朱曉雯，李 偉，文紅梅，張 路，單晨嘯，柴 川，范乃兵

（南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023）

liguzinediol是一種毒性較?。?］，具有心臟安全性，可用于治療急性心衰的化合物。它通過影響肌漿網(wǎng)鈣釋放，增加大鼠在體和離體的心臟收縮力［2－3］，對正常大鼠及其離體心臟起到較好的正性肌力作用［4－5］。

前期對liguzinediol在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)、♀♂差異及藥物代謝進(jìn)行了研究報道［6－8］。根據(jù)一類新藥研制的要求，比格犬體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究對指導(dǎo)臨床具有更為重要的意義［9－10］，本文首次研究了比格犬靜注 liguzinediol后的血漿藥代動力學(xué)，為liguzinediol的進(jìn)一步開發(fā)和臨床研究提供了必要的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑 liguzinediol對照品（自制，HPLC測定純度 ＞98% ）；咖啡因（中國食品藥品檢定研究院，批號：171215－200507）；甲醇、甲酸為色譜純；水為質(zhì)譜純。

1.2 儀器 AB Sciex QTRAP 5500質(zhì)譜儀（美國AB公司）；LC 20A快速液相色譜儀 （日本Shimadzu公司）；VortexGenius 3渦旋混合儀（德國IKA公司）；TGL 16G離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.3 比格犬藥代動力學(xué)試驗 健康比格犬，每組6只，♀♂各半，體質(zhì)量6～8 kg，由上海交通大學(xué)農(nóng)學(xué)院教學(xué)實驗實習(xí)場提供，動物許可證號SCXK（滬20120005）。給藥前禁食12 h，并空腹抽血2 ml，動物隨機(jī)編號并稱重，按 1.6、3.2、6.4 mg·kg－1劑量給藥，不同時間點 0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2、3、4、5、6、8、12 h于股靜脈取血約 2 ml，肝素抗凝，離心分取血漿，冷凍保存。

1.4 色譜與質(zhì)譜條件 色譜條件：Shim-pack GVP-ODS保護(hù)柱（5.0 mm×2.0 mm，4.6μm）；Shim-pack XR-ODS色譜柱50 mm×2.0 mm，2.2μm）；柱溫40℃；流動相為甲醇（A）－0.1% 甲酸（B），梯度洗脫：0～1 min，5%A；1～2 min，5%～75%A；2～3 min，75%A；3～3.1 min，75% ～5%A；3.1～5 min，5%A。流速0.4 ml·min－1，進(jìn)樣量 2μl。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI）；采用多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）進(jìn)行正離子檢測；離子源噴霧電壓5500 V；離子源溫度 500℃；氣簾氣 40 psi；霧化氣60 psi；輔助加熱氣 60 psi；經(jīng)優(yōu)化后，liguzinediol和咖啡因的參數(shù)：DP、EP、CE、CXP分別為51、10、27、14 V和 146、10、31、12 V。liguzinediol和咖啡因的檢測離子分別為 m／z 169.2→122.2和 m／z 195.2→110.2。

1.5 對照品溶液的配制 取 liguzinediol對照品10 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每ml含liguzinediol為1 mg的儲備液。取咖啡因?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加甲醇制成每ml含10μg的咖啡因內(nèi)標(biāo)溶液。

1.6 血漿樣品處理 取血漿100μl，加入內(nèi)標(biāo)（咖啡因10 mg·L－1）100μl，混勻，再加入甲醇 1.8 ml，渦旋震蕩 3 min，12 000 r·min－1離心 5 min。吸取上清液 1 ml，過 0.22μm微孔濾膜，濾液進(jìn)樣。

1.7 方法學(xué)考察 按藥代動力學(xué)研究的相關(guān)要求，考察專屬性、線性范圍、檢測限、提取回收率和方法回收率、日內(nèi)精密度和日間精密度、樣品穩(wěn)定性、基質(zhì)效應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察 在上述條件下進(jìn)行檢測，liguzinediol和咖啡因的保留時間分別為2.29和2.78 min左右，峰形對稱，達(dá)基線分離，空白血漿中無內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，專屬性好。

liguzinediol在 5～1×104μg·L－1濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，最低檢測限為0.02μg·L－1。

配制質(zhì)量濃度為5、50、500及 5 000μg·L－1的血漿質(zhì)控樣品，按“血漿樣品處理”項下方法操作，進(jìn)行提取回收率、方法回收率、日內(nèi)精密度、日間精密度以及基質(zhì)效應(yīng)等試驗，結(jié)果見Tab 1，均符合生物樣品的檢測要求。

取上述4種濃度的質(zhì)控樣品，分別考察反復(fù)凍融3次，室溫保存24 h，以及冷凍保存1個月的樣品穩(wěn)定性，其RSD不超過8.0%，表明liguzinediol血漿樣品穩(wěn)定。

2.2 比格犬靜注藥代動力學(xué)測定 采用上述LC-MS／MS方法測定靜脈注射給予低、中、高3個劑量（1.6、3.2、6.4 mg·kg－1）liguzinediol后的犬血漿樣品。藥代動力學(xué)參數(shù)用DAS 2.0軟件進(jìn)行計算和處理，主要藥代動力學(xué)參數(shù)見Tab 2。

Tab 1 Precision，accuracy and measured effect of the assay for liguzinediol in beagle dog plasma（ˉx±s，n＝5）

Tab 2 Pharmacokinetic parameters of liguzinediol in beagle dogs after intravenous administration of 1．6，3．2，6．4 mg·kg－1 liguzinediol（ˉx±s，n＝6）

3 討論

由靜脈注射liguzinediol后比格犬的血漿藥代動力學(xué)可見，liguzinediol在比格犬體內(nèi)的清除速度較快，半衰期T12約為0.5 h，♀♂犬的藥動學(xué)參數(shù)無明顯差異。而前期研究［6－7］的大鼠血漿藥代動力學(xué)，♀♂大鼠的T12差異明顯，♂鼠的半衰期為0.3～0.5 h，而♀鼠的半衰期為1.5～2 h，♂鼠的清除速率（CL）也是♀鼠的4～5倍，是由于♀♂大鼠代謝酶差異所引起的。

分別單次靜脈給予比格犬低、中、高 （1.6、3.2、6.4 mg·kg－1）3個劑量的liguzinediol后，其在動物體內(nèi)的藥物動力學(xué)行為具有線性特征，在實驗的劑量范圍內(nèi)Cmax和AUC0－t均呈現(xiàn)劑量依賴式的增長趨勢。各劑量組間的T12經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗差異無顯著性，說明在實驗的劑量范圍內(nèi)藥物可以在動物體內(nèi)正常代謝并順利消除，未發(fā)現(xiàn)明顯的蓄積和飽和現(xiàn)象。

藥效學(xué)與藥代動力學(xué)實驗研究表明，liguzinediol作為正性肌力藥，靜脈注射于動物體內(nèi)起效快，作用迅速，清除完全，可為急性心衰的治療提供實驗依據(jù)。

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