倪樹芳，姚文江

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院南京市第一醫(yī)院兒科，江蘇南京 210006)

·臨床經(jīng)驗(yàn)·

咽拭子快速培養(yǎng)在支原體感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值

倪樹芳，姚文江

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院南京市第一醫(yī)院兒科，江蘇南京 210006)

目的探討咽拭子快速培養(yǎng)在兒童肺炎支原體(MP)感染早期診斷中的價(jià)值。方法對(duì)104例兒童下呼吸道感染者同時(shí)進(jìn)行咽拭子肺炎支原體快速培養(yǎng)及MP-IgM檢測(cè)，比較兩者陽性率。結(jié)果病程≤7 d，MP快速培養(yǎng)陽性率(32.7%)明顯高于血清MP-IgM陽性率(16.4%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.976，P=0.046)，而病程＞7 d咽拭子MP快速培養(yǎng)陽性率(22.4%)低于MP-IgM檢測(cè)陽性率(55.1%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.004，P= 0.001)。結(jié)論病程≤7 d的患兒MP快速培養(yǎng)陽性率更高，MP快速培養(yǎng)對(duì)兒童MP感染的早期篩查診斷具有一定的參考價(jià)值。

咽拭子；肺炎支原體；快速培養(yǎng)

肺炎支原體(Mycoplasa pneumoniae，MP)是導(dǎo)致兒童急性下呼吸道感染的重要病原，其臨床表現(xiàn)多種多樣，如治療不徹底易反復(fù)發(fā)作，診斷不及時(shí)易誘發(fā)肺外并發(fā)癥，如腦炎、腎炎、心肌炎、肝功能受損、免疫性溶血性貧血等。因此探討肺炎支原體感染的早期診斷指標(biāo)具有重要意義。筆者于2012年1月至2013年8月對(duì)我院兒科住院及門診診治的104例兒童下呼吸道感染者進(jìn)行咽拭子支原體快速培養(yǎng)鑒定，并與MP-IgM檢測(cè)法(被動(dòng)凝集法)進(jìn)行比較，以探討咽拭子快速培養(yǎng)鑒定在支原體感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料本組患兒104例，其中男性47例，女性57例。發(fā)病年齡：＜2歲17例，2～8歲35例，8～14歲52例。下呼吸道感染的診斷(主要是支氣管炎和肺炎)符合諸福棠《實(shí)用兒科學(xué)》第7版的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。臨床表現(xiàn)均有咳嗽，多為刺激性干咳；發(fā)熱40例，多為弛張熱或不規(guī)則熱；喘憋10例；氣促14例。體征：肺部叩診濁音，可聞及中、小水泡音43例，哮鳴音18例，肺部聞及干啰音、痰鳴音24例。X線胸片提示支氣管炎25例，支氣管肺炎61例，大葉性肺炎18例。

1.2 方法104例患兒同時(shí)進(jìn)行咽拭子肺炎支原體快速培養(yǎng)鑒定和MP-IgM檢測(cè)。

1.2.1 肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)試劑盒由武漢菁花時(shí)間科技有限公司提供(生產(chǎn)許可證：鄂食藥監(jiān)械生產(chǎn)許可20090427號(hào))，采樣部位及樣本：取無菌咽拭子一支，用生理鹽水浸潤(rùn)甩干，于咽后壁、扁桃體部位捻轉(zhuǎn)數(shù)次，粘取咽部、扁桃體部位的分泌物。接種時(shí)用浸潤(rùn)過生理鹽水的棉簽或接種環(huán)沾取足量標(biāo)本，將帶樣拭子于瓶口處折斷置于瓶?jī)?nèi)，擰緊蓋搖勻，在(37±1)℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)6 h后觀察結(jié)果。按操作程序要求完成檢測(cè)。由專人進(jìn)行操作，質(zhì)量控制。

1.2.2 MP-IgM檢測(cè)采集患兒靜脈血2 ml分離血清，應(yīng)避免溶血，當(dāng)天予以檢測(cè)。檢測(cè)方法采用被動(dòng)凝集法檢測(cè)，采用日本富士瑞必歐株式會(huì)社生產(chǎn)的肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑盒，商品名：賽樂迪亞-麥可Ⅱ[注冊(cè)證編號(hào)：國(guó)食藥監(jiān)械(進(jìn))字2009第3402832號(hào)]。檢測(cè)原理：被動(dòng)凝集法檢測(cè)肺炎支原體抗體是體外診斷試驗(yàn)，用肺炎支原體細(xì)胞膜成分致敏人工明膠粒子制造而成，致敏粒子與人血清中存在的肺炎支原體抗體發(fā)生凝集反應(yīng)。按操作程序要求完成檢測(cè)，結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：MP抗體滴度≥1:80者為陽性，最高檢出限可達(dá)1:1 280。結(jié)果可疑的患兒入院7～10 d再次采血，滴度≥1:80者為陽性，或雙份血清MP抗體滴度四倍以上升高也為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，陽性率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測(cè)肺炎支原體感染的結(jié)果104例下呼吸道感染患兒中MP快速培養(yǎng)陽性29例(27.9%)，血清MP-IgM陽性36例(34.6%)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.097，P=0.295)。104例MP抗體檢測(cè)患兒中單份血清送檢者41例，雙份血清送檢者63例，第一份血清檢測(cè)MP-IgM陽性共25例(24.0%)，雙份血清陽性共36例，有11例第二份血清MP-IgM轉(zhuǎn)為陽性。

2.2兩種方法檢測(cè)不同年齡階段患兒的MP感染情況MP-IgM陽性率：＜2歲最低(11.8%)，8～14歲最高(44.2%)，陽性率隨年齡增加逐漸增高，各年齡組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.203，P=0.045)。咽拭子MP快速培養(yǎng)鑒定：＜2歲陽性率最高(35.3%)，2～8歲陽性率最低(20.0%)，各年齡組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.761，P=0.415)，見表1。

表1 兩種方法檢測(cè)不同年齡階段患兒MP感染陽性率變化(例)

2.3 兩種方法檢測(cè)不同病程階段患兒MP陽性率情況病程≤7 d的患兒55例，MP快速培養(yǎng)陽性率為32.7%，明顯高于MP-IgM檢測(cè)陽性率(16.4%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.976，P=0.046)；而病程＞7 d的患兒MP快速培養(yǎng)陽性率為22.4%，明顯低于MP-IgM陽性率(55.1%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.004，P= 0.001)，見表2。

表2 兩種方法檢測(cè)不同病程階段患兒的MP感染情況(例)

3 討論

支原體是一種介于病毒和細(xì)菌之間能獨(dú)立生活的最小微生物，年幼兒MP感染率低于年長(zhǎng)兒，但更為嚴(yán)重[1-2]。肺炎支原體感染一般起病隱匿，胸部X線也無特異性，僅靠臨床診斷較為困難，同時(shí)病程長(zhǎng)、肺外并發(fā)癥多，易造成漏診、誤診，及早的病原學(xué)檢查對(duì)早期診斷及臨床用藥有重要指導(dǎo)意義。

肺炎支原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要依靠支原體培養(yǎng)、血清學(xué)檢查和核酸檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)室檢查手段[3]。PCR方法可用于檢測(cè)咽喉分泌物、痰液及血清中MP-DNA，敏感性和特異性高，對(duì)MP感染的早期診斷意義較大[1，4-5]。但PCR方法假陽性高，操作復(fù)雜，對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求較高，需要昂貴的儀器，檢測(cè)費(fèi)用也較高，從而在一般實(shí)驗(yàn)室不能普及開展[6]。經(jīng)典的MP分離培養(yǎng)鑒定操作十分繁瑣，且陽性率低，對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定需要2～3周，不利于早期診斷。肺炎支原體感染機(jī)體后可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG和IgM抗體，MP感染臨床癥狀出現(xiàn)后的1周血清中IgM方可檢出，10～30 d達(dá)高峰，12～26周消失，MP-IgG則在體內(nèi)可存在1～2年，甚至更長(zhǎng)。

目前MP-IgM檢測(cè)是診斷MP感染的主要指標(biāo)[7-9]。本研究顯示：MP-IgM陽性率＜2歲最低，8～14歲最高，MP-IgM陽性率隨年齡增加逐漸增高，這與機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育成熟度有關(guān)[10]，年齡越小，免疫系統(tǒng)發(fā)育越不成熟，易導(dǎo)致假陰性結(jié)果。本研究還顯示：病程大于7 d MP-IgM陽性檢出率較高，MP感染臨床癥狀出現(xiàn)后7～10 d是MP-IgM檢測(cè)的最佳時(shí)機(jī)[11]。104例患兒63份復(fù)查第二份血清，有11例MP-IgM轉(zhuǎn)為陽性，故雙份血清可減少漏診。MP快速培養(yǎng)法，利用培養(yǎng)基中快速生長(zhǎng)因子進(jìn)行增殖，分解糖類，產(chǎn)生氫離子使培養(yǎng)基中的pH值降低，培養(yǎng)基中的指示劑由原來的紅色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色來判斷MP生長(zhǎng)，標(biāo)本中其他細(xì)菌因培養(yǎng)基中加入了青霉素、醋酸鉈和生物抑菌劑等被抑制，MP快速培養(yǎng)法簡(jiǎn)便快速，陽性標(biāo)本24 h即可報(bào)告。本研究顯示：MP快速培養(yǎng)陽性率(27.9%)低于血清MP-IgM陽性率(34.6%)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。咽拭子MP快速培養(yǎng)不受免疫系統(tǒng)的影響，但受口腔中食物殘?jiān)⑺嵝燥嬃虾筒蓸臃椒ǖ挠绊懚霈F(xiàn)假陰性；本研究顯示，病程≤7 d的患兒MP快速培養(yǎng)陽性率明顯高于MP-IgM檢測(cè)，而病程大于7 d的患兒MP-IgM陽性率更高。故病程早期的患兒，咽拭子MP快速培養(yǎng)鑒定有一定的參考意義，更有助于早期診斷。

血清MP-IgM檢測(cè)易受患兒的病程、年齡、機(jī)體免疫功能狀態(tài)等多種因素影響，MP感染臨床發(fā)病7～10 d為檢測(cè)IgM為最佳時(shí)機(jī)，不利于早期診斷與治療[12]，而雙份血清采集耗時(shí)較長(zhǎng)，且不易為患兒家長(zhǎng)接受。MP快速培養(yǎng)法簡(jiǎn)便快速，陽性標(biāo)本24 h即可報(bào)告，實(shí)驗(yàn)條件要求不高，無需特殊儀器設(shè)備，適合一般實(shí)驗(yàn)室或基層醫(yī)院開展應(yīng)用。因此，兩種方法各有特點(diǎn)，我們認(rèn)為，臨床應(yīng)根據(jù)患兒的不同病程、不同年齡情況，結(jié)合上述兩種特異性檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，從而提高小兒肺炎支原體感染診斷的準(zhǔn)確率，有利于早期診斷，早期治療，指導(dǎo)抗生素的合理應(yīng)用。

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R563.1

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1003—6350（2014）12—1807—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.12.0700

2013-09-30)

倪樹芳。E-mail：nsf951203@sina.com