魏譚軍,陳曉東

(1.四川省達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,達(dá)州 635000;2.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,南昌 330004)

高效液相色譜法測定復(fù)方西羚解毒丸中4種成分的含量

魏譚軍1,陳曉東2

(1.四川省達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,達(dá)州 635000;2.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,南昌 330004)

目的 采用高效液相梯度洗脫法建立復(fù)方西羚解毒丸中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A含量測定方法。方法Hypersil C18色譜柱(4.6 mm×200 mm,5μm);體積流量:0.9 mL·min-1;流動相A為甲醇-乙腈(2∶1),流動相B為0.2%磷酸溶液梯度洗脫;檢測波長280 nm。結(jié)果牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A分別在0.302 6～6.052 0μg(r=0.999 4),0.069 2～1.384 0μg(r=0.999 7),0.014 2～0.284 0μg(r=0.999 1),0.031 4～0.628 0μg(r=0.999 2)范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系,平均加樣回收率分別為98.25%,97.91%,97.67%, 96.69%,RSD(n=6)分別為0.84%,1.39%,1.32%,0.57%。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好,可作為復(fù)方西羚解毒丸中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的含量控制方法。

西羚解毒丸,復(fù)方;牛蒡子苷;牛蒡子苷元;連翹苷;連翹酯苷A

復(fù)方西羚解毒丸為中藥復(fù)方制劑,處方源于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十四冊,由牛蒡子(炒)、連翹、金銀花、桔梗、荊芥穗、甘草、淡竹葉、薄荷、淡豆豉、羚羊角、水牛角濃縮粉、冰片十二味藥物組成。具有解表清熱之功效,可用于感冒發(fā)熱,頭痛咳嗽,咽喉腫痛等癥的治療[1]。原部頒標(biāo)準(zhǔn)未對方中的任何藥物進(jìn)行定性鑒別或定量測定,不能有效地保證產(chǎn)品的質(zhì)量和療效。筆者采用高效液相梯度洗脫法對牛蒡子和連翹中的牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷以及連翹酯苷A進(jìn)行含量測定方法研究,為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1200高效液相色譜儀;G1322A脫氣機(jī)、G1329A自動進(jìn)樣器、G1311A四元泵、Chemstation色譜工作站;G1315B可變波長檢測器。

1.2 試藥 牛蒡子苷元對照品(批號:7770-78-7,純度:98.0%)購于寶雞市辰光生物科技有限公司;牛蒡子苷對照品(批號:110819-201309,純度:95.7%)、連翹苷對照品(批號:110821-201213,純度:95.3%)、連翹酯苷A對照品(批號:111810-201304,純度:94.3%)均購于中國食品藥品檢定研究院;復(fù)方西羚解毒丸(規(guī)格:每丸6 g,批號:131017,131019,131021)購于山東健民藥業(yè)有限公司;磷酸(廣州化學(xué)試劑二廠,分析純);甲醇(天津市康科德科技有限公司,色譜純);乙腈(安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司,色譜純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Hypersil C18色譜柱(4.6 mm× 200 mm,5μm);體積流量:0.9 mL·min-1;流動相A為甲醇-乙腈(2∶1),流動相B為0.2%磷酸溶液[2-4],梯度洗脫(0～11 min,45.0%A;～27 min,45.0%→25.0%A;～50 min,25.0%A);檢測波長280 nm[5-7]。此系統(tǒng)條件下所測組分與其他組分分離效果良好,理論板數(shù)按牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A計(jì)均不得低于3 000,分離度均＞2[2-7]。

2.2 混合對照品溶液的制備 取牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A對照品各適量,精密稱定,加80%甲醇制成混合對照品溶液(牛蒡子苷為0.302 6 mg·mL-1,牛蒡子苷元為0.069 2 mg·mL-1,連翹苷為0.014 2 mg·mL-1,連翹酯苷A為0.031 4 mg·mL-1)。

2.3 供試品溶液的配制 取本品適量,剪碎,取約6.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入80%甲醇50 mL,密塞,稱定質(zhì)量,超聲處理(300 W,40 kHz) 40 min,再稱定質(zhì)量,用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,過濾,取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.4 陰性對照實(shí)驗(yàn) 按復(fù)方西羚解毒丸處方比例稱取除牛蒡子和連翹的其余藥味,按復(fù)方西羚解毒丸的生產(chǎn)工藝分別制成缺牛蒡子和連翹的陰性樣品,按照上述供試品溶液的配制方法制成缺牛蒡子和連翹的陰性對照溶液。分別精密吸取供試品溶液、混合對照品溶液、缺牛蒡子和連翹的陰性對照溶液10μL,按上述方法測定,結(jié)果為:在與牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A對照品色譜圖相應(yīng)的保留時(shí)間處,供試品溶液色譜圖中有吸收峰,而陰性對照色譜圖中未顯吸收峰。見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對照品溶液0.5, 1.0,2.0,5.0,10.0 mL,分別置于10 mL量瓶中,用80%甲醇稀釋至刻度,搖勻,分別精密吸取20μL,注入色譜儀中,按“2.1”項(xiàng)下所述色譜條件進(jìn)行測定,以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)與進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),得回歸方程為:牛蒡子苷 Y = 2. 372 8× 106X - 322. 7, r =0. 999 4;牛蒡子苷元Y = 2. 621 4×106X -269. 1,r =0. 999 7;連翹苷Y = 1. 658 2× 106X + 252. 3, r =0. 999 1;連翹酯苷A Y = 2. 024 4×106X -125. 2,r =0. 999 2。牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A依次在0.302 6～6.052 0μg,0.069 2～1.384 0μg, 0.014 2～0.284 0μg,0.031 4～0.628 0μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的混合對照品溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,測定,記錄牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的峰面積,RSD分別為0.42%(牛蒡子苷),0.61%(牛蒡子苷元), 0.72%(連翹苷)和0.88%(連翹酯苷A)。結(jié)果表明,儀器具有良好精密度。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 稱取同一批樣品6份,按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液,依法進(jìn)樣測定,計(jì)算含量,求得牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的RSD依次為0.37%,0.51%,0.69%, 0.77%。結(jié)果表明,本法測定重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液,在室溫下放置0,2,4,8,12,24 h后,每次進(jìn)樣10μL,測定其峰面積值,求得牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的RSD依次為0.25%,0.62%,0.82%, 0.75%。結(jié)果表明,供試品溶液24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的同一批復(fù)方西羚解毒丸(牛蒡子苷為2.52 mg·g-1,牛蒡子苷元為0.58 mg·g-1,連翹苷為0.12 mg·g-1,連翹酯苷A為0.26 mg·g-1)適量,剪碎,取約3.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別精密加入混合對照品溶液25 mL, 80%甲醇25 mL,按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的配制方法制備加樣供試品試液。按正文方法進(jìn)樣測定,計(jì)算4種組分回收率,結(jié)果見表1。

圖1 牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的高效液相色譜圖

表1 復(fù)方西羚解毒丸中4種成分的加樣回收率

續(xù)表1

2.10 樣品測定 取3個(gè)批號的樣品,按“2.3”項(xiàng)下供試品制備方法,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定本品中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A含量,結(jié)果見表2。牛蒡子苷元不得低于2.8 mg;含連翹苷不得低于0.60 mg,含連翹酯苷A不得低于1.2 mg。

表2 3批復(fù)方西羚解毒丸中每丸4種成分含量測定結(jié)果 mg,±s,n=3

表2 3批復(fù)方西羚解毒丸中每丸4種成分含量測定結(jié)果 mg,±s,n=3

批號牛蒡子苷牛蒡子苷元連翹苷連翹酯苷A 131017 15.12±0.14 3.48±0.04 0.72±0.01 1.56±0.02 131019 14.65±0.13 3.24±0.03 0.68±0.01 1.49±0.02 131021 16.34±0.14 3.77±0.02 0.81±0.02 1.63±0.03 mg,

3 討論

3.1 供試品溶液提取時(shí)間的選擇 筆者在實(shí)驗(yàn)過程中曾對提取時(shí)間分別以超聲(300 W,40 kHz)處理30, 40,50 min進(jìn)行考察,結(jié)果40,50 min結(jié)果相差不大,而提取30min時(shí)含量明顯低于40,50min,因此供試品制備的提取時(shí)間定為40 min。

3.2 含量限度的確定 根據(jù)測定的各組分含量的平均值,暫定本品每丸含牛蒡子苷不得低于12.0 mg,含

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DOI 10.3870/yydb.2014.12.026

R286;R927.2

B

1004-0781(2014)12-1636-03

2014-01-13

2014-03-02

魏譚軍(1984-),男,甘肅白銀人,中藥師,碩士,主要從事醫(yī)院制劑的研發(fā)。電話:0818-2288358,E-mail: 404477285@qq.com。

陳曉東(1963-),男,江西南昌人,副教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事新藥的設(shè)計(jì)與開發(fā)。電話:0791-87105505, E-mail:chenxiaodonglunwen@163.com。