朱春紅，李園，劉巧，林景，周小圓，蘇羽

（海南省皮膚病醫(yī)院藥劑科，海南 ?？?570206）

·藥物與臨床·

金黃散洗劑的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

朱春紅，李園，劉巧，林景，周小圓，蘇羽

（海南省皮膚病醫(yī)院藥劑科，海南 ?？?570206）

目的制備金黃散洗劑并建立金黃散洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法將姜黃等中藥超微粉碎后加混懸劑制備成金黃散洗劑；采用薄層色譜法(TLC)對(duì)處方中黃柏、甘草和白芷進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法(HPLC)同時(shí)測(cè)定金黃散洗劑中姜黃素、大黃素和厚樸酚的含量。結(jié)果制備的金黃散洗劑微粒細(xì)膩均勻，沉降緩慢，穩(wěn)定性好；在選定的薄層色譜條件下色譜斑點(diǎn)清楚，分離效果較好；姜黃素、大黃素和厚樸酚的質(zhì)量濃度分別在17.98～179.82μg·ml-1(r=0.999 9)、11.40～114.00μg·ml-1(r=0.999 9)和7.08～70.80μg·ml-1(r=0.999 9)內(nèi)，與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，平均回收率依次為101.66%、102.27%和102.40%，RSD依次為0.61%、0.87%和0.60%。結(jié)論本洗劑制備工藝簡(jiǎn)便，所建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，能有效地控制該制劑質(zhì)量。

金黃散洗劑；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；姜黃素；大黃素；厚樸酚

“如意金黃散”為明代陳實(shí)功《外科正宗》所載的瘍科要方，由姜黃、大黃、黃柏等十味中藥配伍組成，主要用于治療瘡瘍腫痛、跌打損傷、乳癰紅腫等病癥，亦可用于濕疹樣皮炎、膿皰瘡、單純皰疹等治療，臨床使用時(shí)需臨時(shí)調(diào)劑，使用極為不便，外敷時(shí)又易掉藥，影響臨床應(yīng)用與藥效的發(fā)揮。為提高藥物療效和使用方便，在如意金散劑基礎(chǔ)上改變劑型制成金黃散洗劑，并對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，為有效控制該制劑質(zhì)量提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器LC-20AD HPLC液相色譜儀、SPD-20A型紫外檢測(cè)器(日本島津公司)；AL204 METTLER TOLEDO電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；HS6150D數(shù)控超聲清洗儀(天津恒奧儀器有限公司)。

1.2 材料金黃散洗劑(自制，批號(hào)20130520、20130521、20130522)；姜黃素(批號(hào)110823～201004)、大黃素(批號(hào)110756～200110)、厚樸酚(批號(hào)110729～200412)、白芷對(duì)照藥材(批號(hào)120945～201008)、甘草對(duì)照藥材(批號(hào)120904～201117)、黃柏對(duì)照藥材(批號(hào)12150-201105)，以上對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；黃原膠(江蘇神華藥業(yè)有限公司，批號(hào)130304)；色譜乙腈(Fisher公司)，其余試劑均為分析純，水為自制純化水。

2 方法

2.1 處方與制備

2.1.1 處方金黃散200 g(先將姜黃、大黃等10味中藥超微粉碎[1]，依《中國(guó)藥典》2010年版一部“如意金黃散”的處方制備散劑)、黃原膠5 g、乙醇200 g、苯酚10 g、丙二醇50 g、純化水適量，全量1 000 g。

2.1.2 制備取黃原膠加適量純化水制成黃原膠液。取金黃散、乙醇、苯酚、丙二醇及剩余量的水共研成糊狀，然后加入黃原膠液，攪拌均勻，即得[2]。

2.2 定性鑒別

2.2.1 黃柏鑒別取本品3 g，加甲醇10 ml，超聲處理15 min，濾過(guò)，濾液濃縮至約1 ml，作為供試品溶液；按處方比例和制備工藝除去黃柏的陰性樣品，同法制成黃柏陰性對(duì)照溶液；另取黃柏對(duì)照藥材0.1 g，加甲醇5 ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取鹽酸小檗堿對(duì)照品，用甲醇制得質(zhì)量濃度為0.5 mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅤB)試驗(yàn)，吸取上述供試溶液各1 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-異丙醇-乙酸乙酯-甲醇-水(12:3:6:4:0.6)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性樣品無(wú)干擾。

2.2.2 甘草鑒別取本品20 g，加三氯甲烷30 ml、鹽酸2 ml，加熱回流1 h，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)? ml乙醇溶解，制成供試品溶液；按處方比例和制備工藝除去甘草的陰性樣品，同法制成甘草陰性對(duì)照溶液；另取甘草次酸對(duì)照品，用無(wú)水乙醇得質(zhì)量濃度為1.0 mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅤB)試驗(yàn)，吸取上述供試溶液各1 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30℃～60℃)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸(20:40:14:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液。在105℃加熱5 min。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品無(wú)干擾。

2.2.3 白芷鑒別取本品10 g，加乙醚20 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)? ml乙酸乙酯溶解，制成供試品溶液；按處方比例和制備工藝除去白芷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法操作，得白芷陰性對(duì)照溶液；另取白芷對(duì)照藥材0.5 g，加乙醚10 ml，浸漬1 h，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；再取歐前胡素對(duì)照品、異歐前胡素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅤB)試驗(yàn)，吸取上述供試溶液各3 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30℃～60℃)-乙醚(3：2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性樣品無(wú)干擾。

2.3 含量測(cè)定以高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定該洗劑中姜黃素、大黃素和厚樸酚的含量。

2.3.1 色譜條件色譜柱：Wondasil TM C18柱(4.6 mm×150 mm，5.0μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸= 38：62；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：20μl；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。

2.3.2 溶液的制備

2.3.2.1 對(duì)照品溶液的制備分別精密稱(chēng)取姜黃素9.10 mg(含量98.8%)、大黃素5.70 mg與厚樸酚3.54 mg，置10 ml量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得各個(gè)對(duì)照品溶液；分別精密量取上述對(duì)照品溶液各1 ml置于10 ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2.2 供試品溶液的制備取本品約5.0 g，精密稱(chēng)定，置50 ml量瓶中，加入甲醇適量，冷浸1 h，超聲處理30 min，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例稱(chēng)取除去厚樸、姜黃及大黃外的其他中藥，按金黃散洗劑制備方法制成陰性對(duì)照樣品，按“2.3.2.2”項(xiàng)的方法操作，即得。

2.3.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.3.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)取上述混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，分別按上述色譜條件進(jìn)樣20 μl，記錄色譜圖。各組分峰分離度均符合要求，陰性樣品無(wú)干擾，色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3.3.2 線(xiàn)性關(guān)系考察依次精密吸取以上配好的標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.2 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml置10 ml的量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，取各濃度的單個(gè)對(duì)照品溶液20μl注入色譜儀，以各對(duì)照品面積(Y)對(duì)其質(zhì)量濃度X(μg/ml)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各對(duì)照品線(xiàn)性關(guān)系考察及回歸方程

2.3.3.3 精密度試驗(yàn)取“2.3.2.2”項(xiàng)供試品溶液，20μl進(jìn)樣測(cè)定峰面積，重復(fù)6次。姜黃素、大黃素及厚樸酚峰面積的RSD分別為0.85%、1.22%、1.31% (n=6)，表明用本方法測(cè)定樣品，精密度較好。

2.3.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.3.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，分別在配制后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h測(cè)定，分別記錄姜黃素、大黃素及厚樸酚的峰面積，計(jì)算RSD分別為0.93%、1.01%、0.84%，在24 h內(nèi)測(cè)定樣品穩(wěn)定。

2.3.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)取6份供試品(20130522)按“2.3.2.2”項(xiàng)下處理，依法測(cè)定，并計(jì)算結(jié)果。姜黃素、大黃素及厚樸酚的含量分別為0.7131 mg/g、0.4182 mg/g、0.5984 mg/g，RSD分別為1.55%、0.89%和0.95%(n=6)。說(shuō)明重現(xiàn)性較好。

2.3.3.6 回收率試驗(yàn)取批號(hào)為20130522樣品6份，各2.5 g，精密稱(chēng)定，置50 ml量瓶中，并分別加入姜黃素儲(chǔ)備液(0.5930 mg/ml)、大黃素儲(chǔ)備液(0.3510 mg/ml)和厚樸酚儲(chǔ)備液(0.4980 mg/ml)各3 ml，按“2.3.2.2”項(xiàng)下方法處理，計(jì)算各成分的平均加樣回收率，見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3.4 樣品測(cè)定取三批樣品(批號(hào)為20130520，2030521，20130522)，依法測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算三種有效成分含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

在金黃散洗劑處方篩選時(shí)，曾分別選用黃原膠、卡波姆、羧甲基纖維素鈉、硅皂土為助懸劑，以沉降容積比和重新分散為評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)制得金黃散洗劑的穩(wěn)定性進(jìn)行比較，對(duì)比結(jié)果顯示以黃原膠為助懸劑制得的金黃散洗劑沉降緩慢，不結(jié)塊，易于分散，穩(wěn)定性好，易于涂布。

在黃柏定性鑒別中，筆者曾對(duì)比了《中國(guó)藥典》[3]過(guò)柱和超聲這兩種供試品處理方式，結(jié)果差異不明顯，鑒于超聲處理方式較簡(jiǎn)單，所以采用了后者。采用《中國(guó)藥典》方法以苯-異丙醇-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(12:3:6:3:1)為展開(kāi)劑時(shí)，分離效果不好，后改用苯-異丙醇-乙酸乙酯-甲醇-水(12:3:6:4:0.6)做展開(kāi)劑，取得較滿(mǎn)意分離效果。

如意金黃散具有清熱解毒、消腫止痛之功效，歷版《中華人民共和國(guó)藥典》均予收載?，F(xiàn)代藥理研究表明[4]，姜黃中的姜黃素、大黃中的大黃素、大黃素甲醚、厚樸中的厚樸酚等為如意金黃散中的主要活性成分。2010年版《中國(guó)藥典》僅規(guī)定了其中姜黃素的含量限度。為了全面的評(píng)價(jià)金黃散洗劑的質(zhì)量，筆者建立了同時(shí)測(cè)定金黃散洗劑中姜黃素、大黃素和厚樸酚含量的方法，目前未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。對(duì)于要同時(shí)測(cè)定的姜黃素、大黃素和厚樸酚，因其最大吸收波長(zhǎng)相差較大[5]，利用全波長(zhǎng)掃描最后確定在254 nm處三者的響應(yīng)值相對(duì)較好，因此選擇254 nm波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

[1]羅剛,陳立庭,周晶.超微粉碎技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2011,26(2):108-111.

[2]蘇石旺,盧戎,李燕麗,等.不同助懸劑對(duì)爐甘石雷佛奴爾洗劑穩(wěn)定性的研究[J].今日藥學(xué),2012,22(5):279-281.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2010年版一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:720.

[4]楊敏,蔣強(qiáng)富,許伯慧,等.HPLC法測(cè)定如意金黃散中5種活性成分的含量[J].中國(guó)藥房,2011,22(16):1511-1513.

[5]楊躍華,胡春麗,張洪霞,等.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定利膽排石片中5種有效成分的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,29(5):373-376.

Preparation of Jinhuangsan lotion and the establishment of its quality standard.

ZHU Chun-hong,LI Yuan,LIU

Qiao,LIN Jing,ZHOU Xiao-yuan,SU Yu.
Pharmacy Department,Skin Disease Hospital of Hainan Province,Haikou 570206,Hainan,CHINA

ObjectiveTo prepare Jinhuangsan lotion and to establish its quality standard.MethodsCurcumae longae rhizoma and other traditional Chinese medicines were ultrafine pulverized,and the suspension was used to prepare Jinhuangsan lotion.TLC was used to identify Phellodendri Chinensis cortex,Glycyrrhiza uralensis and Angelica dahurica in the prescription.HPLC was used to simultaneously determine the concentration of curcumin, emodin and magnolol.ResultsJinhuangsan lotion showed delicate uniform,slow subsidence and good stability. The chromatographic spots were clear and had good separation effect in the selected TLC conditions.The concentration of curcumin,emodin and magnolol were 17.98～179.82μg·ml-1(r=0.9999),11.40～114.00μg·ml-1(r=0.9999)and 7.08～70.80μg·ml-1(r=0.9999)respectively.They all showed a good linear relationship with the peak area.The average recovery rates were 101.66%,102.27%and 102.40%,with RSD of 0.61%,0.87%and 0.60%,respectively.ConclusionIt was easy to prepare Jinhuangsan lotion with a simple and accurate quality standard.

Jinhuangsan lotion;Quality standard;Curcumin;Emodin;Magnolol

R289

A

1003—6350（2014）17—2552—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.17.0997

2014-05-27)

海南省衛(wèi)生廳科研課題（編號(hào)：瓊衛(wèi)2012PT-86）

李園。E-mail：liyuan19832012@163.com