HPLC法測定炎寧膠囊中對香豆酸含量的分析

鄭玉梅+++劉鵬

摘 要：目的：研究炎寧膠囊中對香豆酸的含量測定方法。方法：用60%乙醇超聲提取，以Agilent XDB C18色譜柱為固定相，甲醇：0.3%磷酸=45∶55為流動相，檢測波長為308nm。結果：陰性樣品無干擾，方法專屬性良好；在0.59～11.8μg/ml范圍內(nèi)，對香豆酸的峰面積與進樣量有良好的線性關系，R2=0.9999；平均回收率為102.5%，RSD為0.22%；供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。結論：方法快速，簡便準確，可用于該制劑的穩(wěn)定性考察及成品質量控制。

關鍵詞：高效液相色譜法；炎寧膠囊；對香豆酸；含量測定

炎寧膠囊的主要成分有鹿茸草、白花蛇舌草、鴨跖草。其中鹿茸草用于咳嗽，吐血，赤痢，帶下，牙齦炎，乳腺炎，癤腫。白花蛇舌草清熱解毒、消痛散結、利尿除濕。尤善治療各種類型炎癥。鴨跖草清熱解毒，利水消腫。治水腫，腳氣，小便不利，感冒，丹毒，腮腺炎，黃疸肝炎，熱痢，瘧疾，鼻衄，尿血，血崩，白帶，咽喉腫痛，癰疽疔瘡。炎寧顆粒由以上三味藥精制而成，其中所含的對香豆酸是其主要的有效成分之一[1]。為了能更有效地控制其質量，文章采用高效液相色譜法建立了對香豆酸的含量測定方法。

1 儀器與試藥

儀器： Agilent 1200 Series 高效液相色譜儀；Agilent DAD檢測器， Agilent 化學工作站。

試藥：甲醇，色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

對香豆酸對照品（由上海永恒生物科技有限公司提供，供含量測定用）。

2 測定波長的選擇

對對香豆酸進行紫外波長掃描，結果在308nm處有最大吸收波長，在此吸收波長下，對對香豆酸進行含量測定。對香豆酸的紫外掃描圖見圖1。

圖1 對香豆酸UV光譜圖

3 色譜條件

色譜柱：Agilent XDB C18色譜柱（5？滋m，250×4.6mm），檢測波長308nm，流動相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55，流速0.8ml/min。在此條件下，樣品能得到較好的分離，理論板數(shù)按對香豆酸計算均不得低于3000。見圖2（a）是樣品液相色譜圖， （b）是對照品溶液液相色譜圖。

4 對照品溶液制備

精密稱取五氧化二磷減壓干燥至恒重的對香豆酸標準品11.8mg，加甲醇使溶解，并定容至25mL，精密移取上述溶液2.5mL加甲醇稀釋至100mL，搖勻，即得。作為對照品貯備液。

5 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加60%乙醇超聲（40kHz，30℃）10min溶解，放置至室溫后定容，如有泡沫，滴加少量甲醇使泡沫消失，搖勻，過0.45？滋m微孔濾膜，即得。

6 線性關系考察

精密吸取對照品貯備液0.5、2、4、6、8、10ml分別置10ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，即得對香豆酸標準系列溶液。分別進樣10？滋l，按上述色譜條件測定對香豆酸峰面積。以峰面積為縱坐標，木犀草素進樣濃度為橫坐標，繪制標準曲線。結果見表1。

表1 標準曲線測定結果

線性回歸方程：y=101.15x-5.5434 R2=0.9999，在0.59～11.8μg/ml范圍之內(nèi)呈良好的線性關系。

圖3 對香豆酸標準曲線

7 精密度

取批號為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件進樣（相同體積重復進樣6次），對香豆酸峰面積的相對標準偏差為%。結果見表2。

表2 精密度試驗結果

8 穩(wěn)定性

精密稱取批號為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件分別在間隔0小時、1小時、2小時、4小時、8小時、24小時后進樣測定。對香豆酸峰面積的相對標準偏差為0.12%，結果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗結果

由此可見，供試品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

9 重現(xiàn)性

精密稱取同一批號20100101樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，依上述色譜條件進樣，測定對香豆酸的峰面積。其平均值為0.290mg/g，相對標準偏差為0.47%。結果見表4。

表4 重現(xiàn)性試驗結果

10 回收率

精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入對香豆酸對照品適量，按供試品溶液制備方法制備，并按上述條件測定對香豆酸的含量，計算回收率，結果平均回收率為102.5%，RSD為0.22%。結果見表5。

表5 回收率試驗結果

11 樣品測定

按文章所述方法對三批樣品進行含量測定，結果見表6。

12 結束語

在試驗過程中，曾采用乙腈-水（45：55）、甲醇-0.1%冰醋酸（85：15）等多種流動相，結果色譜峰分離效果均不理想而未被采用。文中選用的流動相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55分離效果較好。實驗中還考察了不同柱溫（10、20、30、40℃）對色譜分離效果的影響，結果各柱溫對分離效果無明顯區(qū)別、保留時間的影響有明顯區(qū)別。因此確定室溫即可。

本課題采用高效液相色譜法測定炎寧膠囊中主要藥效成分對香豆酸的含量，具有操作簡便，結果準確可靠，重現(xiàn)性好的優(yōu)點。

參考文獻

[1]張才華，郭興杰，薛秀峰，等.HPLC測定白花蛇舌草注射液中對香豆酸的含量[M].中國藥學雜志，2004.endprint

摘 要：目的：研究炎寧膠囊中對香豆酸的含量測定方法。方法：用60%乙醇超聲提取，以Agilent XDB C18色譜柱為固定相，甲醇：0.3%磷酸=45∶55為流動相，檢測波長為308nm。結果：陰性樣品無干擾，方法專屬性良好；在0.59～11.8μg/ml范圍內(nèi)，對香豆酸的峰面積與進樣量有良好的線性關系，R2=0.9999；平均回收率為102.5%，RSD為0.22%；供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。結論：方法快速，簡便準確，可用于該制劑的穩(wěn)定性考察及成品質量控制。

關鍵詞：高效液相色譜法；炎寧膠囊；對香豆酸；含量測定

炎寧膠囊的主要成分有鹿茸草、白花蛇舌草、鴨跖草。其中鹿茸草用于咳嗽，吐血，赤痢，帶下，牙齦炎，乳腺炎，癤腫。白花蛇舌草清熱解毒、消痛散結、利尿除濕。尤善治療各種類型炎癥。鴨跖草清熱解毒，利水消腫。治水腫，腳氣，小便不利，感冒，丹毒，腮腺炎，黃疸肝炎，熱痢，瘧疾，鼻衄，尿血，血崩，白帶，咽喉腫痛，癰疽疔瘡。炎寧顆粒由以上三味藥精制而成，其中所含的對香豆酸是其主要的有效成分之一[1]。為了能更有效地控制其質量，文章采用高效液相色譜法建立了對香豆酸的含量測定方法。

1 儀器與試藥

儀器： Agilent 1200 Series 高效液相色譜儀；Agilent DAD檢測器， Agilent 化學工作站。

試藥：甲醇，色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

對香豆酸對照品（由上海永恒生物科技有限公司提供，供含量測定用）。

2 測定波長的選擇

對對香豆酸進行紫外波長掃描，結果在308nm處有最大吸收波長，在此吸收波長下，對對香豆酸進行含量測定。對香豆酸的紫外掃描圖見圖1。

圖1 對香豆酸UV光譜圖

3 色譜條件

色譜柱：Agilent XDB C18色譜柱（5？滋m，250×4.6mm），檢測波長308nm，流動相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55，流速0.8ml/min。在此條件下，樣品能得到較好的分離，理論板數(shù)按對香豆酸計算均不得低于3000。見圖2（a）是樣品液相色譜圖， （b）是對照品溶液液相色譜圖。

4 對照品溶液制備

精密稱取五氧化二磷減壓干燥至恒重的對香豆酸標準品11.8mg，加甲醇使溶解，并定容至25mL，精密移取上述溶液2.5mL加甲醇稀釋至100mL，搖勻，即得。作為對照品貯備液。

5 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加60%乙醇超聲（40kHz，30℃）10min溶解，放置至室溫后定容，如有泡沫，滴加少量甲醇使泡沫消失，搖勻，過0.45？滋m微孔濾膜，即得。

6 線性關系考察

精密吸取對照品貯備液0.5、2、4、6、8、10ml分別置10ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，即得對香豆酸標準系列溶液。分別進樣10？滋l，按上述色譜條件測定對香豆酸峰面積。以峰面積為縱坐標，木犀草素進樣濃度為橫坐標，繪制標準曲線。結果見表1。

表1 標準曲線測定結果

線性回歸方程：y=101.15x-5.5434 R2=0.9999，在0.59～11.8μg/ml范圍之內(nèi)呈良好的線性關系。

圖3 對香豆酸標準曲線

7 精密度

取批號為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件進樣（相同體積重復進樣6次），對香豆酸峰面積的相對標準偏差為%。結果見表2。

表2 精密度試驗結果

8 穩(wěn)定性

精密稱取批號為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件分別在間隔0小時、1小時、2小時、4小時、8小時、24小時后進樣測定。對香豆酸峰面積的相對標準偏差為0.12%，結果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗結果

由此可見，供試品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

9 重現(xiàn)性

精密稱取同一批號20100101樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，依上述色譜條件進樣，測定對香豆酸的峰面積。其平均值為0.290mg/g，相對標準偏差為0.47%。結果見表4。

表4 重現(xiàn)性試驗結果

10 回收率

精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入對香豆酸對照品適量，按供試品溶液制備方法制備，并按上述條件測定對香豆酸的含量，計算回收率，結果平均回收率為102.5%，RSD為0.22%。結果見表5。

表5 回收率試驗結果

11 樣品測定

按文章所述方法對三批樣品進行含量測定，結果見表6。

12 結束語

在試驗過程中，曾采用乙腈-水（45：55）、甲醇-0.1%冰醋酸（85：15）等多種流動相，結果色譜峰分離效果均不理想而未被采用。文中選用的流動相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55分離效果較好。實驗中還考察了不同柱溫（10、20、30、40℃）對色譜分離效果的影響，結果各柱溫對分離效果無明顯區(qū)別、保留時間的影響有明顯區(qū)別。因此確定室溫即可。

本課題采用高效液相色譜法測定炎寧膠囊中主要藥效成分對香豆酸的含量，具有操作簡便，結果準確可靠，重現(xiàn)性好的優(yōu)點。

參考文獻

[1]張才華，郭興杰，薛秀峰，等.HPLC測定白花蛇舌草注射液中對香豆酸的含量[M].中國藥學雜志，2004.endprint

摘 要：目的：研究炎寧膠囊中對香豆酸的含量測定方法。方法：用60%乙醇超聲提取，以Agilent XDB C18色譜柱為固定相，甲醇：0.3%磷酸=45∶55為流動相，檢測波長為308nm。結果：陰性樣品無干擾，方法專屬性良好；在0.59～11.8μg/ml范圍內(nèi)，對香豆酸的峰面積與進樣量有良好的線性關系，R2=0.9999；平均回收率為102.5%，RSD為0.22%；供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。結論：方法快速，簡便準確，可用于該制劑的穩(wěn)定性考察及成品質量控制。

關鍵詞：高效液相色譜法；炎寧膠囊；對香豆酸；含量測定

炎寧膠囊的主要成分有鹿茸草、白花蛇舌草、鴨跖草。其中鹿茸草用于咳嗽，吐血，赤痢，帶下，牙齦炎，乳腺炎，癤腫。白花蛇舌草清熱解毒、消痛散結、利尿除濕。尤善治療各種類型炎癥。鴨跖草清熱解毒，利水消腫。治水腫，腳氣，小便不利，感冒，丹毒，腮腺炎，黃疸肝炎，熱痢，瘧疾，鼻衄，尿血，血崩，白帶，咽喉腫痛，癰疽疔瘡。炎寧顆粒由以上三味藥精制而成，其中所含的對香豆酸是其主要的有效成分之一[1]。為了能更有效地控制其質量，文章采用高效液相色譜法建立了對香豆酸的含量測定方法。

1 儀器與試藥

儀器： Agilent 1200 Series 高效液相色譜儀；Agilent DAD檢測器， Agilent 化學工作站。

試藥：甲醇，色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

對香豆酸對照品（由上海永恒生物科技有限公司提供，供含量測定用）。

2 測定波長的選擇

對對香豆酸進行紫外波長掃描，結果在308nm處有最大吸收波長，在此吸收波長下，對對香豆酸進行含量測定。對香豆酸的紫外掃描圖見圖1。

圖1 對香豆酸UV光譜圖

3 色譜條件

色譜柱：Agilent XDB C18色譜柱（5？滋m，250×4.6mm），檢測波長308nm，流動相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55，流速0.8ml/min。在此條件下，樣品能得到較好的分離，理論板數(shù)按對香豆酸計算均不得低于3000。見圖2（a）是樣品液相色譜圖， （b）是對照品溶液液相色譜圖。

4 對照品溶液制備

精密稱取五氧化二磷減壓干燥至恒重的對香豆酸標準品11.8mg，加甲醇使溶解，并定容至25mL，精密移取上述溶液2.5mL加甲醇稀釋至100mL，搖勻，即得。作為對照品貯備液。

5 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加60%乙醇超聲（40kHz，30℃）10min溶解，放置至室溫后定容，如有泡沫，滴加少量甲醇使泡沫消失，搖勻，過0.45？滋m微孔濾膜，即得。

6 線性關系考察

精密吸取對照品貯備液0.5、2、4、6、8、10ml分別置10ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，即得對香豆酸標準系列溶液。分別進樣10？滋l，按上述色譜條件測定對香豆酸峰面積。以峰面積為縱坐標，木犀草素進樣濃度為橫坐標，繪制標準曲線。結果見表1。

表1 標準曲線測定結果

線性回歸方程：y=101.15x-5.5434 R2=0.9999，在0.59～11.8μg/ml范圍之內(nèi)呈良好的線性關系。

圖3 對香豆酸標準曲線

7 精密度

取批號為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件進樣（相同體積重復進樣6次），對香豆酸峰面積的相對標準偏差為%。結果見表2。

表2 精密度試驗結果

8 穩(wěn)定性

精密稱取批號為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件分別在間隔0小時、1小時、2小時、4小時、8小時、24小時后進樣測定。對香豆酸峰面積的相對標準偏差為0.12%，結果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗結果

由此可見，供試品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

9 重現(xiàn)性

精密稱取同一批號20100101樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，依上述色譜條件進樣，測定對香豆酸的峰面積。其平均值為0.290mg/g，相對標準偏差為0.47%。結果見表4。

表4 重現(xiàn)性試驗結果

10 回收率

精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入對香豆酸對照品適量，按供試品溶液制備方法制備，并按上述條件測定對香豆酸的含量，計算回收率，結果平均回收率為102.5%，RSD為0.22%。結果見表5。

表5 回收率試驗結果

11 樣品測定

按文章所述方法對三批樣品進行含量測定，結果見表6。

12 結束語

在試驗過程中，曾采用乙腈-水（45：55）、甲醇-0.1%冰醋酸（85：15）等多種流動相，結果色譜峰分離效果均不理想而未被采用。文中選用的流動相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55分離效果較好。實驗中還考察了不同柱溫（10、20、30、40℃）對色譜分離效果的影響，結果各柱溫對分離效果無明顯區(qū)別、保留時間的影響有明顯區(qū)別。因此確定室溫即可。

本課題采用高效液相色譜法測定炎寧膠囊中主要藥效成分對香豆酸的含量，具有操作簡便，結果準確可靠，重現(xiàn)性好的優(yōu)點。

參考文獻

[1]張才華，郭興杰，薛秀峰，等.HPLC測定白花蛇舌草注射液中對香豆酸的含量[M].中國藥學雜志，2004.endprint