蔡雙雙等

摘要：從湖北省黃陂地區(qū)肉鴨養(yǎng)殖場送檢病料中分離到2株疑似鴨沙門氏菌（Salmonella），經(jīng)普通培養(yǎng)基培養(yǎng)、生化試驗、PCR鑒定、藥物敏感性試驗，鑒定為鴨源鼠傷寒沙門氏菌，分別命名為HP-2和HP-3株。該菌對多種抗生素具有耐藥性，用分離鑒定的沙門氏菌HP-2株感染小鼠，小鼠全部死亡。經(jīng)皮下注射途徑感染13日齡雛鴨，致病性試驗結(jié)果顯示，試驗雛鴨死亡率達60%，引起纖維素性心包炎、纖維素性肝被膜炎和纖維素性肺炎，說明此株沙門氏菌具有強致病性。藥物敏感性試驗結(jié)果顯示，沙門氏菌HP-2和HP-3株對氯潔霉素、萬古霉素、麥迪霉素、氧哌嗪青霉素、苯唑青霉素有耐藥性。

關(guān)鍵詞：鴨；沙門氏菌（Salmonella）；分離鑒定；致病性

中圖分類號：S834 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）02-0378-04

Identification and Pathogenicity of Salmonella typhimurium Isolated from Duckling

CAI Shuang-shuang1，YANG Xu2，ZHONG Xiao-li3，YANG Jun3，XIANG Yu3，GU Chang-qin3，

ZHANG Wan-po3，CHENG Guo-fu3，HU Xue-ying3

（1. Hubei Three Gorges Vocational and Technical College， Yichang 443000， Hubei， China；2. Animal Disease Prevention and Control Center in Enshi Prefecture of Hubei Province， Enshi 445000， Hubei， China；3. College of Veterinary Medicine， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China）

Abstract：Two suspected strains of Salmonella were isolated from the clinical samples of meat ducks belonging to a meat duck farm located in Huangpi District of Hubei province. By cultured on normal medium， biochemical test， PCR identification， animal regression， drug susceptibility test， the two strains were identified duck intestine as Salmonella typhimurium and named as HP-2 and HP-3. The two strains were resistant to multiple antibiotics. Mice were all dead after infected with the HP-2 strain. After subcutaneous infection of 13-days-old ducklings， it showed that the mortality could approach 60% and there were fibrinous pericarditis，fibrinous glissonitis and fibrinous pneumonia， indicating that the HP-2 strain was of serious pathogenicity. The results of drug susceptibility tests showed the HP-2 and HP-3 strains were resistant to clindamycin，vancomycin，mydecamycin，piperacillin and oxacillin.

Key words：duck； Salmonella； identification；pathogenicity

沙門氏菌（Salmonella）是一種重要的食源性細菌病病原，由于沙門氏菌存在著地域性、高發(fā)病率和大范圍的食物污染性等特點，成為了世界公共衛(wèi)生安全的關(guān)注重點[1]。人類多是由于接觸或食用被污染的食物、水而感染沙門氏菌，而攜帶沙門氏菌的家禽的糞便、肉、蛋類等成為重要的污染源。相對雞肉和雞蛋而言，鴨肉因其低脂肪和高蛋白組成，更有利于沙門氏菌的生存[2]。鴨獨特的生物學特性和生活習性往往使其成為隱性帶菌者，從而更加重了沙門氏菌對人類的潛在危害，因此，對鴨沙門氏菌的研究具有重要意義。

沙門氏菌廣泛存在于環(huán)境中，可通過消化道、生殖道、呼吸道等多種途徑感染多種家禽、家畜，導致沙門氏菌病的暴發(fā)和流行[3，4]，對養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。鴨沙門氏菌病的報道并不多見，本試驗從臨床疑似感染病鴨體內(nèi)分離到2株鴨沙門氏菌，并以分離的鴨沙門氏菌感染小鼠和雛鴨，觀察其致病性及致病特點，從而為鴨沙門氏菌病的診斷提供依據(jù)，有助于鴨沙門氏菌病的預防和控制。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

湖北省黃陂地區(qū)肉鴨養(yǎng)殖場送檢疑似感染病鴨；1日齡櫻桃谷雛鴨20羽，購自武漢市畜牧科學研究所；昆明小鼠20只，購自中國科學院武漢病毒研究所實驗動物中心。

1.2 沙門氏菌的分離及初步鑒定

2 結(jié)果與分析

2.1 鴨沙門氏菌的分離及結(jié)果鑒定

細菌經(jīng)37 ℃培養(yǎng)18～24 h，在TSA培養(yǎng)基上形成圓形、隆起、表面光滑濕潤、直徑大部分約1 mm、少部分2～3 mm的無色透明菌落。挑取菌落涂片做革蘭氏染色鏡檢，可見細菌為革蘭氏陰性短桿菌，無芽孢，單個或成雙排列。病料中共分離到2株細菌，分別命名為HP-2和HP-3。

2.2 生化試驗結(jié)果

生化試驗結(jié)果顯示分離的沙門氏菌HP-2和HP-3均對硫化氫、葡萄糖、山梨醇、枸櫞酸鹽、賴氨酸、鳥氨酸試驗為陽性；尿素、葡萄糖酸鹽、蛋白胨水、側(cè)金盞花醇、棉子糖、苯丙氨酸、木糖試驗為陰性。MR試驗陽性，VP試驗陰性。

2.3 藥敏試驗結(jié)果

對分離的沙門氏菌進行了藥敏試驗，此次鴨場分離的沙門氏菌對氯潔霉素、萬古霉素、麥迪霉素、紅霉素、氧哌嗪青霉素、苯唑青霉素、青霉素不敏感。而對氯霉素、痢特靈、復方新諾明、多年霉素B、奧復星、氟哌酸、美滿霉素、強力霉素、四環(huán)素、新霉素、卡那霉素、慶大霉素、丁胺卡那霉素、菌必治、復達欣、頭孢呋肟、先鋒霉素Ⅵ、先鋒霉素Ⅴ、先鋒霉素Ⅳ、羧芐青霉素、氨芐青霉素敏感。

2.4 鴨沙門氏菌的16S rRNA 的 PCR鑒定結(jié)果

HP-2和HP-3兩株細菌16S rRNA的PCR產(chǎn)物經(jīng)過凝膠電泳后發(fā)現(xiàn)兩株菌分別在750 bp處有特異性條帶。將擴增到的沙門氏菌16S rRNA產(chǎn)物進行測序，并進行BLAST比對。該菌與腸道沙門氏菌腸道亞種鼠傷寒血清型（Acc： AP011957，F(xiàn)Q312003等）序列分別達到100%和99%相似性，表明2個菌屬同源性較高。結(jié)合培養(yǎng)特征，確定該菌為鼠傷寒沙門氏菌，分別命名為HP-2和HP-3株。

2.5 鴨沙門氏菌對小鼠的致病性

試驗組小鼠于接種后12 h內(nèi)全部死亡，剖檢各臟器無明顯眼觀病變，死亡小鼠體內(nèi)分離到接種的沙門氏菌。

2.6 鴨沙門氏菌對雛鴨的致病性

2.6.1 試驗雛鴨的發(fā)病情況及臨床癥狀 雛鴨接種后1 d開始出現(xiàn)有精神沉郁，腳軟喜臥，站立不穩(wěn)的癥狀；有的病鴨出現(xiàn)下痢，糞便呈水樣，肛門附近多有白色糊狀物。接種1 d就有試驗鴨死亡，共死亡6羽，死亡率達60%。

2.6.2 試驗雛鴨的眼觀病理變化 試驗組雛鴨可見心包、腹膜增厚，心包液、腹水增多，纖維素性滲出，甚至導致臟器粘連；肝臟表面有一層黃白色的纖維素附著，且肝被膜與胸壁、心臟，腹膜發(fā)生粘連（圖1）；膽囊充盈；脾臟腫大，表面暗紅色網(wǎng)格狀，布滿白色斑塊，呈花斑狀（圖2）；腦、胸腺、法氏囊、腎組織未見明顯病變。對照組各器官組織無明顯眼觀病理變化。

2.6.3 試驗雛鴨的組織病理變化 試驗組雛鴨心外膜增厚，可見大量異嗜性粒細胞浸潤，有纖維素性滲出，還可見肉芽腫結(jié)構(gòu)（圖3）出現(xiàn)；肝被膜增厚，呈漿液纖維素性滲出，肝組織有局灶性壞死，壞死處呈均質(zhì)無結(jié)構(gòu)狀；血管周圍間隙增寬，有炎性細胞浸潤；肺臟被膜增厚，呈漿液纖維素性滲出，有大量異嗜性粒細胞浸潤（圖4），肺組織明顯淤血，血管周圍組織間隙增寬，血管周圍有炎性細胞圍繞；腎臟的腎小葉邊緣可見大量異嗜性粒細胞浸潤聚集（圖5），間質(zhì)有輕微出血。對照組雛鴨各器官組織未見明顯組織病理變化。

3 小結(jié)與討論

本試驗自湖北省黃陂地區(qū)肉鴨養(yǎng)殖場送檢病料中分離到2株疑似鴨沙門氏菌，經(jīng)細菌培養(yǎng)、生化試驗、PCR鑒定、藥物敏感性試驗，鑒定為鴨源鼠傷寒沙門氏菌，分別命名為HP-2和HP-3株。沙門氏菌有2 500多種血清型[5]，只有約10%分離自家禽。沙門氏菌的血清型分布具有地域性，而相同地區(qū)不同國家間的沙門氏菌血清型分布差別不大[6]。據(jù)報道鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌是分離率最多的血清型[4]。不同血清型沙門氏菌的致病性、感染宿主范圍和對象不同，因此實驗室以及診療機構(gòu)對沙門氏菌血清型的鑒定對疾病的治療尤為重要。

禽感染鼠傷寒沙門氏菌的許多病例有纖維素性肝周炎和心包炎，本試驗分離的HP-2株人工感染雛鴨，感染雛鴨出現(xiàn)典型的心包炎和肝周炎的病變，表明該分離株的致病性強。在臨床病理診斷上，易與鴨大腸桿菌病、鴨疫里默氏桿菌病、鴨鏈球菌病相混淆[7-9]，因此應做進一步的細菌分離鑒定進行確診。

近年來，由于養(yǎng)殖人員在養(yǎng)殖過程中為了預防某些疾病或是獲得短期治療效果往往濫用抗生素，導致沙門氏菌的耐藥現(xiàn)象越來越嚴重，甚至出現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象。通過藥敏試驗發(fā)現(xiàn)此次分離到的2株沙門氏菌的藥敏性略有不同，可能是由于不同地區(qū)用藥不同而導致菌株藥敏性的變化。但這2株菌整體上的耐藥現(xiàn)象并不嚴重，對大多數(shù)藥物都極為敏感。沙門氏菌在環(huán)境中廣泛存在且存活時間長，可通過多種途徑和方式感染多種畜禽及人類，對養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失，對環(huán)境造成嚴重污染，對人的健康造成嚴重危害，故對其藥敏試驗的研究有利于養(yǎng)殖場的正確用藥，以及時快速地控制病情的蔓延和發(fā)展，將損失降到最低。從長遠角度看，正確用藥也是生物安全的一種表現(xiàn)。

參考文獻：

[1] FREITAS C G，SANTANA P，SILVA P H，et al. PCR multiplex for detection of Salmonella Enteritidis，Typhi and Typhimurium and occurrence in poultry meat[J]. International Journal of Food Microbiology，2010，139（1-2）：15-22.

[2] ADZITEY F，RUSUL G，HUDA N. Prevalence and antibiotic resistance of Salmonella serovars in ducks，duck rearing and processing environments in Penang，Malaysia[J]. Food Research International，2011，45（2）：947-952.

[3] PARSONS S K， BULL C M，GORDON D M. Low prevalence of Salmonella enterica in Australian wildlife[J]. Environmental Microbiology Reports，2010，2（5）：657-659.

[4] SAIF Y M.禽病學[M]. 第十二版.蘇敬良，高 福，索 勛，譯.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012.744-759.

[5] STEVE Y S，PENDRAK M L， ABELA-RIDDER B，et al. An overview of Salmonella typing public health perspectives[J]. Clinical and Applied Immunology Reviews，2003，4（3）：189-204.

[6] HENDRIKSEN R S，VIEIRA A R，KARLSMOSE S，et al.Global monitoring of Salmonella serovar distribution from the World Health Organization Global Foodborne Infections Network Country Data Bank： Results of quality assured laboratories from 2001 to 2007[J]. Foodborne Pathology Disease，2011，8（8）：887-900.

[7] 胡薛英，谷長勤，程國富，等.人工感染鴨疫里氏桿菌雛鴨的病理學變化[J].中國獸醫(yī)科技，2004，34（3）：48-51.

[8] 蔡雙雙，張 紅，徐朋朋，等.鴨源致病性大腸桿菌的分離鑒定及致病性觀察[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2011，50（1）：118-121.

[9] LI M X，GU C Q，ZHANG W P，et al. Isolation and characterization of Streptococcus gallolyticus subsp. Pasteurianus causing meningitis in ducklings[J]. Veterinary Microbiology，2013，162（2/4）：930-936.

[3] PARSONS S K， BULL C M，GORDON D M. Low prevalence of Salmonella enterica in Australian wildlife[J]. Environmental Microbiology Reports，2010，2（5）：657-659.

[4] SAIF Y M.禽病學[M]. 第十二版.蘇敬良，高 福，索 勛，譯.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012.744-759.

[5] STEVE Y S，PENDRAK M L， ABELA-RIDDER B，et al. An overview of Salmonella typing public health perspectives[J]. Clinical and Applied Immunology Reviews，2003，4（3）：189-204.

[6] HENDRIKSEN R S，VIEIRA A R，KARLSMOSE S，et al.Global monitoring of Salmonella serovar distribution from the World Health Organization Global Foodborne Infections Network Country Data Bank： Results of quality assured laboratories from 2001 to 2007[J]. Foodborne Pathology Disease，2011，8（8）：887-900.

[7] 胡薛英，谷長勤，程國富，等.人工感染鴨疫里氏桿菌雛鴨的病理學變化[J].中國獸醫(yī)科技，2004，34（3）：48-51.

[8] 蔡雙雙，張 紅，徐朋朋，等.鴨源致病性大腸桿菌的分離鑒定及致病性觀察[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2011，50（1）：118-121.

[9] LI M X，GU C Q，ZHANG W P，et al. Isolation and characterization of Streptococcus gallolyticus subsp. Pasteurianus causing meningitis in ducklings[J]. Veterinary Microbiology，2013，162（2/4）：930-936.

[3] PARSONS S K， BULL C M，GORDON D M. Low prevalence of Salmonella enterica in Australian wildlife[J]. Environmental Microbiology Reports，2010，2（5）：657-659.

[4] SAIF Y M.禽病學[M]. 第十二版.蘇敬良，高 福，索 勛，譯.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012.744-759.

[5] STEVE Y S，PENDRAK M L， ABELA-RIDDER B，et al. An overview of Salmonella typing public health perspectives[J]. Clinical and Applied Immunology Reviews，2003，4（3）：189-204.

[6] HENDRIKSEN R S，VIEIRA A R，KARLSMOSE S，et al.Global monitoring of Salmonella serovar distribution from the World Health Organization Global Foodborne Infections Network Country Data Bank： Results of quality assured laboratories from 2001 to 2007[J]. Foodborne Pathology Disease，2011，8（8）：887-900.

[7] 胡薛英，谷長勤，程國富，等.人工感染鴨疫里氏桿菌雛鴨的病理學變化[J].中國獸醫(yī)科技，2004，34（3）：48-51.

[8] 蔡雙雙，張 紅，徐朋朋，等.鴨源致病性大腸桿菌的分離鑒定及致病性觀察[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2011，50（1）：118-121.

[9] LI M X，GU C Q，ZHANG W P，et al. Isolation and characterization of Streptococcus gallolyticus subsp. Pasteurianus causing meningitis in ducklings[J]. Veterinary Microbiology，2013，162（2/4）：930-936.