫陽(yáng)固本升精，澀精，以不致精微外泄。地龍、紅花化瘀血通經(jīng)絡(luò)，共為佐藥，使脾腎之絡(luò)氣通暢，又能升輕而降濁。甘草調(diào)和諸藥，又能緩和諸藥陽(yáng)熱過(guò)甚，兼有氣血雙補(bǔ)之功。以上諸藥密切配合，重點(diǎn)旨在補(bǔ)腎健脾，兼而活血，使正氣自復(fù)，瘀血自除，腎病得愈[6-8]。為確保制劑質(zhì)量，筆者探究了其主要成分含量標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)多次試驗(yàn)結(jié)果證明，氨試液、水洗滌正丁醇液可除去雜質(zhì)，避免雜質(zhì)峰干擾主峰。本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法測(cè)定康腎口服液中人參皂苷的含量，處理方法簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，不受其他成分干擾，因此可用于康腎口服液的質(zhì)量控制。

[1]王同聚，楊紅亞，陳維亮，等.舒脈寧注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].天津中醫(yī)藥，2012,29（1）：72-74.

[2]趙京生,易偉國(guó),張正臣.康腎口服液對(duì)血清尿素氮及肌酐水平的影響[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2013,30(11):1187-1189.

[3]趙京生，楊 君，胡 波，等.康腎口服液對(duì)大鼠heymann腎病模型腎臟組織形態(tài)的影響[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，28(2):217-218.

[4]趙京生，易偉國(guó).自擬康腎口服液對(duì)大鼠慶大霉素急性腎損傷模型的影響[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2013,30(8):54-56.

[5]易偉國(guó)，趙京生，張正臣.自擬康腎口服液對(duì)氺負(fù)荷的影響[J].實(shí)用醫(yī)藥雜，2013,30（8）:432-435.

[6]楊 君，趙京生，林新偉，等.康腎口服液治療慢性腎衰竭療效觀察[J].河北醫(yī)藥，2013,35(18)：2855-2856.

[7]趙京生，楊 君，林新偉，等.自制康腎口服液治療慢性腎小球炎150例[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志，2013,30（2）:128-129.

[8]趙京生.自制康腎口服液治療慢性腎炎的對(duì)比觀察[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志，2013，30(4):336-337.

[9]陳再興,袁長(zhǎng)季,李麗紅，等.RP-HPLC測(cè)定活血止痛片中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1含量[J].天津中醫(yī)藥，2007,24(5):414-415.

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[12]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)2010年版藥典Ⅰ部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

HPLC method for determining ginsenoside content in Kangshen oral liquid

HAO Shao-jun,LI Wen-jun,FAN Li-li,ZHANG Zheng-chen
（The 371st Hospital Center of Chinese People’s Liberation Army,Xinxiang 453000,China）

[Objective]To study the content of the ginsenoside in Kangshen oral liquid by HPLC method.[Methods]Take eighteen alkyl silane bonded silica as filler,water solution with acetonitrile(82∶18)as mobile phase;the detection wavelength was 203 nm.Number of theoretical plates by ginsenoside Rg1 peak calculation should not be less than 6000.[Results]The ginsenoside Rg1 concentration in the range of 0.053～0.265 g/L,ginseng saponin Re concentration in the range of 0.037～0.185 g/L,the peak area and the concentration had good linear relationship.The average recovery rate was 99.12%.[Conclusion]The HPLC method for the determination of ginsenoside content in Kangshen oral liquid has a feature of simple operation,good reproducibility.It can effectively control the quality standard of Kangshen oral liquid.

HPLC;Kangshen oral liquid;ginsenoside;content determination

R285.5

：A

：1672-1519（2014）03-0181-03

2013-10-12）

（本文編輯：高 杉，馬曉輝）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.03.17

河南省科學(xué)技術(shù)廳2009年科技發(fā)展計(jì)劃（092102 310202）。

郝少君（1965-），男，主任藥師，從事中藥制劑及藥理研究。

張正臣，E-meil:xxzzc2010@126.com。