郭喜霞楊 靜黃 寧萬(wàn)仁玲李昭輝許高威尹雅玲△ 李 鵬

無(wú)羈萜-3β-醇抑制自身免疫性腦脊髓炎的作用研究

郭喜霞1楊 靜2黃 寧1萬(wàn)仁玲1李昭輝1許高威1尹雅玲1△李 鵬1

目的 研究無(wú)羈萜-3β-醇對(duì)實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的豚鼠自身免疫性腦脊髓炎（AE）的抑制作用。方法用25、50 和100 mg∕kg劑量的無(wú)羈萜-3β-醇對(duì)實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的AE豚鼠進(jìn)行灌胃8周。分別檢測(cè)血漿CD4+∕CD8+，白細(xì)胞介素（IL）-1、2、6、10，血漿神經(jīng)肽Y（NPY）、β-內(nèi)啡肽（β-EP），腦組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）-β、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、一氧化氮合酶（NOS）及白細(xì)胞分化抗原CD3的含量。光鏡觀察豚鼠大腦神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化，電鏡觀察神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化，免疫熒光觀察NOS在神經(jīng)元的表達(dá)。結(jié)果無(wú)羈萜-3β-醇抑制實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的AE豚鼠CD4+∕CD8+的升高，抑制血漿IL-1、2、6、10的含量升高，抑制血漿NPY升高及β-EP降低，抑制大腦TGF-β降低和MMP-2、CD3升高以及NOS在神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)的表達(dá)，并維持神經(jīng)元的正常形態(tài)。結(jié)論無(wú)羈萜-3β-醇具有抑制AE的作用。

腦脊髓炎,自身免疫性,實(shí)驗(yàn)性；白細(xì)胞介素類(lèi)；受體,細(xì)胞因子；神經(jīng)肽Y；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β；基質(zhì)金屬蛋白酶2；一氧化氮合酶；抗原,CD；神經(jīng)元；無(wú)羈萜-3β-醇

自身免疫性腦脊髓炎（autoimmune encephalomyelitis，AE）是由CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的慢性變態(tài)反應(yīng)性疾病，臨床上常出現(xiàn)神經(jīng)功能進(jìn)行性障礙、肌肉無(wú)力、肢體癱瘓等癥狀[1]。目前，AE在臨床上尚無(wú)特殊藥物治療方法，常用腎上腺皮質(zhì)激素抗免疫治療，同時(shí)聯(lián)合使用ATP、輔酶A、腺苷、胞二磷膽堿等藥物，以促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)。有學(xué)者報(bào)道，無(wú)羈萜-3β-醇具有抗氧化[2]、抗炎、抗免疫作用[3]，可能在治療免疫系統(tǒng)疾病方面發(fā)揮一定的作用[4]。本研究在實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的AE豚鼠模型基礎(chǔ)上，觀察無(wú)羈萜-3β-醇對(duì)AE的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性英國(guó)種短毛豚鼠，5周齡，體質(zhì)量 220～250 g，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)為SYXK-豫-005-0012。動(dòng)物房溫度18～20℃，環(huán)境潔凈度5 000～8 000級(jí)，相對(duì)濕度40％～50％，換氣次數(shù)20次∕h，氣流速度0.15～0.2 m∕s，多級(jí)定向控制空氣壓差10％～15％，自動(dòng)定時(shí)器控制7：00—19：00為光照期、19：00—07：00為黑暗期，常規(guī)豚鼠飼料及二次凈化水飼養(yǎng)。

1.1.2 藥品試劑 無(wú)羈萜-3β-醇（長(zhǎng)沙麗欣生物制劑有限公司）；醋酸潑尼松（武漢述元科技發(fā)展有限公司）；腦組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）-β、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、白細(xì)胞分化抗原CD3一抗及辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記二抗（碧云天生物技術(shù)研究所）；一氧化氮合酶（NOS）一抗及熒光標(biāo)記二抗（Sigma公司）；白細(xì)胞介素（IL）-1、2、6、10 ELISA試劑盒（南京建成生物工程研究所）；血漿神經(jīng)肽Y（NPY）、β-內(nèi)啡肽（β-EP）放射免疫試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）。

1.1.3 主要儀器 FACScan型流式細(xì)胞儀、γ計(jì)數(shù)儀（美國(guó)Becton-Dickinson公司）；Synergy H4全功能酶標(biāo)儀（美國(guó)伯騰儀器有限公司）；尼康90I熒光顯微鏡（日本尼康公司）。

1.2 方法

1.2.1 AE豚鼠模型制備 （1）豚鼠全脊髓勻漿制備：豚鼠腹腔注射5 mL∕kg氯胺酮麻醉，在無(wú)菌操作下，清理皮毛，依次打開(kāi)腹腔、胸腔，剪斷兩側(cè)肋骨，用鈍頭針從左心室進(jìn)針穿至主動(dòng)脈。先用生理鹽水灌注600 mL，再用4％多聚甲醛灌注固定。組織剪經(jīng)頭部沿枕骨大孔處剪斷，剝?nèi)∧X和脊髓并去掉脊膜與馬尾后稱(chēng)質(zhì)量，按照1∶3質(zhì)量比加入生理鹽水并制備成25％的豚鼠全脊髓勻漿。完全弗氏佐劑和豚鼠全脊髓勻漿以1∶2充分乳化制備成穩(wěn)定的豚鼠全脊髓勻漿抗原乳劑待用。（2）AE模型制備：豚鼠腹腔注射5 mL∕kg氯胺酮麻醉，將豚鼠全脊髓勻漿抗原乳按照1 mL∕kg的劑量皮下注入豚鼠兩個(gè)后足墊皮內(nèi)，同時(shí)左后肢足背皮下注射2 mL∕kg百日咳原漿液，誘導(dǎo)AE模型。免疫后每籠6只常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組 30只實(shí)驗(yàn)豚鼠按照隨機(jī)數(shù)字表分5組，每組6只，實(shí)驗(yàn)中AE模型全部成功。（1）正常對(duì)照組：后足墊皮內(nèi)注射等量生理鹽水（1 mL∕kg）。（2）AE模型組：按照本實(shí)驗(yàn)操作規(guī)定，后足墊皮內(nèi)注射豚鼠全脊髓勻漿抗原乳劑（1 mL∕kg）。（3）醋酸潑尼松組：在AE模型組基礎(chǔ)上，當(dāng)日灌胃醋酸潑尼松2 mg∕（kg·d），灌胃持續(xù)8周。（4）無(wú)羈萜-3β-醇低、中、高濃度組：在AE模型組基礎(chǔ)上，當(dāng)日分別灌胃無(wú)羈萜-3β-醇25、50、100 mg∕（kg·d），灌胃持續(xù)8周。第8周后，5 mL∕kg乙醚麻醉豚鼠，內(nèi)眥采血，加肝素抗凝，取組織，甲醛或戊二醛固定，或液氮凍存以待指標(biāo)檢測(cè)。

1.2.3 血漿CD4+、CD8+含量及CD4+∕CD8+檢測(cè) 取100 μL抗凝血加入20 μL抗豚鼠CD4+及CD8+抗體均勻混合，室溫避光20 min后加入溶血素2 mL，繼續(xù)避光20 min；3 000 r∕min離心5 min后棄去上清液，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+、CD8+含量及CD4+∕CD8+值。

1.2.4 血漿IL-1、2、6、10含量檢測(cè) 按照ELISA試劑盒操作說(shuō)明要求操作。酶標(biāo)儀450 nm單波長(zhǎng)下讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)試管光密度（OD）值，采用SPSS14.0擬合直線并讀取相應(yīng)數(shù)值，求出血漿IL-1、2、6、10含量。

1.2.5 血漿NPY、β-EP含量檢測(cè) 按照放射免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作。測(cè)試樣本在4℃冰箱過(guò)夜24 h，加入分離劑并充分混勻。室溫放置20 min后4℃恒溫3 000 r∕min離心20 min，棄去上清液。在γ計(jì)數(shù)儀上檢測(cè)血漿NPY、β-EP的含量。

1.2.6 腦組織TGF-β、MMP-2、NOS、CD3檢測(cè) 按照免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作。組織抗原和一抗、二抗結(jié)合后顯色，通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助顯微計(jì)數(shù)，在200倍光鏡下，每張切片隨機(jī)讀取5～10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)50個(gè)胞漿呈棕黃色的陽(yáng)性細(xì)胞，對(duì)TGF-β、MMP-2、NOS、CD3進(jìn)行半定量檢測(cè)。

1.2.7 神經(jīng)元形態(tài)觀察 取甲醛固定組織塊，石蠟包埋，制作3～4 μm厚切片，經(jīng)HE染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察。取液氮凍存組織塊，戊二醛固定，制作0.5 mm3電鏡切片，經(jīng)透射電鏡下觀察。

1.2.8 NOS在神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)的表達(dá) 取液氮凍存組織塊，制作冰凍切片。分別用1∶800的NOS一抗以及熒光標(biāo)記的二抗孵育，熒光顯微鏡下觀察。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。組間比較用單因素方差分析，多重比較采用SNK-q法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血漿CD4+、CD8+含量及CD4+∕CD8+值檢測(cè) 與正常對(duì)照組比較，AE模型組CD4+細(xì)胞數(shù)明顯升高，CD8+細(xì)胞數(shù)明顯降低，CD4+∕CD8+比值升高；醋酸潑尼松與無(wú)羈萜-3β-醇明顯抑制AE豚鼠CD4+升高、CD8+降低、CD4+∕CD8+升高，見(jiàn)表1。

Tab.1 Comparison of the plasma CD4+,CD8+cell count and the CD4+/CD8+value among five groups表1 各組血漿CD4+、CD8+細(xì)胞數(shù)以及CD4+/ CD8+比較 （n=6，±s）

Tab.1 Comparison of the plasma CD4+,CD8+cell count and the CD4+/CD8+value among five groups表1 各組血漿CD4+、CD8+細(xì)胞數(shù)以及CD4+/ CD8+比較 （n=6，±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與正常對(duì)照組比較，b與AE模型組比較，c與醋酸潑尼松組比較，P＜0.05；表2～4同

組別正常對(duì)照組AE模型組醋酸潑尼松組無(wú)羈萜-3β-醇低濃度組無(wú)羈萜-3β-醇中濃度組無(wú)羈萜-3β-醇高濃度組F CD4+（×109∕L）42.64±1.65 52.76±2.64a44.57±1.54ab50.65±4.45abc45.54±1.44abc44.43±3.13abc31.675＊＊CD8+（×109∕L）24.76±1.75 18.66±0.87a24.64±2.56b19.47±2.57abc23.57±1.67abc28.76±1.69abc32.341＊＊CD4+∕CD8+1.65±0.28 2.85±0.37a1.96±0.24ab2.54±0.24abc2.47±0.28abc1.99±0.97abc27.654＊

2.2 血漿IL-1、IL-2、IL-6、IL-10的含量檢測(cè) 與正常對(duì)照組比較，AE模型組外周血IL-1、IL-2、IL-6、IL-10含量明顯升高；醋酸潑尼松與無(wú)羈萜-3β-醇可明顯降低外周血IL-1、IL-2、IL-6、IL-10含量，見(jiàn)表2。

2.3 血漿NPY、β-EP的含量檢測(cè) 與正常對(duì)照組比較，AE模型組外周血神經(jīng)遞質(zhì)NPY含量明顯升高、β-EP含量明顯降低；醋酸潑尼松與無(wú)羈萜-3β-醇可明顯抑制外周血神經(jīng)遞質(zhì)NPY含量升高、β-EP含量降低，見(jiàn)表3。

Tab.2 Comparison of plasma levels of IL-1,IL-2, IL-6,IL-10 among five groups表2 各組血漿IL-1、IL-2、IL-6、IL-10的含量比較（n=6，ng∕L,±s）

Tab.2 Comparison of plasma levels of IL-1,IL-2, IL-6,IL-10 among five groups表2 各組血漿IL-1、IL-2、IL-6、IL-10的含量比較（n=6，ng∕L,±s）

組別正常對(duì)照組AE模型組醋酸潑尼松組無(wú)羈萜-3β-醇低濃度組無(wú)羈萜-3β-醇中濃度組無(wú)羈萜-3β-醇高濃度組F IL-1 1.75±0.35 14.96±0.65a7.75±0.93ab12.76±0.35abc10.63±0.44abc8.89±0.87abc34.453＊＊IL-2 6.66±1.04 12.56±1.65a9.46±1.53ab11.82±0.83abc10.32±1.21abc9.89±1.77abc29.349＊組別正常對(duì)照組AE模型組醋酸潑尼松組無(wú)羈萜-3β-醇低濃度組無(wú)羈萜-3β-醇中濃度組無(wú)羈萜-3β-醇高濃度組F IL-6 3.74±0.30 7.44±1.04a4.47±0.48ab7.66±0.56abc5.87±0.67abc4.65±0.67abc36.232＊＊IL-10 665.76±32.65 1 244.55±98.34a1 046.55±87.35ab1 187.54±65.45abc1 167.65±89.43abc1 095.33±124.34abc27.665＊

Tab.3 Comparison of the plasma neurotransmitter content of NPY and β-EP among five groups表3 各組血漿神經(jīng)遞質(zhì)NPY、β-EP的含量比較 （n=6，ng∕L，±s）

Tab.3 Comparison of the plasma neurotransmitter content of NPY and β-EP among five groups表3 各組血漿神經(jīng)遞質(zhì)NPY、β-EP的含量比較 （n=6，ng∕L，±s）

組別正常對(duì)照組AE模型組醋酸潑尼松組無(wú)羈萜-3β-醇低濃度組無(wú)羈萜-3β-醇中濃度組無(wú)羈萜-3β-醇高濃度組F NPY 395.34±21.74 586.76±56.55a414.64±23.65ab534.65±35.59abc494.35±29.69abc422.77±32.78abc34.433＊＊β-EP 378.14±28.78 175.98±16.66a329.76±30.54ab197.48±21.64abc245.56±32.56abc346.29±33.77abc32.256＊＊

2.4 腦組織 TGF-β、MMP-2、NOS、CD3含量檢測(cè) 與正常對(duì)照組比較，AE模型組豚鼠腦組織TGF-β降低，MMP-2、NOS、CD3升高；醋酸潑尼松與無(wú)羈萜-3β-醇可明顯抑制豚鼠腦組織TGF-β降低和MMP-2、NOS、CD3升高，見(jiàn)表4。

2.5 神經(jīng)元形態(tài) （1）光鏡下：AE豚鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元腫脹，并有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，部分神經(jīng)元胞體變小或呈三角形，基質(zhì)疏松伴明顯微空泡形成；醋酸潑尼松與無(wú)羈萜-3β-醇明顯抑制神經(jīng)元凋亡現(xiàn)象，見(jiàn)圖1。（2）電鏡下：AE豚鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元皺縮、膜結(jié)構(gòu)不清；胞核固縮，染色質(zhì)聚集成團(tuán)、異染色質(zhì)增多，高爾基體增多，線粒體腫脹，嵴融合并出現(xiàn)空泡變性。醋酸潑尼松與無(wú)羈萜-3β-醇明顯抑制神經(jīng)元凋亡現(xiàn)象，見(jiàn)圖2。

2.6 NOS在神經(jīng)元內(nèi)表達(dá) AE豚鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)熒光高表達(dá)，醋酸潑尼松與無(wú)羈萜-3β-醇明顯抑制AE豚鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)熒光表達(dá)，見(jiàn)圖3。

Tab.4 Comparison of the TGF-β,MMP-2,NOS,CD3 content in brain tissue among five groups表4 各組腦組織TGF-β、MMP-2、NOS、CD3含量比較 （n=6，ng∕L,±s）

Tab.4 Comparison of the TGF-β,MMP-2,NOS,CD3 content in brain tissue among five groups表4 各組腦組織TGF-β、MMP-2、NOS、CD3含量比較 （n=6，ng∕L,±s）

組別正常對(duì)照組AE模型組醋酸潑尼松組無(wú)羈萜-3β-醇低濃度組無(wú)羈萜-3β-醇中濃度組無(wú)羈萜-3β-醇高濃度組F TGF-β 20.45±3.33 12.43±0.69a17.56±0.87ab14.32±0.74abc15.84±0.46abc16.75±0.56a bc38.865＊＊MMP-2 6.55±1.46 32.76±2.66a7.86±1.47ab25.65±4.88abc15.77±3.97abc11.87±1.77abc34.342＊＊組別正常對(duì)照組AE模型組醋酸潑尼松組無(wú)羈萜-3β-醇低濃度組無(wú)羈萜-3β-醇中濃度組無(wú)羈萜-3β-醇高濃度組F NOS 13.65±1.23 36.63±4.05a16.76±2.34ab34.57±4.68abc22.87±3.45abc16.67±1.97abc31.433＊CD312.54±1.29 36.42±5.45a14.44±1.76ab34.84±2.93abc25.74±2.67abc14.55±1.87abc33.643＊＊

3 討論

3.1 AE的常規(guī)藥物治療及缺點(diǎn) AE在兒童中的發(fā)病概率較高，患者常出現(xiàn)神經(jīng)功能進(jìn)行性障礙、肌肉無(wú)力、肢體癱瘓等癥狀。糖皮質(zhì)激素具有抑制免疫應(yīng)答、抗炎、抗病毒、抗休克作用，是目前治療AE的常用藥物[5]。但是，長(zhǎng)期使用腎上腺皮質(zhì)激素可引起皮質(zhì)功能亢進(jìn)、糖尿病、骨質(zhì)疏松、感染加重等不良反應(yīng)。因此，臨床上在使用糖皮質(zhì)激素緩沖治療的同時(shí)，往往聯(lián)合使用ATP、輔酶A、腺苷、胞二磷膽堿等藥物，以促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)。此外，少量多次輸注健康人新鮮血漿也有助于提高患者的免疫功能，有益于預(yù)防AE感染和恢復(fù)。

3.2 無(wú)羈萜-3β-醇的抗AE作用 有學(xué)者報(bào)道，無(wú)羈萜-3β-醇具有一定的抗氧化[2]、抗炎、抗免疫作用[3]，而AE是由CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的慢性變態(tài)反應(yīng)性疾病，因此，本研究選用醋酸潑尼松作對(duì)照藥物，醋酸潑尼松具有上調(diào)抗炎細(xì)胞因子以及抑制促炎細(xì)胞因子表達(dá)的作用。本研究顯示，100 mg∕（kg·d）無(wú)羈萜-3β-醇抑制AE的作用與2 mg∕（kg·d）醋酸潑尼松效果接近。

AE是由CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病[6]，阻斷或抑制CD4+T淋巴細(xì)胞能夠有效防治AE發(fā)生[7]。研究表明，在AE的緩解期CD4+∕CD8+比值呈明顯下降趨勢(shì)，CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞以及CD4+∕CD8+比值可作為AE發(fā)展?fàn)顟B(tài)及評(píng)定藥物療效的重要指標(biāo)[8]。本研究顯示，無(wú)羈萜-3β-醇抑制AE豚鼠外周血CD4+升高、CD8+降低、CD4+∕CD8+升高。

阿片受體β-EP在免疫應(yīng)答過(guò)程中起到免疫抑制的作用[9-10]。本研究結(jié)果顯示，無(wú)羈萜-3β-醇抑制外周血神經(jīng)遞質(zhì)NPY含量升高、β-EP含量降低。MMP-2直接攻擊血管基底膜，引起炎細(xì)胞浸潤(rùn)。CD3僅存在于T細(xì)胞表面，參與T細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。本研究結(jié)果顯示，無(wú)羈萜-3β-醇抑制豚鼠腦組織TGF-β降低和MMP-2、NOS、CD3升高。

此外，形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，AE豚鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡明顯，無(wú)羈萜-3β-醇明顯抑制神經(jīng)元凋亡現(xiàn)象。TGF-β對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和免疫功能都有重要的調(diào)節(jié)作用。

3.3 NO信號(hào)通路的影響 NOS參與調(diào)節(jié)NO生成，NO是先天性免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)性效應(yīng)分子，作為一種信息傳遞物質(zhì)維持正常的生理功能[11-13]。本研究通過(guò)免疫熒光發(fā)現(xiàn)，NOS在AE豚鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)熒光高表達(dá)，2 mg∕（kg·d）的醋酸潑尼松與100 mg∕（kg·d）-1的無(wú)羈萜-3β-醇明顯抑制AE豚鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)NOS熒光表達(dá)。因此，無(wú)羈萜-3β-醇有可能通過(guò)影響NO信號(hào)通路對(duì)AE產(chǎn)生作用，其具體的藥物作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

Fig.1 Light microscope image of guinea pig brain neurons圖1 豚鼠大腦神經(jīng)元光鏡圖像（HE×400）

Fig.2 Electron microscopy image of guinea pig brain neurons圖2 豚鼠大腦神經(jīng)元電鏡圖像（×12 000）

Fig.3 NOS expression in the neuronal cytoplasm圖3 免疫熒光顯微鏡下觀察NOS在神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)的表達(dá)（×400）

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（2014-01-29收稿 2014-05-21修回）

（本文編輯 李鵬）

Inhibition Effect of Non Custodial Terpenes-3 β-Alcohol to Autoimmune Encephalomyelitis

GUO Xixia1，YANG Jing2，HUANG Ning1，WAN Renling1，LI Zhaohui1，XU Gaowei1，YIN Yaling1△,LI Peng1
1 Xinxiang Medical University，Henan 453003，China；2 Puyang medical school，Henan△

E-mail:hnxxlp@163.com

ObjectiveTo study the inhibition effect of non custodial terpenes-3 β-alcohol to experimentally induced autoimmune encephalomyelitis in guinea pigs.MethodsDifferent doses(25 mg∕kg,50 mg∕kg and 100 mg∕kg)of non custodial terpenes-3 β-alcohol were given to the experimentally induced autoimmune encephalomyelitis model of guinea pigs by gavage for 8 weeks.Plasma levels of CD4+∕CD8+,IL-1,IL-2,IL-6,IL-10,neuropeptide Y(NPY),beta endorphin(β-EP),transforming growth factor-β(TGF-β),matrix metalloproteinase(MMP-2),nitric oxide synthase(NOS)and leukocyte differentiation antigen CD3were assessed.The brain neuron morphology changes was observed under light microscopy while its ultrastructure changes was observed under electron microscope.NOS expression in neurons was observed through immunofluoresce technology.ResultsNon custodialterpenes-3β-alcohol inhibited the increase of plasma CD4+∕CD8+,IL-1,IL-2,IL-6,IL-10,MMP-2,CD3and NPY while decrease of plasma β-EP,brain TGF-β.It also increase NOS expression in neuronal cytoplasm and maintained neuron morphology.ConclusionNon custodial terpenes-3 β-alcohol inhibited the experimental autoimmune encephalomyelitis in guinea pig.

encephalomyelitis,autoimmune,experimental；interleukins；receptors,cytokine；neuropeptide Y；transforming growth factor beta；matrix metalloproteinase 2；nitric oxide synthase；antigens,CD；neurons；non custodial terpenes-3 β-alcohol

R744.3

A

10.3969∕j.issn.0253-9896.2014.10.002

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81200836）；河南省科技廳科技攻關(guān)項(xiàng)目（132102310247）；新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院重點(diǎn)研究領(lǐng)域招標(biāo)課題（ZD2011-30）

1新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院（郵編453003）；2濮陽(yáng)市衛(wèi)生學(xué)校

△通訊作者 E-mail：hnxxlp@163.com