王璟

三諾講糖

檢測血尿酸的方法比較及進展

王璟

近年來隨著人們生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)的變化，嘌呤的攝入量也明顯增加，高尿酸血癥患者明顯增多引發(fā)了一系列疾病。

測定尿酸的臨床意義在于：①血尿酸過量可導致痛風，測定血清尿酸含量對痛風的診斷和觀察是一項靈敏的指標。②尿酸水平可反映體內(nèi)超氧陰離子自由基水平，在急性腦血管病發(fā)作時產(chǎn)生大量超氧陰離子自由基，所以腦出血腦梗塞患者血清尿酸較正常人有明顯升高。③血清尿酸含量測定可為心力衰竭疾病的診斷提供重要的依據(jù)，血清尿酸水平升高是心血管疾病惡化及其死亡率增加的一個危險因素，檢測尿酸水平是評估其預后的一個有意義的生化指標。④血清尿酸增多還見于各種類型的腎臟疾病，腎功能衰竭早期，即可出現(xiàn)血清尿酸含量明顯升高，因此血清尿酸含量是預防腎臟疾病的一個早期靈敏可靠的指標之一。⑤血清尿酸含量測定在糖尿病診斷方面具有重要意義，糖尿病患者血清尿酸水平顯著高于正常人，尿酸的增加是糖尿病的主要特點之一，尿酸定量測定可作為其檢測的一個重要指標?？梢娧迥蛩岷繙y定，是臨床檢測的極為重要的生化指標之一，為臨床診斷和觀察疾病提供了可靠的依據(jù)。

目前測定尿酸的方法主要有磷鎢酸還原法、酶法、伏安法、毛細管電泳法、液相色譜法和同位素稀釋質(zhì)譜法等。

1 磷鎢酸法

早在1894年，有研究者發(fā)現(xiàn)尿酸在堿性條件下能還原磷鎢酸。1912年又有研究者首先利用這一原理實現(xiàn)對尿酸含量的測定，后又經(jīng)一系列的改良。其反應原理是：無蛋白的血清濾過液中的尿酸在堿性溶液中被磷鎢酸氧化成尿囊素及CO2，而磷鎢酸被還原成鎢藍，可用比色法測定660nm處波長，根據(jù)吸光度的變化計算尿酸的含量。

由于方法測定線性范圍窄(＜594.8μmol/ L)，尿酸在無蛋白濾液中的穩(wěn)定性差，尿酸與蛋白產(chǎn)生共沉淀而影響結(jié)果，為了防止產(chǎn)物褪色，試劑中加入了有毒的氰化物，并且方法容易受其他非尿酸還原試劑，如麥角硫因、谷胱甘肽、抗壞血酸及糖等物質(zhì)的干擾，以及特異性不強，目前臨床上已經(jīng)很少應用。

2 酶法

20世紀30年代酶試劑用于臨床生化指標測定，70年代得到了較大發(fā)展。目前臨床上常用的檢測尿酸的方法為單酶法，其基本原理是通過單一酶促反應后，利用各種方法測定底物或者產(chǎn)物的濃度來求待測物含量。

酶法進行檢測尿酸的方法很多，目前最常用的是尿酸氧化酶傳感器檢測法。但是各種酶法受不同試劑儀器等的干擾各個方法之間的檢測結(jié)果偏差很大檢測結(jié)果沒有可比性。

3 伏安法

Kolthoff和Laitinen等人把基于研究電流-電壓曲線特性進行分析的方法統(tǒng)稱為伏安法。伏安法是目前較常用的檢測尿酸的方法近年來伏安法檢測尿酸在理論研究和實際運用于臨床診斷上都取得了很大的發(fā)展。伏安法檢測尿酸常用的方法有兩種：微電極差示脈沖伏安法和吸附溶出伏安法。

微電極差示脈沖伏安法法測定結(jié)果較為準確，可望用于在線檢測，但目前應用不是十分廣泛。吸附溶出伏安法抗干擾能力較強，操作簡便，樣品處理簡單，易于推廣。上述系列方法中很多內(nèi)源物質(zhì)、外源物質(zhì)或者儀器本身對測量產(chǎn)生干擾。后來人們研究發(fā)展利用高效液相色譜測定血清中的尿酸。

4 高效液相色譜法

此法是利用乙腈沉淀血清中的蛋白質(zhì), 過濾后直接進行HPLC測定血清中的尿酸, 樣品前處理過程簡單; 采用乙酸銨緩沖體系, 避免使用有機相, 對環(huán)境的污染小，具有較高準確性, 是血清中尿酸測定較好的參考方法，但是需要使用復雜的柱切換設備。

5 毛細管電泳法

Grune等人用高效毛細管電泳法同時檢測了系列嘌呤堿和核酸。Xu等人采用毛細管區(qū)帶電泳對血清中的尿酸進行定性和定量。他們用30cm×25μM(I.D.)熔融二氧化硅毛細管柱，采用兩性離子緩沖液，用碳纖維作為工作電極，方法的檢測限為0.48fmol。與液相色譜法相比，此方法前處理相對較簡單，線性范圍寬，進樣量少，較適合用于日常分析。

6 同位素稀釋質(zhì)譜法

1995年國際物質(zhì)量咨詢委員會(CCQM)在巴黎召開的第六次會議將同位素稀釋質(zhì)譜法(Isotope dilution mass spectrometry, ID/MS) 精密庫侖、電位滴定、凝固點下降和重量法定位于具有絕對測量性質(zhì)的方法。其中，ID/MS是唯一一種微量痕量和超痕量物質(zhì)含量的權(quán)威測量方法。近年來ID/MS 是最常用的臨床檢驗量值的基準方法。目前國際上正利用ID/MS作為基準方法為人體血清中的膽固醇、葡萄糖、尿酸、尿素肌酐以及甘油三酯等定值。同位素稀釋質(zhì)譜法測定血清尿酸的方法精密、準確。

7 末梢血尿酸測定

末梢血尿酸測定近年來應用于臨床工作中，目前已有便攜式電子末稍血尿酸測定儀面世（比如EA-11血糖尿酸測試儀）。指尖血采集方便，快捷、取血量少，較靜脈抽血化驗患者更樂意接受。手指末稍血液循環(huán)豐富，采血時血量豐沛。研究顯示指尖血與靜脈血尿酸有良好相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r為0.938(P＜0．01)。

8 總結(jié)

磷鎢酸法測尿酸由于容易受到物質(zhì)的干擾，且特異性不強，目前臨床上已經(jīng)很少應用。酶法、伏安法、毛細管電泳法、液相色譜法一般用于血清中尿酸的常規(guī)檢測，這些方法除了需要抽取血液標本以外，尚需要用標準物質(zhì)來校準，從而保證檢測結(jié)果的準確性和可比性。同位素稀釋質(zhì)譜法測定血清尿酸的方法精密、準確，適用于臨床血清尿酸的監(jiān)測，但需要采用樣品預處理手段，包括凈化離子交換衍生化等等因此樣品的前處理，過程比較復雜，費時且成本較高。末稍血測定尿酸具有方便，快速、便于隨診等優(yōu)點。

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