參芪扶正注射液對(duì)病毒性心肌炎小鼠SOD 活性和MDA 含量的影響

范柳芳，陳金水，吳天敏，許昌聲，王華軍

病毒性心肌炎（VMC）臨床統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)發(fā)病率逐年上升，但具有明確療效的治療藥物卻屈指可數(shù)。近年，VMC的研究較多集中于對(duì)臨床VMC 患者的觀察，動(dòng)物研究相對(duì)較少。林國(guó)珍等［1］的研究表明，VMC的發(fā)病與氧自由基過表達(dá)密切相關(guān)。本課題研究了參芪扶正注射液抗氧化作用治療VMC小鼠。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)病毒、動(dòng)物 柯薩奇B3病毒（CVB3），Nancy株，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院病毒所。120 只4～6 周齡雄性BALB／c健康小鼠，體重為16g～20g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑、藥物 丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所（批號(hào)A 003－1）。病毒唑注射液購(gòu)自福州海王福藥制藥有限公司。參芪扶正注射液由麗珠集團(tuán)利民制藥廠生產(chǎn)。

1.3 動(dòng)物分組、取材 將小鼠隨機(jī)分為5 組，空白組（A：20只），首次腹腔注射Eagle’s液0.1mL，0.5min后0.4mL生理鹽水腹腔注射，持續(xù)30d。模型組（B：28 只）、病毒唑組（C：24只）、參芪小劑量組（D：24只）、參芪大劑量組（E：24只），首次腹腔注射5×102TCID50CVB3稀釋液0.1mL后，0.5min后分別腹腔注射0.4mL生理鹽水、0.4mL 病毒唑注射液、0.4mL 參芪扶正注射液、0.9mL參芪扶正注射液，持續(xù)30d。第3天、第10天、第30天，各組隨機(jī)抽取一定數(shù)量的小鼠，運(yùn)用眼球摘除取血法采集血約1.0 mL，離心后，－20℃冰箱中保存，以檢測(cè)SOD 活性、MDA 含量。

1.4 血清SOD、MDA 檢測(cè) 分別運(yùn)用黃嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法，按照SOD、MDA 檢測(cè)試劑盒說明書步驟操作。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)。

2 結(jié) 果

與模型組相比：第3天（急性期）時(shí)，參芪大劑量組、病毒唑組SOD 活性升高，MDA 含量降低（P＜0.05），兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；第10天（急性期）時(shí)，各治療組均能不同程度改善SOD活性，MDA 含量（P＜0.05，P＜0.01），參芪大劑量組變化最明顯（P＜0.01），并且與病毒唑組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；參芪小劑量組與病毒唑組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；第30 天（慢性期）時(shí)，參芪大劑量組、參芪小劑量組SOD 活性升高，MDA 含量降低（P＜0.05），兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與病毒唑組相比較，參芪大劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表1、表2。

表1 參芪對(duì)VMC小鼠血清SOD活性的影響

表1 參芪對(duì)VMC小鼠血清SOD活性的影響

與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01；與病毒唑組比較，5）P＜0.05，6）P＜0.01

組別 第3天 第10天 第30天A 組230.71±10.84 224.96±12.27 222.54±10.42 B組 162.98±11.732） 146.52±9.072） 188.36±2.622）C組 186.70±1.682）3） 184.00±3.912）4） 199.96±2.501）D 組 173.63±3.202） 179.74±5.002）3） 210.16±6.611）3）E組 190.28±8.562）3） 204.52±3.022）4）6） 206.04±4.855）3）

表2 參芪對(duì)VMC小鼠血清MDA 含量的影響

表2 參芪對(duì)VMC小鼠血清MDA 含量的影響

與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01；與病毒唑組比較，5）P＜0.05，6）P＜0.01

組別 第3天 第10天 第30天A 組14.13±0.86 15.00±2.09 13.19±1.88 B組 42.19±1.432） 52.30±1.942） 30.46±0.972）C組 29.90±0.872）3） 35.00±1.942）4） 22.71±1.331）D 組 34.77±0.742） 36.96±4.282）3） 20.98±2.101）3）E組 28.69±0.892）3） 29.46±0.812）4）6） 17.56±0.875）3）

3 討 論

在祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，病毒性心肌炎的歸屬尚無明確定論。對(duì)臨床VMC患者的觀察以及對(duì)VMC小鼠的研究，認(rèn)為其屬于“溫病”范疇更為合理，此與陳茂剛等［2］探討相符。

本研究顯示，BALB／c小鼠感染柯薩奇B3病毒后，傷津耗液十分明顯，故認(rèn)為其感受溫?zé)嵝岸竞螅膫挝戈幗?，擾亂心營(yíng)，損傷心陰。正氣不足，素體虛弱是VMC 發(fā)病的根本原因，溫?zé)嵝岸境颂撉中?、氣陰兩虛是VMC 發(fā)病的關(guān)鍵［3］。由此推出，治療VMC宜以補(bǔ)氣生津?yàn)橹?，因氣能生津、氣能行津、氣能攝津，當(dāng)以補(bǔ)氣為先，氣津均源于脾胃運(yùn)化之水谷津微，脾胃之氣充盛，則化生津液力量增強(qiáng)，并且脾健則能運(yùn)脾化濕，升降樞紐正常，則可維持水液代謝平衡，故予以健脾益氣為主之中藥參芪扶正注射液。參芪扶正注射液主要由黃芪、黨參組成。黃芪性微溫，味甘，能補(bǔ)脾益氣、補(bǔ)肺固表，黨參補(bǔ)中益氣生津，二者在配伍中屬相須關(guān)系，配合運(yùn)用能增強(qiáng)健脾益氣之功效。

臨床研究表明，VMC 的發(fā)生與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)有關(guān)，測(cè)定脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的程度有助于VMC 的病情評(píng)價(jià)［4］。VMC時(shí)，受損的心肌細(xì)胞產(chǎn)生的氧自由基破壞了原來的動(dòng)態(tài)平衡，引發(fā)了脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，而氧自由基的清除依賴抗氧化酶系的作用。超氧化物歧化酶是抗氧化酶系中的主要抗氧化酶，其活性高則抗氧化作用強(qiáng)。MDA 是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的中間產(chǎn)物，其含量多少體現(xiàn)了氧化損傷的程度。

此次研究結(jié)果顯示，急性期（第3天、第10天），大劑量參芪扶正注射液升高SOD 活性、降低MDA 含量明顯優(yōu)于病毒唑注射液與小劑量參芪扶正注射液，具有量效依賴性。慢性期（第30天）大小劑量參芪扶正注射液均能提高SOD 活性，降低MDA 含量，不存在量效依賴性。表明參芪扶正注射液具抗氧化作用，其可使VMC 小鼠的SOD 活性升高，清除過表達(dá)的氧自由基，改善動(dòng)態(tài)失衡，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而減少中間產(chǎn)物MDA 含量。急性期適當(dāng)增加劑量，療效更顯著。為臨床參芪扶正注射液治療病毒性心肌炎提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但參芪扶正注射液治療VMC的具體作用耙點(diǎn)尚有待于進(jìn)一步研究。

［1］ 林國(guó)珍，朱霖，施詠梅.病毒性心肌炎患兒抗氧化能力與營(yíng)養(yǎng)素含量測(cè)定［J］.微量元素與健康研究，2001，18（2）：29－30.

［2］ 陳茂剛.試論病毒性心肌炎屬于“溫病”范疇［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002，5（13）：295－296.

［3］ 馬愛萍，經(jīng)劍穎.益氣養(yǎng)陰法治療病毒性心肌炎療效觀察［J］.臨床合理用藥，2013，8（6）：93.

［4］ 周曉春，顔勇，王寶忠，等.生黃合劑對(duì)病毒性心肌炎小鼠血清SOD活性和MDA 含量的影響［J］.承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，1（25）：10－12.