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      HPLC法對(duì)唐古特瑞香中瑞香素和芫花素含量的測(cè)定

      2014-06-28 18:21:32文慧,盧永昌
      湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年7期
      關(guān)鍵詞:高效液相色譜

      文慧,盧永昌

      摘要:建立同時(shí)測(cè)定唐古特瑞香(Daphne tangutica)中瑞香素和芫花素的含量的HPLC方法。采用Agilent ZORBAX(4.6 mm×250 mm,5 μm)色譜柱;檢測(cè)波長為360 nm;柱溫為30 ℃。結(jié)果表明,瑞香素在0.115~0.920 μg內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.999 9),其平均回收率為99.19%,RSD=1.2%(n=9)。芫花素在0.011~0.088 μg內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.999 9),其平均回收率為100.25%,RSD=1.5%(n=9)。該方法樣品處理簡單、準(zhǔn)確度高、分離效果好,適用于該藥的成分測(cè)定。

      關(guān)鍵詞: 高效液相色譜;瑞香素;芫花素;唐古特瑞香(Daphne tangutica)

      中圖分類號(hào):O657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2014)07-1654-03

      Determination of Daphnetin and Genkwanin in Daphne tangutica by HPLC Method

      WEN Hui, LU Yong-chang

      (College of Life Science and Chemistry, Qinghai University for Nationalities, Xining 810007, Qinghai, China)

      Abstract: The high performance liquid chromatography(HPLC) was used to simultaneously determine daphnetin and genkwanin in Daphne tangutica. The samples were separated on Agilent ZORBAX(4.6 mm×250 mm,5 μm) column. Detection wavelength was 360 nm and column temperature was 30 ℃. The results showed that the linear range of daphnetin was good in 0.115~0.920 μg(R2=0.999 9) with the average recovery of 99.19% and RSD of 1.2%(n=9). The linear range of genkwanin was good in 0.011~0.088 μg(R2=0.999 9) with the average recovery of 100.25% and RSD of 1.5%(n=9). This method was simple, accurate,and suitable for determining components and quantities of daphnetin and genkwanin in Daphne tangutica.

      Key words: HPLC; daphnetin; genkwanin; Daphne tangutica

      唐古特瑞香(Daphne tangutica)為瑞香科植物的干燥根及莖[1],主要分布在青海果洛、玉樹、黃南、海北等藏族自治州,生長在海拔2 700~3 100 m的林緣及灌叢中[2],系傳統(tǒng)藏藥省相那瑪。常用于治療風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病[3]。其主要化學(xué)成分為棕櫚酸、月桂酸、 β-谷甾醇、7-甲氧基-8-羥基香豆素、瑞香素、芫花素、羥基芫花素、對(duì)羥基苯甲酸等[4,5]。

      對(duì)于唐古特瑞香中含量分析僅見瑞香素的報(bào)道[5],芫花素尚未見報(bào)道,本研究采用HPLC梯度洗脫法同時(shí)檢測(cè)唐古特瑞香中的瑞香素和芫花素的含量。試驗(yàn)結(jié)果證明,該方法可操作性強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好,能有效地控制藥品質(zhì)量。

      1 材料與方法

      1.1 儀器與試劑

      Agilent 1200 型高效液相色譜儀(配備自動(dòng)進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、四元梯度泵、柱溫箱、DAD檢測(cè)器、Agilent 1200色譜工作站);KQ-300B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);瑞香素對(duì)照品(成都曼思特生物科技有限公司,批號(hào)MUST-12071104,純度≥98%),芫花素對(duì)照品(成都曼思特生物科技有限公司,批號(hào)MUST-12073001,純度≥98%),甲醇為色譜純?cè)噭?,其他試劑均為分析純,水為去離子水。

      1.2 色譜條件[6-8]

      Agilent ZORBAX柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動(dòng)相:甲醇(A)-0.04%磷酸水溶液(B)進(jìn)行梯度洗脫:0~10 min,A∶B(39∶61,V/V);10~15 min,調(diào)節(jié)流動(dòng)相A∶B(40∶60,V/V);15~18 min,調(diào)節(jié)流動(dòng)相A∶B (69∶31,V/V);18~23 min,調(diào)節(jié)流動(dòng)相A∶B (72∶28,V/V);23~40 min,調(diào)節(jié)流動(dòng)相A∶B (90∶10,V/V);檢測(cè)波長為360 nm,柱溫為30 ℃,流速為1 mL/min。

      1.3 對(duì)照品溶液的制備

      精密稱取瑞香素對(duì)照品適量,加甲醇制成0.460 mg/mL的溶液,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液;精密稱取芫花素對(duì)照品適量,加甲醇制成0.440 mg/mL的溶液,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液;再精密量取瑞香素、芫花素對(duì)照品儲(chǔ)備液,加甲醇稀釋至刻度得混合后瑞香素、芫花素的濃度分別為0.022、0.023 mg/mL。

      1.4 供試品溶液的制備[9]

      1.4.1 提取溶劑的選擇[10] 取本品粗粉約0.5 g,2份,加入錐形瓶中,分別準(zhǔn)確加入70%乙醇(V/V,下同)25 mL、70%甲醇(V/V)25 mL,分別稱定重量,超聲處理40 min,靜置至室溫,再稱定重量,補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取上述兩種供試品溶液各3 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明,用兩種溶劑提取時(shí),瑞香素的峰面積接近,但是芫花素的峰面積相差較大,所以以芫花素的峰面積為指標(biāo)比較不同溶劑的提取效果。結(jié)果表明,乙醇的提取效果較好。故選用乙醇為提取溶劑。

      1.4.2 提取溶劑濃度的選擇 取本品粗粉約0.5 g,2份,加入錐形瓶中,分別準(zhǔn)確加入95%乙醇25 mL、70%乙醇25 mL、50%乙醇25 mL,分別稱定重量,超聲處理40 min,靜置至室溫,再稱定重量,補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取上述供試品溶液各3 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明,瑞香素和芫花素峰面積表明用70%濃度的乙醇溶液提取效果最好。故選用70%乙醇為提取溶劑。

      1.4.3 提取方法的選擇 取本品粗粉約0.5 g,2份,加入錐形瓶中,分別準(zhǔn)確加入70%乙醇25 mL,稱定重量,分別超聲處理40 min,加熱回流,靜置至室溫,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取供試品溶液各3 μL,注入液相色譜儀,以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明,用加熱超聲方法提取效果最好。故選用加熱超聲為提取方法。

      1.4.4 提取時(shí)間的選擇 取本品粗粉約0.5 g,3份,加入錐形瓶中,分別精密加入70%乙醇25 mL,稱定重量,加熱超聲40、30、20 min,靜置至室溫,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量,搖勻,濾過,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取供試品溶液3 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。結(jié)果表明,以芫花素和瑞香素峰面積為指標(biāo),超聲40 min時(shí),兩者含量最高。故選擇40 min為提取時(shí)間。

      1.4.5 供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5 g,加入錐形瓶中,精密加入70%乙醇25 mL,稱定重量,加熱超聲40 min,等至室溫,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,待測(cè)。見圖1。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 線性范圍的考察

      分別精密吸取瑞香素對(duì)照品溶液(0.046 mg/mL)和芫花素對(duì)照品溶液(0.044 mg/mL)各2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 μL,按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。分別以瑞香素與芫花素的峰面積為縱坐標(biāo),相對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性擬合。瑞香素的回歸方程y=3 262.4x+7.221 7,(R2=0.999 9);芫花素的回歸方程為y=3 904.2x+2.621 7,(R2=0.999 9)。表明瑞香素在0.115~0.920 μg,芫花素在0.011~0.088 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

      2.2 精密度

      取瑞香素和芫花素的混合對(duì)照品,連續(xù)進(jìn)樣6次,每次進(jìn)樣10 μL,瑞香素峰面積的RSD為1.10%,芫花素峰面積的RSD為0.97%,表明儀器精密度良好。

      2.3 穩(wěn)定性

      精密吸取供試液溶液10 μL,分別在0、2、4、6、12、16 h重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定瑞香素和芫花素峰面積,結(jié)果表明,供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定,瑞香素和芫花素峰面積RSD分別為1.25%、1.20%。

      2.4 重復(fù)性

      取同一批唐古特瑞香樣品,均勻混合后精密稱取6份,每份約0.5 g,按上述方法制備,分別進(jìn)樣10 μL,記錄峰面積,并計(jì)算含量。瑞香素的平均含量為0.360%,RSD為0.76%,芫花素的平均含量為0.025%,RSD為1.00%,表明方法重現(xiàn)性好。

      2.5 加樣回收試驗(yàn)

      取已知瑞香素和芫花素含量的唐古特瑞香樣品9份,每份約0.25 g,精密稱定,分別在上述9份藥材中加入瑞香素的對(duì)照品溶液和芫花素對(duì)照品溶液,按以上方法進(jìn)行處理,制得供試品溶液,分別進(jìn)樣10 μL,記錄瑞香素和芫花素的峰面積,計(jì)算含量,并計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。瑞香素和芫花素的回收率平均值分別為99.19%、100.25%、RSD分別為1.20%、1.50%,表明加樣回收率好。

      2.6 樣品測(cè)定

      取各供試品0.5 g,按“1.4.5”項(xiàng)的方法制得樣品溶液,以上述色譜條件對(duì)5個(gè)批次的樣品進(jìn)行瑞香素和芫花素含量測(cè)定,結(jié)果見表2。瑞香素和芫花素的含量平均值分別為0.340%、0.027%。

      3 小結(jié)與討論

      唐古特瑞香主要分布在青海果洛、玉樹、黃南、海北等藏族自治州。生長在海拔2 700~3 100 m的林緣及灌叢中[2],系傳統(tǒng)藏藥省相那瑪。具有祛風(fēng)除濕,止痛散瘀等功效,治風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛[3]。

      比較了甲醇和乙醇不同溶劑的提取效率,乙醇的提取效果較好。也比較了不同濃度下的乙醇提取,70%的乙醇提取方法較好。同時(shí)運(yùn)用超聲和回流兩種方式進(jìn)行提取,用加熱超聲提取效果較好,所以選取超聲提取法。瑞香素在唐古特瑞香中含量較高,芫花素含量較低。采用HPLC梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定瑞香素和芫花素的含量,方法簡便,重現(xiàn)性好,快速分離,有助于藥材質(zhì)量控制更加完善。文獻(xiàn)中鮮見唐古特瑞香中芫花素的含量的測(cè)定的報(bào)道。本研究結(jié)果表明,該植物中總?cè)鹣闼睾蛙净ㄋ氐暮科骄捣謩e為0.340%、0.027%。

      參考文獻(xiàn):

      [1] 青海省藥品檢驗(yàn)所,青海省藏醫(yī)藥研究所.中國藏藥(第一卷)[M].上海.上海科技出版社,1996:545-546.

      [2] 中國科學(xué)院西北高原生物研究所.青海經(jīng)濟(jì)植物志[M].西寧.青海人民出版社,1987:392.

      [3] 張 薇,蘇 娟,扈曉佳,等.中藥祖師麻的三種基源植物的化學(xué)及藥理活性[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2007,38(3):233.

      [4] 袁小紅,徐春霞,周 敏,等.唐古特瑞香化學(xué)成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2007(19):55-58.

      [5] 劉榮華,梅崇燁,邵 峰,等.唐古特瑞香化學(xué)成分研究[J].中藥材,2009,32(12):1846-1847.

      [6] 劉亞蓉.唐古特瑞香中祖師麻甲素的HPLC法含量測(cè)定[J].山西中醫(yī),2009,30(1):85-87.

      [7] 王紅剛.HPLC法測(cè)定沉香葉中芫花素含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,14(3):70.

      [8] 張保獻(xiàn),原思通,夏 沖.HPLC法測(cè)定芫花中芫花素的含量[J].中國中藥雜志,1996,21(4):237-253.

      [9] 楊秀娟,洪燕龍,吳 飛,等.HPLC測(cè)定鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的方法學(xué)探討[J].中國中藥雜志,2013,38(5):720-724.

      [10] 董嘉德.超聲技術(shù)在中藥提取中的應(yīng)用[J].中國藥業(yè).2002, 11(11):55.

      1.4.2 提取溶劑濃度的選擇 取本品粗粉約0.5 g,2份,加入錐形瓶中,分別準(zhǔn)確加入95%乙醇25 mL、70%乙醇25 mL、50%乙醇25 mL,分別稱定重量,超聲處理40 min,靜置至室溫,再稱定重量,補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取上述供試品溶液各3 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明,瑞香素和芫花素峰面積表明用70%濃度的乙醇溶液提取效果最好。故選用70%乙醇為提取溶劑。

      1.4.3 提取方法的選擇 取本品粗粉約0.5 g,2份,加入錐形瓶中,分別準(zhǔn)確加入70%乙醇25 mL,稱定重量,分別超聲處理40 min,加熱回流,靜置至室溫,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取供試品溶液各3 μL,注入液相色譜儀,以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明,用加熱超聲方法提取效果最好。故選用加熱超聲為提取方法。

      1.4.4 提取時(shí)間的選擇 取本品粗粉約0.5 g,3份,加入錐形瓶中,分別精密加入70%乙醇25 mL,稱定重量,加熱超聲40、30、20 min,靜置至室溫,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量,搖勻,濾過,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取供試品溶液3 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。結(jié)果表明,以芫花素和瑞香素峰面積為指標(biāo),超聲40 min時(shí),兩者含量最高。故選擇40 min為提取時(shí)間。

      1.4.5 供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5 g,加入錐形瓶中,精密加入70%乙醇25 mL,稱定重量,加熱超聲40 min,等至室溫,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,待測(cè)。見圖1。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 線性范圍的考察

      分別精密吸取瑞香素對(duì)照品溶液(0.046 mg/mL)和芫花素對(duì)照品溶液(0.044 mg/mL)各2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 μL,按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。分別以瑞香素與芫花素的峰面積為縱坐標(biāo),相對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性擬合。瑞香素的回歸方程y=3 262.4x+7.221 7,(R2=0.999 9);芫花素的回歸方程為y=3 904.2x+2.621 7,(R2=0.999 9)。表明瑞香素在0.115~0.920 μg,芫花素在0.011~0.088 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

      2.2 精密度

      取瑞香素和芫花素的混合對(duì)照品,連續(xù)進(jìn)樣6次,每次進(jìn)樣10 μL,瑞香素峰面積的RSD為1.10%,芫花素峰面積的RSD為0.97%,表明儀器精密度良好。

      2.3 穩(wěn)定性

      精密吸取供試液溶液10 μL,分別在0、2、4、6、12、16 h重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定瑞香素和芫花素峰面積,結(jié)果表明,供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定,瑞香素和芫花素峰面積RSD分別為1.25%、1.20%。

      2.4 重復(fù)性

      取同一批唐古特瑞香樣品,均勻混合后精密稱取6份,每份約0.5 g,按上述方法制備,分別進(jìn)樣10 μL,記錄峰面積,并計(jì)算含量。瑞香素的平均含量為0.360%,RSD為0.76%,芫花素的平均含量為0.025%,RSD為1.00%,表明方法重現(xiàn)性好。

      2.5 加樣回收試驗(yàn)

      取已知瑞香素和芫花素含量的唐古特瑞香樣品9份,每份約0.25 g,精密稱定,分別在上述9份藥材中加入瑞香素的對(duì)照品溶液和芫花素對(duì)照品溶液,按以上方法進(jìn)行處理,制得供試品溶液,分別進(jìn)樣10 μL,記錄瑞香素和芫花素的峰面積,計(jì)算含量,并計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。瑞香素和芫花素的回收率平均值分別為99.19%、100.25%、RSD分別為1.20%、1.50%,表明加樣回收率好。

      2.6 樣品測(cè)定

      取各供試品0.5 g,按“1.4.5”項(xiàng)的方法制得樣品溶液,以上述色譜條件對(duì)5個(gè)批次的樣品進(jìn)行瑞香素和芫花素含量測(cè)定,結(jié)果見表2。瑞香素和芫花素的含量平均值分別為0.340%、0.027%。

      3 小結(jié)與討論

      唐古特瑞香主要分布在青海果洛、玉樹、黃南、海北等藏族自治州。生長在海拔2 700~3 100 m的林緣及灌叢中[2],系傳統(tǒng)藏藥省相那瑪。具有祛風(fēng)除濕,止痛散瘀等功效,治風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛[3]。

      比較了甲醇和乙醇不同溶劑的提取效率,乙醇的提取效果較好。也比較了不同濃度下的乙醇提取,70%的乙醇提取方法較好。同時(shí)運(yùn)用超聲和回流兩種方式進(jìn)行提取,用加熱超聲提取效果較好,所以選取超聲提取法。瑞香素在唐古特瑞香中含量較高,芫花素含量較低。采用HPLC梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定瑞香素和芫花素的含量,方法簡便,重現(xiàn)性好,快速分離,有助于藥材質(zhì)量控制更加完善。文獻(xiàn)中鮮見唐古特瑞香中芫花素的含量的測(cè)定的報(bào)道。本研究結(jié)果表明,該植物中總?cè)鹣闼睾蛙净ㄋ氐暮科骄捣謩e為0.340%、0.027%。

      參考文獻(xiàn):

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      [7] 王紅剛.HPLC法測(cè)定沉香葉中芫花素含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,14(3):70.

      [8] 張保獻(xiàn),原思通,夏 沖.HPLC法測(cè)定芫花中芫花素的含量[J].中國中藥雜志,1996,21(4):237-253.

      [9] 楊秀娟,洪燕龍,吳 飛,等.HPLC測(cè)定鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的方法學(xué)探討[J].中國中藥雜志,2013,38(5):720-724.

      [10] 董嘉德.超聲技術(shù)在中藥提取中的應(yīng)用[J].中國藥業(yè).2002, 11(11):55.

      1.4.2 提取溶劑濃度的選擇 取本品粗粉約0.5 g,2份,加入錐形瓶中,分別準(zhǔn)確加入95%乙醇25 mL、70%乙醇25 mL、50%乙醇25 mL,分別稱定重量,超聲處理40 min,靜置至室溫,再稱定重量,補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取上述供試品溶液各3 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明,瑞香素和芫花素峰面積表明用70%濃度的乙醇溶液提取效果最好。故選用70%乙醇為提取溶劑。

      1.4.3 提取方法的選擇 取本品粗粉約0.5 g,2份,加入錐形瓶中,分別準(zhǔn)確加入70%乙醇25 mL,稱定重量,分別超聲處理40 min,加熱回流,靜置至室溫,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取供試品溶液各3 μL,注入液相色譜儀,以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明,用加熱超聲方法提取效果最好。故選用加熱超聲為提取方法。

      1.4.4 提取時(shí)間的選擇 取本品粗粉約0.5 g,3份,加入錐形瓶中,分別精密加入70%乙醇25 mL,稱定重量,加熱超聲40、30、20 min,靜置至室溫,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量,搖勻,濾過,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,精密吸取供試品溶液3 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。結(jié)果表明,以芫花素和瑞香素峰面積為指標(biāo),超聲40 min時(shí),兩者含量最高。故選擇40 min為提取時(shí)間。

      1.4.5 供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5 g,加入錐形瓶中,精密加入70%乙醇25 mL,稱定重量,加熱超聲40 min,等至室溫,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,待測(cè)。見圖1。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 線性范圍的考察

      分別精密吸取瑞香素對(duì)照品溶液(0.046 mg/mL)和芫花素對(duì)照品溶液(0.044 mg/mL)各2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 μL,按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。分別以瑞香素與芫花素的峰面積為縱坐標(biāo),相對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性擬合。瑞香素的回歸方程y=3 262.4x+7.221 7,(R2=0.999 9);芫花素的回歸方程為y=3 904.2x+2.621 7,(R2=0.999 9)。表明瑞香素在0.115~0.920 μg,芫花素在0.011~0.088 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

      2.2 精密度

      取瑞香素和芫花素的混合對(duì)照品,連續(xù)進(jìn)樣6次,每次進(jìn)樣10 μL,瑞香素峰面積的RSD為1.10%,芫花素峰面積的RSD為0.97%,表明儀器精密度良好。

      2.3 穩(wěn)定性

      精密吸取供試液溶液10 μL,分別在0、2、4、6、12、16 h重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定瑞香素和芫花素峰面積,結(jié)果表明,供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定,瑞香素和芫花素峰面積RSD分別為1.25%、1.20%。

      2.4 重復(fù)性

      取同一批唐古特瑞香樣品,均勻混合后精密稱取6份,每份約0.5 g,按上述方法制備,分別進(jìn)樣10 μL,記錄峰面積,并計(jì)算含量。瑞香素的平均含量為0.360%,RSD為0.76%,芫花素的平均含量為0.025%,RSD為1.00%,表明方法重現(xiàn)性好。

      2.5 加樣回收試驗(yàn)

      取已知瑞香素和芫花素含量的唐古特瑞香樣品9份,每份約0.25 g,精密稱定,分別在上述9份藥材中加入瑞香素的對(duì)照品溶液和芫花素對(duì)照品溶液,按以上方法進(jìn)行處理,制得供試品溶液,分別進(jìn)樣10 μL,記錄瑞香素和芫花素的峰面積,計(jì)算含量,并計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。瑞香素和芫花素的回收率平均值分別為99.19%、100.25%、RSD分別為1.20%、1.50%,表明加樣回收率好。

      2.6 樣品測(cè)定

      取各供試品0.5 g,按“1.4.5”項(xiàng)的方法制得樣品溶液,以上述色譜條件對(duì)5個(gè)批次的樣品進(jìn)行瑞香素和芫花素含量測(cè)定,結(jié)果見表2。瑞香素和芫花素的含量平均值分別為0.340%、0.027%。

      3 小結(jié)與討論

      唐古特瑞香主要分布在青海果洛、玉樹、黃南、海北等藏族自治州。生長在海拔2 700~3 100 m的林緣及灌叢中[2],系傳統(tǒng)藏藥省相那瑪。具有祛風(fēng)除濕,止痛散瘀等功效,治風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛[3]。

      比較了甲醇和乙醇不同溶劑的提取效率,乙醇的提取效果較好。也比較了不同濃度下的乙醇提取,70%的乙醇提取方法較好。同時(shí)運(yùn)用超聲和回流兩種方式進(jìn)行提取,用加熱超聲提取效果較好,所以選取超聲提取法。瑞香素在唐古特瑞香中含量較高,芫花素含量較低。采用HPLC梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定瑞香素和芫花素的含量,方法簡便,重現(xiàn)性好,快速分離,有助于藥材質(zhì)量控制更加完善。文獻(xiàn)中鮮見唐古特瑞香中芫花素的含量的測(cè)定的報(bào)道。本研究結(jié)果表明,該植物中總?cè)鹣闼睾蛙净ㄋ氐暮科骄捣謩e為0.340%、0.027%。

      參考文獻(xiàn):

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