陳永菊

摘要：采用C18（250 mm×4.6mm×5μm）反相色譜柱，在流動相為乙腈：水（88∶12，v/v），流速為1.0 ml/min，激發(fā)波長384 nm，發(fā)射波長406 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μl 的條件下，建立高效液相色譜法快速測定植物油中苯并芘殘留量的方法。結(jié)果：本方法的檢出限為0.5μg/kg，加標(biāo)回收率95%～103%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤2.7%。該法具有樣品預(yù)處理簡便，試劑消耗少，分析時間短、精密度高等優(yōu)點，適用于植物油中苯并芘殘留量的高效測定。

關(guān)鍵詞：植物油 苯并（а）芘 高效液相色譜

中圖分類號：TS20 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）06-0033-02

Abstract：A method for determination of benzopyrene in vegetable oil by High Performance Liquid Chromatography was established. Using C18 （250mm×4.6mm×5μm） reversed-phase column， with acetonitrile and H2O （88∶12，v/v） as mobile phase，flow rate was 1.0 ml/min， and excitation wavelength was 384nm and emission wavelength was 406 nm， and column temperature was 35℃， and injection volume was 10 μl. Results： The detection limit was 0.5μg/kg， and the recovery rate arange from 95% to 103%， and relative standard deviation RSD was ≤ 2.7%. This method is simple preparation， reagent consumption， short analysis time， precision advantages for vegetable oils and efficient determination of benzopyrene residues.

Key Words：vegetable oil benzopyrene High Performance Liquid Chromatography

苯并（а）芘（BaP）是一種由五個苯環(huán)構(gòu)成的多環(huán)芳烴，是公認(rèn)的強(qiáng)致癌物之一，已成為當(dāng)前環(huán)境污染中的重要監(jiān)測物質(zhì)[1，2，3]。苯并芘能夠引起皮膚、肺、食道等部位的腫瘤和癌變，廣泛存在于水、大氣、土壤、動植物中。植物油中苯并芘的主要來源包括：油料作物在晾曬過程中可能受到苯并芘污染；在浸出階段溫度過高可能產(chǎn)生苯并芘；在油料焙烤時也可能產(chǎn)生苯并芘。目前，我國檢測植物油中苯并芘的國標(biāo)測定方法（GB/T22509-2008）中，操作過程復(fù)雜，費時、費溶劑、溶劑毒性大、回收率不穩(wěn)定、對試劑和人員要求較高等問題，以致我國很多基層檢驗機(jī)構(gòu)不能很好地用此法對植物油中苯并芘殘留進(jìn)行有效檢測。因此，尋求更為準(zhǔn)確、快速、簡便的檢測方法，對植物油中苯并芘殘留進(jìn)行高效的定性定量分析具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試劑

乙腈、四氫呋喃均為色譜純（TEDIA）；水為去離子水；濾膜（0.22μm，有機(jī)相）；苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)品購于國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent1200高效液相色譜儀（配熒光檢測器FLD）；渦旋混合器。

1.3 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18色譜柱（250×4.6mm，5μm）；流速：1.0mL/min；流動相：乙腈+水（88+12）；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL；激發(fā)波長384nm；發(fā)射波長406[4]。

1.4 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2.0g樣品，置于10ml容量瓶中，加入5ml四氫呋喃后，搖勻后用乙腈定容，搖勻后過0.22μm有機(jī)濾膜，供HPLC檢測分析。

1.5 回收率、精密度及檢出限的測定

稱取均勻破碎試樣約2g，添加定量的BaP標(biāo)準(zhǔn)品，混勻，余下操作按1.3～1.4進(jìn)行，計算回收率；將濃度為0.01μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)樣品按最佳色譜條件重復(fù)測定6 次并取平均值計算精密度；對添加逐級稀釋得低濃度水平的BaP標(biāo)準(zhǔn)品的食用植物油進(jìn)行測定，得到方法的檢出限；采用本方法和國標(biāo)GB/T22509-2008兩種方法，對計算結(jié)果進(jìn)行分析比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測器的選擇

BaP在紫外和熒光下都有吸收峰。但熒光檢測器只對帶熒光基團(tuán)的物質(zhì)有響應(yīng)，因此可有效去除那些不帶有熒光基團(tuán)的雜質(zhì)對樣品測定的干擾，大大提高BaP的檢測靈敏度，故本文采用熒光檢測器檢測。

由于大多數(shù)有熒光的化合物在230nm波長下都能被激發(fā)，因此在230nm激發(fā)波長下選擇多波長發(fā)射，發(fā)現(xiàn)406nm為最佳發(fā)射波長，在固定406nm發(fā)射波長后選擇多波長激發(fā)，最終選擇激發(fā)波長384nm，發(fā)射波長為406nm（圖1）。

2.2 苯并芘高效液相色譜測定條件

比較了3種流動相，分別為乙腈+水（84+16）、乙腈+水（88+12）、乙腈+水（90+10），發(fā)現(xiàn)乙腈+水（88+12）條件下苯并芘和樣品中干擾物能達(dá)到較好的基線分離；流速為1.0ml/min 時，苯并芘出峰時間約為12.5min，分析時間短，有利于快速分析且峰形較好，基本達(dá)到基線分離效果。

2.3 線性關(guān)系與檢測限

對BaP標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋后，配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0.5μg/L、2.5μg/L、5.0μg/L、10μg /L、25μg/L、50μg/L，進(jìn)樣高效液相色譜儀上機(jī)測定，以峰面積A對BaP濃度Amt（μg/L）作線性回歸方程，A=1.13136927Amt+2.2138403，線性相關(guān)系數(shù)r=0.99985，線性關(guān)系良好，可以依據(jù)此方程進(jìn)行定量分析。根據(jù)對添加低濃度水平的BaP樣品的測定，以3倍信噪比計算檢出限得到，本方法的檢出限為0.5μg/kg。

2.4 加標(biāo)回收率和精密度

為了計算檢測方法的回收率和考察本方法的實用性，向大豆油（圖2）和花生調(diào)和油（圖3）2份樣品中，分別加入2種不同濃度BaP標(biāo)樣（表1），經(jīng)樣品前處理后，采用HPLC檢測。結(jié)果顯示，選定的樣品經(jīng)處理后，樣品中BaP的加標(biāo)回收率在95%～103%之間，RSD≤2.7%，符合食品檢驗分析的要求；與國標(biāo)GB/T22509-2008試驗結(jié)果對比，結(jié)果說明：本方法樣品前處理簡便，且回收率和精密度均較高，方法高效實用。

3 討論

該研究建立了利用高效液相色譜法高效快速測定食用植物油中苯并芘殘留的方法。試驗結(jié)果表明，其回收率為95%～103%，最低檢出量為2.5μg/kg，符合國標(biāo)中對食用植物油中苯并芘的檢測要求。該法樣品預(yù)處理簡單，試劑消耗少，分析時間短，明顯提高了檢測效率。且其準(zhǔn)確性和精密度好，是測定食用植物油中苯并芘含量的較理想方法。

參考文獻(xiàn)

[1]李偉紅，戴廷燦，周瑤敏 等.高效液相色譜法測定熟肉制品中的苯并（α）芘[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報， 2008，20（1）： 86～88.

[2]劉福嶺，戴行均.食品物理與化學(xué)分析方法[M].北京： 輕工業(yè)出版社，1987：41l～425.

[3]Meudec A， Dussauze J，Jourdin M， et al. Gas chromatographic mass spectrometric method for polycyclic aromatic hydrocarbon analysis in plant biota[J].Journal of Chromatography A， 2006， 1108（2）：240-247.

[4]田曉玲，柏云江.高效液相色譜法測定飼料中的苯并（a）芘[J].飼料工業(yè)，2005，26（1）： 53～54.