吳麗麗，劉 琰，陳權(quán)韓，嚴(yán) 燦

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)基礎(chǔ)理論教研室，廣東廣州 510060）

機(jī)體在維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和外環(huán)境適應(yīng)的過程中，各種功能活動(dòng)常按一定的時(shí)間順序發(fā)生周而復(fù)始的節(jié)律變化，稱為生物節(jié)律（biological rhythm）。生物節(jié)律是生物體廣泛存在的生命活動(dòng)的基本現(xiàn)象之一，目前常用于生物節(jié)律的檢測(cè)指標(biāo)包括：皮質(zhì)醇、褪黑素和核心體溫［1］。20世紀(jì)前，核心體溫的維持和晝夜變化一直被認(rèn)為是穩(wěn)態(tài)內(nèi)環(huán)境的應(yīng)答反應(yīng)。最近發(fā)現(xiàn)，核心體溫在自由振蕩條件下顯示出自身的周期節(jié)律。一些研究者認(rèn)為，周期節(jié)律和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的過程是相互獨(dú)立的，晝夜節(jié)律振蕩是由生化和環(huán)境刺激或時(shí)序壓力引發(fā)的［2］。大量研究表明，抑郁癥患者存在著明顯的生物節(jié)律尤其是晝夜節(jié)律的紊亂，如大多數(shù)患者表現(xiàn)為每天晨間癥狀最為嚴(yán)重［3］，下午和晚間減輕。研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥患者體內(nèi)激素、神經(jīng)遞質(zhì)及細(xì)胞因子等的合成、分泌和代謝存在晝夜節(jié)律失調(diào)，如血漿皮質(zhì)醇、去甲腎上腺素、泌乳素水平的時(shí)相改變［4］，以及皮質(zhì)醇分泌的不穩(wěn)定模式［5］。由此可見，生物節(jié)律的紊亂可能是抑郁癥發(fā)病機(jī)制的一個(gè)重要組成部分。

我們以往的研究證實(shí)，中藥復(fù)方加味四逆散（jiaweisinisan，JWSNS）具有確切的抗抑郁效應(yīng)，其機(jī)制與調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamuspituitary-adrenal gland，HPA）軸興奮性、拮抗興奮性氨基酸毒性、影響5-羥色胺（5-hydroxy tryptamine，5-HT）合成、釋放、保護(hù)海馬神經(jīng)元等有關(guān)［6-8］。在本研究中，針對(duì)抑郁癥晝夜節(jié)律紊亂這一病理現(xiàn)象，我們建立慢性應(yīng)激大鼠模型，結(jié)合中醫(yī)時(shí)間醫(yī)學(xué)分時(shí)給藥的理論，通過觀察大鼠晝夜體溫、血清5-HT、皮質(zhì)酮（corticosterone，CORT）、褪黑素（melatonin，MT）的變化，從調(diào)節(jié)機(jī)體晝夜節(jié)律角度，進(jìn)一步探討JWSNS分時(shí)給藥抗抑郁的作用機(jī)制，并期望為今后臨床合理有效用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)Sprague-Dawley（SD）♂大鼠，體質(zhì)量（180±20）g，廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證編號(hào)依次為：第1批 No.0054669、第2批 No.0055096、第 3批 No.0056806、第4批No.0059563。單籠飼養(yǎng)，自由攝食飲水，在光暗周期為12 h，溫度為（23±2）℃的安靜環(huán)境適應(yīng)并訓(xùn)練共計(jì)2周后，根據(jù)糖水消耗實(shí)驗(yàn)結(jié)果和體重情況進(jìn)行分組。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑 JWSNS由柴胡、白芍、枳殼、枸杞子、生地黃、石決明組成。藥材由廣州致信藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科鑒定均為純正藥材。將中藥煎煮兩次，合并兩次藥液，4層紗布過濾，待稍冷卻后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮藥液至含生藥量1.69 g·ml-1（以1 ml／100 g體重的比例灌胃，相當(dāng)于臨床成人用藥劑量的2倍），4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩４笫?-HT、CORT、MT酶聯(lián)免疫吸附試劑盒購(gòu)自廣州市勵(lì)恒生物科技有限公司。蔗糖：分析純，由廣州化學(xué)試劑廠提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 電子秤（ES-2000E，長(zhǎng)沙湘平科技發(fā)展有限公司）；電子分析天平（BS 124S，sartorius公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（LABOROTA 4000，德國(guó)Heidolph公司）；冷卻水循環(huán)器（CA-Ⅲ，日本 EYWLA公司）；超純水器（Nexpower 1000，韓國(guó) Human coporation公司）；數(shù)字式電子體溫計(jì)（BT-A11CN，溫度范圍：32℃～43.9℃，深圳市瑞迪恩科技有限公司）；全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀（Model550，美國(guó)Bio-rad公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組 SD大鼠按體重和基礎(chǔ)糖水消耗量分為5組：正常組（control）：每天7∶30灌胃雙蒸水，3 ml／次，不施加任何刺激。模型組（model）：每天7∶30灌胃雙蒸水，3 ml／次，施加刺激。JWSNS卯時(shí)給藥組（MS group）：每天于7∶30灌胃中藥JWSNS，3ml／次，施加刺激。JWSNS酉時(shí)給藥組（YS group）：每天于 17∶30灌胃中藥 JWSNS，3ml／次，施加刺激。JWSNS卯酉分時(shí)給藥組（MS+YSgroup）：每天于7∶30、17∶30分別灌胃中藥 JWSNS，1.5ml／次，施加刺激。模型組、正常組與其它各組分房飼養(yǎng)。

2 方法

2.1 慢性應(yīng)激大鼠模型的建立 采用Willner P慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）動(dòng)物模型［9］，并加以修改。接受應(yīng)激處理的大鼠置于一獨(dú)立房間內(nèi)，在21 d內(nèi)接受不同應(yīng)激源的刺激，應(yīng)激源包括限制空間（束縛）、持續(xù)光照、45°斜籠、并籠、禁水、空瓶、濕籠（加水入墊料中，至濕透）、禁食禁水。造模前：d 1～7：所有大鼠單籠喂養(yǎng)，自由攝食飲水，在光暗條件12 h／12 h（8∶00開燈，20∶00關(guān)燈），溫度為（23±2）℃的安靜環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)。d 7～14：糖水訓(xùn)練（d 7 9∶30開始至d 14 9∶30結(jié)束）。d 14 9∶30開始禁食禁水至d15 8∶30。d15 8∶30～9∶30糖水消耗1 h，之后根據(jù)消耗結(jié)果分組，稱量體重。造模期：自d16開始，進(jìn)入造模程序，d16 9∶30～10∶30束縛1 h；20：00開始持續(xù)光照。d17持續(xù)光照中。d18 8∶30終止持續(xù)光照；9∶30～16∶30斜籠45°7 h。d19 9∶00開始并籠23 h。d20 8∶30結(jié)束并籠；9∶30～12∶30禁水；12∶30～13∶30空瓶；15∶30濕籠17 h。d21 8∶30結(jié)束濕籠；16∶00開始禁食禁水23 h。d22 15∶00結(jié)束禁食禁水。d23 8∶30持續(xù)光照36 h。d24 20∶30結(jié)束持續(xù)光照。d25 9∶30開始并籠23 h。d26 8∶30結(jié)束并籠；9∶30～12∶30禁水；12∶30～13∶30空瓶；15∶30～16∶30束縛。d27 9∶30～16∶30斜籠7 h；16∶30濕籠17 h。d28 9∶30開始禁食禁水23 h。d29 8∶30結(jié)束禁食禁水；15∶30～16∶30束縛1 h。d30 9∶30開始并籠23 h。d31 8∶30結(jié)束并籠，開始持續(xù)光照36 h。d32 20∶30結(jié)束持續(xù)光照。d33 9∶30～12∶30禁水；12∶30～13∶30空瓶；15∶30開始濕籠17 h。d34 8∶30結(jié)束濕籠；9∶30～16∶30斜籠7 h；16∶00開始禁食禁水23 h。d35 15∶00～16∶00糖水消耗實(shí)驗(yàn)，并稱量體重。d36～d37測(cè)量24 h體溫（時(shí)間點(diǎn)為10∶00、14∶00、18∶00、22∶00、2∶00、6∶00）。d39～d40眶下靜脈叢采血（時(shí)間點(diǎn)同上）。

2.2 體重檢測(cè)及糖水消耗實(shí)驗(yàn) 所有大鼠在完成1周的單籠飼養(yǎng)適應(yīng)后，接受雙瓶訓(xùn)練，一瓶是1%（W／V）蔗糖水（在籠左側(cè)），一瓶是純水（在籠右側(cè)），水瓶位置固定，訓(xùn)練1周，每日清晨添加糖水或純水。之后所有大鼠禁食禁水23h，進(jìn)行1 h糖水消耗實(shí)驗(yàn)，測(cè)量基礎(chǔ)糖水偏愛度和基礎(chǔ)體重。經(jīng)過禁食禁水23 h后，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的d35 15∶00～16∶00再次進(jìn)行糖水消耗實(shí)驗(yàn)，測(cè)量造模后糖水偏愛度和體重。糖水偏愛度／%＝造模后糖水偏愛度／基礎(chǔ)糖水偏愛度。

2.3 體溫?cái)?shù)據(jù)的采集與擬合

2.3.1 體溫?cái)?shù)據(jù)的采集 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的d36～d37，自d36 10∶00開始，到d37 6∶00結(jié)束，每隔4h對(duì)所有實(shí)驗(yàn)組別的大鼠進(jìn)行一次肛門-直腸溫度的測(cè)量。共得六組體溫?cái)?shù)據(jù)，時(shí)間點(diǎn)為依次10∶00、14∶00、18∶00、22∶00、2∶00、6∶00。

2.3.2 體溫?cái)?shù)據(jù)的擬合 采用“余弦節(jié)律分析法”，簡(jiǎn)稱余弦法。將所得的每只大鼠的6個(gè)時(shí)間點(diǎn)體溫按照單一余弦法［1］進(jìn)行處理，并將用以描繪生物節(jié)律的余弦數(shù)學(xué)模型：Y＝M+Acos（ωt-φ）轉(zhuǎn)化為線性方程，應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件中線性回歸的方法擬合出時(shí)間序列節(jié)律的特征值（中值M，振幅A，峰值相位φ），然后分別求出各組各特征值的平均值，依據(jù)此平均值擬合出各組對(duì)應(yīng)的體溫晝夜節(jié)律變化的余弦方程。之后依據(jù)方程，求出各組大鼠體溫的峰值、谷值、峰值時(shí)間、谷值時(shí)間，并進(jìn)行比較。

2.4 血清5-HT、CORT、MT含量的測(cè)定 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的d39～d40，自d39 10∶00開始，到d40 6∶00結(jié)束，每隔4 h對(duì)所有實(shí)驗(yàn)組別的大鼠進(jìn)行一次眶下靜脈叢采血。酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清5-HT、CORT、MT含量，操作按說明書要求進(jìn)行。以空白孔調(diào)零，450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。按上述方法進(jìn)行數(shù)據(jù)與曲線的擬合。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，多組間比較用One-Way ANOVA，LSD法。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠造模前后體重的變化 與正常組比較，模型組體重增重明顯下降（P＜0.01）；與正常組比較，MS組和YS組體重增重明顯下降（P＜0.01）。與模型組比較，YS組體重增重明顯下降（P＜0.01）。與MS+YS組比較，YS組體重增重明顯降低（P＜0.01）；與MS組比較，YS組體重增重明顯降低（P＜0.05）。見 Tab 1。

Tab 1 Body weight change of each group（±s，n＝7）

Tab 1 Body weight change of each group（±s，n＝7）

**P＜0.01 vs model；##P＜0.01 vs control；△△P＜0.01 vs MS+YS；▲P＜0.05 vs MS

Group Weight／g Weight gain／g Control 324.33±11.71 414.00±15.90 89.67±9.Pre-modeling Post-modeling 81 Model 252.33±8.48 319.00±24.21 66.67±17.96##MS 249.67±7.97 312.83±10.50 63.17±4.22##YS 323.33±11.71 369.33±14.88 46.00±3.79**##△△▲MS+YS 283.17±14.47 351.00±23.45 67.83±13.20

3.2 各組大鼠造模前后糖水偏愛度的變化 與正常組比較，模型組、MS組、YS組糖水偏愛度明顯下降（P＜0.01，P＜0.05）。與模型組比較，MS組、YS組、MS+YS組糖水偏愛度明顯提高（P＜0.01）。見Fig 1。

3.3 各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)體溫概況、體溫晝夜節(jié)律特征值、晝／夜體溫均值以及體溫峰值、谷值、峰值時(shí)間、谷值時(shí)間的比較 與正常組相比，MS組體溫中值明顯下降（P＜0.01）。在體溫振幅方面：與正常組相比，模型組、MS組體溫振幅明顯增大（P＜0.01）。與模型組相比，YS組、MS+YS組體溫振幅明顯減?。≒＜0.01）。與MS+YS組相比，YS組體溫振幅減?。≒＜0.05）。與MS組相比，YS組體溫振幅明顯減?。≒＜0.01）。

與正常組相比，模型組白晝體溫均值明顯下降（P＜0.01），夜間體溫均值明顯上升（P＜0.01）；MS組白晝體溫均值明顯下降（P＜0.01），YS組白晝體溫均值下降（P＜0.05）。與模型組相比，YS組、MS+YS組白晝體溫均值升高（P＜0.05），夜間體溫均值降低（P＜0.05）。與MS組比較，YS組、MS+YS組白晝體溫均值升高（P＜0.05）。

與正常組相比，模型組白晝體溫谷值明顯下降（P＜0.01），體溫峰值上升（P＜0.05）；MS組體溫谷值明顯下降（P＜0.01）。與模型組相比，YS組、MS+YS組體溫谷值明顯升高，體溫峰值明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。與 MS組相比，YS組、MS+YS組體溫谷值明顯升高（P＜0.01）。見 Tab 2、3、4，F(xiàn)ig 2。

Fig 1 Change of sucrose preference of each group（±s，n＝7）**P＜0.01 vs model；#P＜0.05，##P＜0.01 vs control

Fig 2 Core body temperature of each group

3.4 各組大鼠血清5-HT晝夜節(jié)律特征值、以及峰值、谷值、峰值時(shí)間、谷值時(shí)間的比較 與正常組相比，模型組、MS組5-HT中值、峰值、谷值均明顯下降（P＜0.01）。與模型組相比，YS組、MS+YS組5-HT中值、峰值、谷值均明顯升高（P＜0.01）。與MS組相比，YS組、MS+YS組5-HT中值、峰值、谷值均明顯升高（P＜0.01）。與YS組相比，MS+YS組5-HT中值、峰值、谷值均明顯降低（P＜0.01）。

與正常組相比，模型組5-HT振幅明顯減?。≒＜0.01），時(shí)相提前9.83 h；MS組5-HT振幅明顯減?。≒＜0.01），時(shí)相提前8.18 h。與模型組相比，YS組、MS+YS組5-HT振幅明顯增大（P＜0.01），YS組時(shí)相后推0.65 h，MS+YS組時(shí)相后推1.91 h。與MS組相比，YS組、MS+YS組5-HT振幅均明顯增大（P＜0.01），YS組時(shí)相提前 1 h、MS+YS組時(shí)相提前 0.3 h。見 Tab 5、6。

3.5 各組大鼠血清MT晝夜節(jié)律特征值、以及峰值、谷值、峰值時(shí)間、谷值時(shí)間的比較 與正常組相比，模型組、MS組、MS+YS組MT中值、峰值、谷值均明顯下降（P＜0.05，P＜0.01）。與模型組相比，JW酉時(shí)組中值、峰值、谷值均明顯升高（P＜0.01）。與MS組相比，YS組MT中值、峰值、谷值均明顯升高（P＜0.01）；MS+YS組 MT中值、峰值、谷值均明顯降低（P＜0.01）。與 YS組相比，MS+YS組 MT中值、峰值、谷值均明顯降低（P＜0.01）。

與正常組相比，模型組MT振幅明顯減小（P＜0.01），時(shí)相提前10.86 h；MS組MT振幅明顯減?。≒＜0.01），時(shí)相后推 2.02 h；YS組 MT振幅減小（P＜0.05），時(shí)相提前10.32 h。與模型組相比，JW酉時(shí)組 MT振幅明顯增大（P＜0.01），時(shí)相后推0.54 h。與MS組相比，YS組MT振幅明顯增大（P＜0.01），時(shí)相后推11.66 h。YS組與MS+YS組相比，振幅明顯增大（P＜0.01），時(shí)相提前11.39 h。見 Tab 7、8。

Tab 2 Characteristic value of core body temperature rhythm of each group（±s，n＝7）

Tab 2 Characteristic value of core body temperature rhythm of each group（±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△P＜0.05 vs MS+YS；▲▲P＜0.01 vs MS

Group Characteristic value M︱A︱ φ 0.48±0.81 Control 38.11±0.15 0.40±0.22 -0.67±0.97 Model 37.96±0.21 0.89±0.23**0.09±0.26 MS 37.80±0.17**0.77±0.24**-0.20±0.41 YS 37.99±0.15 0.30±0.17##△▲▲ 0.25±0.55 MS+YS 37.94±0.30 0.53±0.20##

Tab 3 Day／night core body temperature of each group（±s，n＝7）

Tab 3 Day／night core body temperature of each group（±s，n＝7）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；#P＜0.05 vs model；△P＜0.05 vs MS

Group Day Night Control 38.22±0.28 38.00±0.22 Model 37.38±0.30** 38.54±0.32**MS 37.37±0.20** 38.23±0.34 YS 37.79±0.21*# 38.18±0.12#△MS+YS 37.78±0.40# 38.11±0.28#△

Tab 4 Peak／valley time and peak／valley value of core body temperature of each group（±s，n＝7）

Tab 4 Peak／valley time and peak／valley value of core body temperature of each group（±s，n＝7）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；#P＜0.05，##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS

Group Peak value／℃Valley value／℃Peak time／h Valley time／h 25.85 13.85 Control 38.48±0.27 37.75±0.24 21.43 9.43 Model 38.85±0.31* 37.07±0.31**24.34 12.34 MS 38.57±0.31 37.03±0.28**23.24 11.24 YS 38.28±0.19## 37.70±0.27##△△ 24.96 12.96 MS+YS 38.25±0.26# 37.63±0.42#△△

Tab 5 Characteristic value of serum 5-HT rhythm of each group（±s，n＝7）

Tab 5 Characteristic value of serum 5-HT rhythm of each group（±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△ P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Characteristic value M︱A︱ φ Control 424.61±37.97 64.21±27.57-0.60±0.31 0.32±0.89 Model 156.68±43.16** 13.04±3.98**-0.04±0.50 MS 148.94±33.51** 11.05±7.28**0.40±0.41 YS 434.03±39.73##△△ 51.09±24.92##0.13±0.77 MS+YS 233.39±20.62##△△▲▲ 36.28±18.38##

Tab 6 Peak／valley time and peak／valley value of serum 5-HT of each group±s，n＝7）

Tab 6 Peak／valley time and peak／valley value of serum 5-HT of each group±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Peak value／μg·L-1 Valley time／h Control 488.82±51.92 360.41±41.33 21.69 9.6 Valley value／μg·L-1 Peak time／h 9 13.21 25.21 Model 169.71±45.55** 143.64±41.02** 11.86 23.86 MS 159.99±35.08** 137.89±33.49** 13.51 25.51 YS 485.12±46.96##△△ 382.95±46.85##△△ 12.51 24.51 MS+YS 269.67±25.79##△△▲▲ 197.11±29.34##△△▲▲

Tab 7 Characteristic value of serum MT rhythm of each group±s，n＝7）

Tab 7 Characteristic value of serum MT rhythm of each group±s，n＝7）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Characteristic value M︱A︱ φ-0.07±0.88 Control 76.93±4.34 9.57±2.41 -0.35±0.25 Model 25.08±3.68** 2.25±1.39** -0.05±0.60 MS 24.81±2.67** 2.34±1.12** 0.18±0.90 YS 76.63±8.13## 7.17±3.14*##△△ 0.09±0.60 MS+YS 19.42±2.23**▲▲ 2.27±0.89**▲▲

Tab 8 Peak／valley time and peak／valley value of serum MT of each group（xˉ±s，n＝7）

Tab 8 Peak／valley time and peak／valley value of serum MT of each group（xˉ±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Peak value／ng·L-1 Valley value／ng·L-1 Peak time／h Valley time／h Control 86.50±5.04 67.36±4.90 22.66 10.66 Model 27.33±4.57** 22.82±3.17** 11.80 23.80 MS 27.14±2.99** 22.47±2.79** 24.68 12.68 YS 83.81±6.73##△△ 69.46±10.33##△△ 12.34 24.34 MS+YS 21.69±2.51**△△▲▲ 17.15±2.29**△△▲▲23.73 11.73

3.6 各組大鼠血清CORT晝夜節(jié)律特征值、以及峰值、谷值、峰值時(shí)間、谷值時(shí)間的比較 與正常組相比，模型組、MS組CORT中值、峰值、谷值均明顯升高（P＜0.01）。與模型組相比，YS組、MS+YS組CORT中值、峰值、谷值均明顯降低（P＜0.01）。與MS組相比，YS組、MS+YS組CORT中值、峰值、谷值均明顯降低（P＜0.01）。與YS組相比，MS+YS組CORT中值、峰值、谷值明顯降低（P＜0.01）。

與正常組相比，模型組CORT振幅明顯減?。≒＜0.01），時(shí)相提前8.16 h；MS組CORT振幅明顯減?。≒＜0.01），時(shí)相提前9.45 h；YS組 CORT振幅明顯減小（P＜0.01），時(shí)相提前9.35 h；MS+YS組CORT振幅明顯減?。≒＜0.01），時(shí)相提前9.32 h。與MS組比較，MS+YS組CORT振幅明顯減?。≒＜0.01），時(shí)相提前 0.75 h；YS組與 MS+YS組相比，振幅明顯增大（P＜0.01），時(shí)相推后1.85 h。見Tab 9、10。

Tab 9 Characteristic value of serum CORT rhythm of each group±s，n＝7）

Tab 9 Characteristic value of serum CORT rhythm of each group±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Characteristic value M︱A︱ φ 0.37±0.88 Control 240.94±10.64 32.20±8.55 -0.54±0.34 Model 311.55±45.20** 19.48±6.74** 0.47±0.51 MS 310.96±36.84** 19.37±8.59** 0.13±0.93 YS 248.97±18.33##△△ 22.20±13.17** 0.42±0.96 MS+YS 267.57±25.23##△△▲▲ 21.23±12.89**△△▲▲

Tab 10 Peak／valley time and peak／valley value of serum CORT of each group（±s，n＝7）

Tab 10 Peak／valley time and peak／valley value of serum CORT of each group（±s，n＝7）

**P＜0.01 vs control；##P＜0.01 vs model；△△P＜0.01 vs MS；▲▲P＜0.01 vs YS

Group Valley time／h Control 273.15±15.94 208.74±10.87 21.96 9.9 Peak value／ng·L-1 Valley value／ng·L-1 Peak time／h 6 25.08 13.08 Model 331.03±50.81** 292.07±39.94** 13.80 25.80 MS 330.33±32.79** 291.59±42.27** 12.51 24.51 YS 271.18±28.87##△△ 226.77±13.60##△△ 13.61 25.61 MS+YS 273.69±28.51##△△▲▲ 221.65±12.89##△△▲▲

4 討論

CUMS模型的原理是模擬抑郁癥的環(huán)境誘因以及核心癥狀快感缺失，該模型不僅可用于抗抑郁藥效學(xué)的研究，而且更適合抗抑郁劑作用機(jī)制的研究［6］。本實(shí)驗(yàn)觀察到，CUMS可引起大鼠體重增長(zhǎng)緩慢和糖水偏愛度的明顯下降。JWSNS 3個(gè)給藥組對(duì)模型大鼠體重增長(zhǎng)緩慢現(xiàn)象沒有抑制作用。在改善大鼠由慢性應(yīng)激帶來的糖水偏愛度下降方面，JWSNS3個(gè)給藥組均表現(xiàn)出抑制作用，表明JWSNS具有抗抑郁效應(yīng)。

正常情況下，大鼠體溫峰值時(shí)間出現(xiàn)在暗時(shí)相（21.43，相當(dāng)于24 h制的21∶21），谷值時(shí)間出現(xiàn)在光時(shí)相（9.43，相當(dāng)于24 h制的9∶09）。為了進(jìn)一步明確慢性應(yīng)激對(duì)體溫的影響以及JWSNS分時(shí)給藥的效果，將24h體溫分為晝體溫（8∶00～20∶00）和夜體溫（20∶00～8∶00），分別進(jìn)行觀察研究。結(jié)果表明，慢性應(yīng)激可造成大鼠體溫晝夜波動(dòng)加劇，使白晝體溫更低，夜間體溫更高（體溫谷值降低，峰值升高），并且這種現(xiàn)象在谷值方面表現(xiàn)得更為明顯。JWSNS酉時(shí)、卯酉分時(shí)給藥對(duì)晝夜體溫波動(dòng)加劇具有抑制作用，且酉時(shí)給藥表現(xiàn)為對(duì)峰值、谷值的雙相調(diào)節(jié)作用，而卯酉分時(shí)給藥則主要是作用于光時(shí)相，即對(duì)谷值（白晝）進(jìn)行調(diào)節(jié)。在慢性應(yīng)激狀態(tài)下，大鼠的體溫節(jié)律出現(xiàn)延遲現(xiàn)象，表現(xiàn)為時(shí)相的推后，只有JWSNS卯時(shí)給藥可以對(duì)體溫節(jié)律延遲有抑制作用。慢性應(yīng)激使大鼠晝夜體溫中值出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，需做進(jìn)一步的觀察研究。

在抑郁癥發(fā)病機(jī)制許多不同的觀點(diǎn)和假說里，單胺假說被大多數(shù)人所推崇［10］，抑郁癥的神經(jīng)生化基礎(chǔ)主要是5-HT和去甲腎上腺素水平或功能的低下［11］。正常情況下，大鼠血清 5-HT、MT、CORT含量均存在著晝夜波動(dòng)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠血清5-HT含量晝夜波動(dòng)的幅度在（36.64～91.78）μg·L-1之間，其峰值時(shí)間出現(xiàn)在暗時(shí)相（21.69，相當(dāng)于24 h制的21∶21），谷值時(shí)間出現(xiàn)在光時(shí)相（9.69，相當(dāng)于24 h制的9∶09）。慢性應(yīng)激狀態(tài)下，大鼠晝夜血清5-HT含量波動(dòng)變化不明顯，即振幅減??；分泌節(jié)律紊亂，表現(xiàn)為時(shí)相的大幅提前。慢性應(yīng)激大鼠血清5-HT的中值、峰值、谷值均降低，JWSNS酉時(shí)和卯酉分時(shí)給藥對(duì)大鼠血清5-HT整體水平的低下具有抑制作用，其中JWSNS酉時(shí)給藥效果最佳。JWSNS卯酉分時(shí)給藥對(duì)大鼠晝夜血清5-HT振幅減小具有抑制作用；JWSNS卯時(shí)給藥和卯酉分時(shí)給藥則對(duì)大鼠血清5-HT分泌節(jié)律的紊亂有一定的抑制作用。

MT是人體內(nèi)的一種能夠影響睡眠規(guī)律、覺醒類型和體溫，并與情緒調(diào)節(jié)、失眠等密切相關(guān)的物質(zhì)［12］。MT主要是由松果體分泌，其前身物質(zhì)是5-HT，5-HT經(jīng) N-乙?；D(zhuǎn)移酶（N-acetyltransferase，NAT）作用轉(zhuǎn)變?yōu)镹-乙?；?5-羥色胺，再經(jīng)羥基吲哚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶的作用生成MT。MT的節(jié)律成分為內(nèi)源性節(jié)律，是機(jī)體重要的標(biāo)志節(jié)律［13］。研究人員發(fā)現(xiàn)MT與抑郁癥密切相關(guān)，抑郁癥發(fā)作時(shí)會(huì)呈現(xiàn)MT分泌量、分泌節(jié)律位相及幅度的異常［14］。目前一般認(rèn)為，抑郁癥患者發(fā)作期間MT分泌下降，緩解后MT分泌再度上升［15］，MT水平的高低對(duì)抑郁癥具有診斷價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠血清MT含量晝夜波動(dòng)的幅度在（7.16～11.98）ng·L-1之間，其峰值時(shí)間出現(xiàn)在暗時(shí)相（22.66，相當(dāng)于24 h制的22∶22），谷值時(shí)間出現(xiàn)在光時(shí)相（10.66，相當(dāng)于24 h制的10∶10）。慢性應(yīng)激可使大鼠晝夜血清MT中值、峰值、谷值降低，與5-HT的改變規(guī)律相一致。JWSNS酉時(shí)給藥對(duì)此種改變具有抑制作用。慢性應(yīng)激大鼠晝夜血清MT含量波動(dòng)幅度減小，分泌節(jié)律紊亂，表現(xiàn)為時(shí)相的大幅提前，甚至表現(xiàn)為晝夜節(jié)律的顛倒。JWSNS酉時(shí)給藥對(duì)波動(dòng)幅度的減小具有抑制作用，而JWSNS卯時(shí)給藥和卯酉分時(shí)給藥則對(duì) MT分泌節(jié)律紊亂具有抑制作用，其中JWSNS卯酉分時(shí)給藥效果最佳。

抑郁癥患者多有HPA軸活動(dòng)亢進(jìn)［16］，皮質(zhì)醇水平會(huì)在夜間升高［17］。Kentarou等［18］明確提出慢性應(yīng)激的過程引起晝夜節(jié)律紊亂，表現(xiàn)在體溫過高和皮質(zhì)醇增多癥的觀點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠血清CORT含量晝夜波動(dòng)的幅度在（23.65～40.55）μg·L-1之間，其峰值時(shí)間出現(xiàn)在暗時(shí)相（21.96，相當(dāng)于24 h制的21∶21），谷值時(shí)間出現(xiàn)在光時(shí)相（9.96，相當(dāng)于24 h制的9∶09）。慢性應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠晝夜血清CORT含量升高，JWSNS酉時(shí)和卯酉時(shí)給藥可抑制CORT的升高。慢性應(yīng)激大鼠晝夜血清CORT含量波動(dòng)幅度減小，分泌節(jié)律紊亂，表現(xiàn)為時(shí)相的大幅提前，甚至表現(xiàn)為晝夜節(jié)律的顛倒。JWSNS酉時(shí)和卯酉時(shí)給藥對(duì)波動(dòng)幅度的減小具有一定的抑制作用。

中醫(yī)認(rèn)為，正常人體應(yīng)該處于一個(gè)陰陽(yáng)平衡的狀態(tài)，人體的體溫和各種激素分泌也應(yīng)該在一個(gè)既定范圍內(nèi)波動(dòng)，若波動(dòng)加劇或消失，則說明人體的陰陽(yáng)平衡狀態(tài)遭到了破壞。抑郁癥的發(fā)生與晝夜節(jié)律的紊亂之間存在著密切的聯(lián)系，而重新構(gòu)建正常的晝夜節(jié)律可能具有抗抑郁的作用。JWSNS在組成上主要包含兩部分藥物，一部分是以疏肝、柔肝為主的柴胡、枳殼、白芍，一部分是以鎮(zhèn)肝、清肝為主的石決明、梔子、干地黃和枸杞子，兩部分相互配合，一升一降，一陽(yáng)一陰，恰恰包含有陰陽(yáng)并用、調(diào)節(jié)陰陽(yáng)的思想。從中醫(yī)時(shí)間醫(yī)學(xué)角度而言，卯時(shí)為肝旺之時(shí)，酉時(shí)為肝衰之時(shí)，在這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別給藥，正好可以順應(yīng)肝氣的盛衰變化，達(dá)到調(diào)肝，進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體陰陽(yáng)的作用。時(shí)間節(jié)律在中醫(yī)表現(xiàn)為陽(yáng)氣周而復(fù)始地運(yùn)行，在肝氣升發(fā)正旺的卯時(shí)給藥，有助于陽(yáng)氣的生發(fā)，同時(shí)也有助于對(duì)伴隨陽(yáng)氣生發(fā)而波動(dòng)的人體各種時(shí)間節(jié)律的調(diào)節(jié)；而各種激素和神經(jīng)遞質(zhì)在中醫(yī)歸屬于陰津范疇，在陰氣漸盛、陽(yáng)氣漸衰的酉時(shí)給藥，正好可以順應(yīng)陰陽(yáng)變化，調(diào)養(yǎng)肝血，使陰液中的各種物質(zhì)恢復(fù)到正常狀態(tài)。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，JWSNS對(duì)慢性應(yīng)激大鼠具有明顯抗抑郁作用，卯時(shí)（7∶30）給藥可能主要與調(diào)節(jié)體溫、激素以及神經(jīng)遞質(zhì)分泌節(jié)律有關(guān)；酉時(shí)（17∶30）給藥可能主要與調(diào)節(jié)激素和神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)；而卯酉分時(shí)給藥則與以上兩方面神經(jīng)內(nèi)分泌節(jié)律綜合調(diào)節(jié)密切相關(guān)。這一結(jié)論與中醫(yī)時(shí)間醫(yī)學(xué)理論和調(diào)節(jié)陰陽(yáng)的思想是相契合的。

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