蘇平菊 陳紅燕 安青松 王娟敏

高效液相色譜法測定連花清瘟膠囊中連翹酯苷A的含量

蘇平菊 陳紅燕 安青松 王娟敏

目的 建立采用高效液相色譜法測定連花清瘟膠囊中連翹酯苷A含量的方法。方法 采用C18 色譜柱 , 乙腈 -0.1% 磷酸溶液為流動(dòng)相梯度洗脫 , 檢測波長 228 nm。結(jié)果 連翹酯苷 A 在 18.6～186 ng 濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。連翹酯苷 A 平均回收率為 99.16%(n=6), RSD=1.58%。結(jié)論 該法操作簡便準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng) , 可作為連花清瘟膠囊的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法 ；連花清瘟膠囊醇提浸膏 ；連翹酯苷A ；含量測定

連花清瘟膠囊由金銀花、連翹、石膏等 13 味藥組成［1］。清瘟解毒 , 宣肺泄熱。本品種收載于《中國藥典》(2010 年版第二增補(bǔ)本 ), 連翹酯苷 A 為處方中連翹的主要成分之一 ,因此采用高效液相色譜法對(duì)本品連翹酯苷A的含量測定進(jìn)行了研究［2］。

1 儀器與試藥

1. 1 儀器 高效液相色譜儀 (Waters 2695)。

1. 2 試藥 連翹酯苷 A 對(duì)照品 (購自中國藥品生物制品檢定所 ), 乙腈為色譜純 , 其它試驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2. 1 色譜條件 色譜柱 ：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料 ；流動(dòng)相乙腈 -0.1%磷酸梯度洗脫 ；流速 0.4 ml/min；檢測波長 228 nm；理論塔板數(shù)按連翹酯苷 A峰計(jì)算應(yīng)不低于 3000。

2. 2 供試品溶液制備 取供試品 (批號(hào) 120406), 約 0.5 g, 精密稱定 , 置具塞錐形瓶中 , 精密加入甲醇 25 ml, 密塞 , 稱重 ,超聲外理 30 min, 取出 , 放冷 , 再稱定重量 , 用甲醇補(bǔ)足減失的重量 , 搖勻 , 濾過 , 即得。

2. 3 對(duì) 照 品 溶 液 的 制 備 精 密 稱 取 連 翹 酯 苷 A對(duì) 照 品23.25 mg, 置 25 ml量瓶中 , 加甲醇溶解 , 并定容至刻度 , 搖勻 ,即得。再精密吸取上述對(duì)照品溶液 2 ml, 置 25 ml量瓶中 , 加甲醇稀釋至刻度 , 搖勻 , 即得。濃度 ：74.4 μg/ml。

2. 4 陰性試驗(yàn) 按處方比例稱取除連翹外的其它方中藥材 ,按制備工藝制得陰性樣品 , 按供試品溶液的方法進(jìn)行處理 ,得陰性供試品溶液。分別吸取陰性供試品溶液、對(duì)照品溶液及供試品溶液 , 按照選定測定條件進(jìn)行檢測 , 結(jié)果表明 ：在連翹酯苷 A相應(yīng)的保留時(shí)間 , 陰性樣品無相應(yīng)波峰出現(xiàn)。

2. 5 線性范圍考察 精密吸取濃度為 186 μg/ml的對(duì)照品溶 液 0.1、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0 μl注 入 液 相 色 譜 儀 , 測定峰面積見表1。以峰面積積分值為縱坐標(biāo) , 進(jìn)樣量為橫坐標(biāo) , 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明 ：連翹酯苷 A濃度在 18.6~186 ng范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系 , 回歸方程為 ：Y=2301.7X-257.33, r=0.9997。見表1。

表1 線性考察結(jié)果

2. 6 進(jìn)樣精密度考察 吸取對(duì)照品溶液 , 連續(xù)進(jìn)樣 5次 ,連翹酯苷 A對(duì)照品 5次測定的 RSD為 0.25%, 說明儀器性能良好。

2 .7 供試品溶液穩(wěn)定性考察 精密吸取供試品溶液 , 每隔一定時(shí)間進(jìn)樣 , 考察了 16 h 內(nèi)的穩(wěn)定性 , 結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從以上結(jié)果可見 , 供試品峰面積 RSD 值 0.39%,表明在測定的 16 h 內(nèi) , 供試品穩(wěn)定。

2. 8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品 (批號(hào) 120406), 按高、中、低劑量取樣 , 每個(gè)劑量取 3 份 , 按供試品含量測定項(xiàng)下方法 ,進(jìn)行提取 , 制備 , 測定結(jié)果 , 連翹酯苷 A的平均含量 2.3660 mg/g, RSD 為 0.995%。表明方法重現(xiàn)性良好。

2. 9 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收試驗(yàn) , 取同一批供試品 (批號(hào) 120406)6 份 , 加入連翹酯苷 A 對(duì)照品溶液 , 按供試品含量測定項(xiàng)下方法 , 進(jìn)行提取 , 制備 , 測定 , 計(jì)算回收率。連翹酯苷 A 的平均回收率為 99.16%(n=6), RSD 為 1.56%, 結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2. 10 樣品含量測定 按上述方法測定 3 批樣品含量 , 結(jié)果

見表4。

表4 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)含量測定中供試品溶液的制備方法進(jìn)行了研究。

3. 1 提取溶媒選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 , 50%甲醇、75%甲醇和甲醇對(duì)連翹酯苷 A的提取含量影響不大 , 但 50%甲醇過濾較困難 , 以甲醇為提取溶媒時(shí)雜質(zhì)峰較 75% 甲醇小 , 為更好地保護(hù)色譜柱 , 因此選擇甲醇為提取溶媒。

3. 2 超聲提取時(shí)間考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 , 超聲提取 15、30和45 min對(duì)連翹酯苷 A的含量影響不大 , 但為保證充分提取 ,選定超聲提取時(shí)間為 30 min。

［1］國家藥典委員會(huì) . 中國藥典 (一部 ). 北京 :中國醫(yī)藥科技出版社 , 2010:159-160.

［2］國家藥典委員會(huì) . 中國藥典 (第二增補(bǔ)本 ).北京 :中國醫(yī)藥科技出版社 , 2013:35-36.

2014-04-14］

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