陳楊 張承馨

·實(shí)驗(yàn)研究·

丹參酮II A影響大鼠急性脊髓損傷HSP70神經(jīng)元的表達(dá)

陳楊 張承馨

目的 通過對Wistar大鼠給予尾靜脈注射丹參酮ⅡA, 影響大鼠急性脊髓損傷熱休克蛋白質(zhì)70(HSP70)神經(jīng)元水平的表達(dá)。方法 采用Allen’s打擊法建立急性脊髓損傷(ASCI模型), 觀察丹參酮ⅡA組(STS組)、甲基強(qiáng)的松龍組(MP組)、安慰劑對照組(NS組)、不給藥對照組(NO組), 觀察在傷后1、2、4、8 h時(shí)間點(diǎn)HSP70陽性表達(dá)。結(jié)果 四組HSP70在ASCI后組織中顯著存在, 且各組HSP70表達(dá)趨勢隨著各個(gè)時(shí)段上升呈上升趨勢。①急性脊髓損傷大鼠不做任何處理或給予生理鹽水的情況下, HSP70表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②當(dāng)注射丹參酮ⅡA或甲基強(qiáng)的松龍時(shí), 脊髓組織中HSP70表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。組間比采取t檢驗(yàn), 其結(jié)果顯示：①給脊髓損傷模型注射生理鹽水和不給藥時(shí), 對脊髓組織中HSP70表達(dá)是一致的(P＞0.05)。②給強(qiáng)的松龍治療脊髓損傷作用優(yōu)于丹參酮ⅡA注射液(P＜0.05)。結(jié)論 ①急性脊髓損傷過程中神經(jīng)元受到損傷致使HSP70表達(dá)增高是產(chǎn)生應(yīng)激性保護(hù)的一種標(biāo)志, 該標(biāo)志在HSP 70表達(dá)中對受損神經(jīng)元起到保護(hù)作用, 也使得HSP70在ASCI后表達(dá)增強(qiáng)。②脊髓損傷后各組的HSP70表達(dá)均呈增加趨勢。STS組和MP組HSP70隨時(shí)段上升陽性神經(jīng)元細(xì)胞表達(dá)上升, 亦呈連續(xù)性, STS組數(shù)值雖低于MP組數(shù)值, 但具有可比性。所以二者在急性脊髓損傷后HSP70陽性神經(jīng)元表達(dá)層面上具有相同作用。

急性脊髓損傷；丹參酮ⅡA；熱休克蛋白70

在社會(huì)現(xiàn)代化進(jìn)程中, 人們從事多種生產(chǎn)性活動(dòng), 進(jìn)而發(fā)生脊髓損傷的幾率大大增加。目前臨床上治療脊髓損傷有以下幾種藥物：甲基強(qiáng)的松龍、神經(jīng)節(jié)苷脂、三七總皂苷、人參皂苷、胰島素等藥物, 這些藥物存在著學(xué)術(shù)上爭議、價(jià)格偏貴等因素, 而患者來源主要是從事交通運(yùn)輸、建筑等職業(yè)人群。從中藥丹參中提取丹參酮ⅡA作為替代藥物為患者提供一種較為低廉的藥物供使用。

1 材料與方法

1.1材料 Wistar大鼠160只(體重220~250 g, 雌雄不限)由貴陽醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。鼠抗HSP70試劑盒與SP免疫組化試劑盒購自沈陽達(dá)克制藥有限公司。

1.2方法 將160只大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組, 一共分為四組, 每組40只, 具體分組如下： STS組(簡稱STS組)； 甲基MP組(簡稱MP組)；安慰劑對照組(簡稱NS組)；不給藥對照組(簡稱NO組)。① STS組：在造模前30 min, 找到大鼠的尾靜脈, 注射丹參酮ⅡA注射液, (按0.5 g/kg的比例)進(jìn)行給藥。②MP組：在造模前30 min, 找到大鼠的尾靜脈, 注射甲基強(qiáng)的松龍注射液, (按30 mg/kg的比例)進(jìn)行給藥。③NS對照組：在造模前30 min, 找到大鼠的尾靜脈, 注射0.9%的生理鹽水, (按30 mg/kg的比例)進(jìn)行給藥。④NO對照組：不作任何注藥, 直接造模。在T11與T12、T12與T13棘突及相應(yīng)椎板之間用骨剪做剪除, 形成橫行剪口, 再在T12胸椎兩側(cè), 用骨剪行縱行切口在橫突與椎板連接處, 形成口字形的剪口界線, 然后用血管鉗夾住T12棘突并用力拉起即“開窗揭蓋”,去除T12椎板, 用咬骨鉗修整方行骨窗邊緣, 使T12所對應(yīng)的脊髓充分暴露。用專用撐開器撐開脊髓兩側(cè)軟組織暴露脊髓,用Allen’s打擊法制作脊髓損傷動(dòng)物模型, 使脊柱椎體穩(wěn)定,避免呼吸運(yùn)動(dòng)的影響, 在3 cm高度使擊打棍(20 g)做自由落體運(yùn)動(dòng), 致傷能量60 g·cm, 撞擊T12墊片及骨窗內(nèi)所暴露的脊髓, 造成急性脊髓損傷, 穩(wěn)住擊打棍并停留3 min再移開。Allen’s打擊法造模標(biāo)準(zhǔn)：硬脊膜完整呈紫紅色, 緊張, 膨隆,脊髓組織水腫、出血, 大鼠尾巴表現(xiàn)為痙攣性擺動(dòng), 雙下肢軀體回縮樣撲動(dòng), 呈遲緩性癱瘓［1］。在造模后1、2、4、8 h, 從每組中分別隨機(jī)抽取10只模型鼠, 取得T12全段受損脊髓組織并分為三部分, 大鼠脊髓組織放入含30%蔗糖的PB內(nèi)4℃至沉底。恒溫冷凍箱進(jìn)行冷凍后切片機(jī)(美國AO產(chǎn))作連續(xù)冠狀冰凍切片, 片厚40 μm, 收集于0.01 mol/L磷酸鹽緩沖生理鹽水內(nèi)(PBS, pH值7.4, 下同)。進(jìn)行抗HSP70免疫組織化學(xué)可溶性復(fù)合物(Avidin-biotin-HRP complex, ABC)ABC反應(yīng)。并進(jìn)行以下各步：經(jīng)磷酸鹽緩沖生理鹽水進(jìn)行充分漂洗, 0.3%H2O2甲醇溶液室溫30 min, 含0.1%TritonX-100的正常羊血清(1：50)30 min, 入鼠抗HSP70(1：1500)4℃48 h, 生物素化羊抗鼠IgG(1：200)室溫3 h, ABC液(1：200)室溫3 h, DAB呈色。上述各步后均用PBS液充分漂洗3×10 min, 常規(guī)貼片、干燥、透明、封片。切片觀察與記數(shù)和處理數(shù)據(jù),三部分T12受損脊髓組織分別制作切片3張, 共9張進(jìn)行記數(shù)。在10×10光鏡下, 采用武昌光學(xué)儀器廠C5型0.5網(wǎng)形目測鏡尺(劃刻面積為5 mm×5 mm), 任一測點(diǎn)外上角和測線(橫線)交叉的陽性神經(jīng)元HSP70陽性神經(jīng)元(核著色均勻、深染、邊界清晰)作為計(jì)數(shù)終值, 單位為個(gè)/目測視野。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有資料均采用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t檢驗(yàn), P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1HE染色 ASCI后注射NS組和NO組光鏡下見脊髓組織水腫、出血, 出血主要位于灰質(zhì)及灰質(zhì)與白質(zhì)交界處,灰白質(zhì)交界清楚, 神經(jīng)元腫脹、輪廓不清、破裂、溶解,胞質(zhì)尼氏體邊聚, 有噬神經(jīng)現(xiàn)象(neuronophagia), 見圖1；ASCI后注射MP組鏡下見脊髓組織水腫、出血較NS組明顯減輕, 見圖2。

2.2光鏡下觀察脊髓損傷模型脊髓HSP70 陽性神經(jīng)元HSP70的細(xì)胞在顯微鏡下是棕色的, 是一個(gè)圓形、橢圓形或三角形, 突起明顯, 背景淺棕色。NO組和NS組HSP70呈散在分布的低水平表達(dá)；STS組和MP組HSP70則表達(dá)顯著增強(qiáng), 多數(shù)色澤均勻, 邊界清楚, 數(shù)目明顯高于NO組和NS組。各組前角陽性神經(jīng)元HSP70差異明顯且分布集中, 選擇前角作為計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)部位, 而HSP70后角分布少量, 中央管區(qū)域周圍分布更少, 見圖2。

圖1 傷后8 h STS組大鼠脊髓損傷HE×200

圖2 傷后8 h MP組大鼠脊髓損傷HE×200

2.3NO組、NS組、MP組、STS組傷后1、2、4、8 h免疫組化HSP70表達(dá) NO組分別見圖A、B、C、D；NS組分別見圖E、F、G、H；MP組分別見圖I、J、K、L；STS組分別見圖M、N、O、P。

A NO組傷后1 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

B NO組傷后2 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

C NO組傷后4 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

D NO組傷后8 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

E NS組傷后1 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

F NS組傷后2 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

G NS組傷后4 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

H NS組傷后8 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

I MP組傷后1 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

M STS組傷后1 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

J MP組傷后2 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

N STS組傷后2 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

K MP組傷后4 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

O STS組傷后4 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

L MP組傷后8 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

P STS組傷后8 h免疫組化HSP70表達(dá)SP×400

2.4HSP70分布密度變化進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析

2.4.1各組進(jìn)行組內(nèi)比較 ①將NO組進(jìn)行單因素的方差分析：Levene 統(tǒng)計(jì)量=2.017, P=0.129>0.05, 滿足方差齊性。則F=0.084, P=0.968>0.05。急性脊髓損傷大鼠不做任何處理的情況下, 在造模后1、2、4、8 h脊髓組織中HSP70隨著時(shí)間推移其表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②將NS組進(jìn)行組內(nèi)比較, 采取單因素的方差分析, Levene 統(tǒng)計(jì)量=1.989, P=0.133>0.05, 滿足方差齊性。則F=0.183, P=0.907>0.05, 說明急性脊髓損傷模型大鼠在運(yùn)用生理鹽水的情況下, 在造模后1、2、4、8 h脊髓組織中HSP70差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。③將STS組進(jìn)行組內(nèi)比較, 采取單因素方差分析, Levene統(tǒng)計(jì)量=0.583, P=0.63>0.05, 滿足方差齊性條件。F=4.179, P=0.012<0.05, 急性脊髓損傷模型大鼠在注射丹參酮ⅡA情況下, 在造模后1、2、4、8 h脊髓組織中HSP70表達(dá)在不同時(shí)段中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。④將MP組進(jìn)行組內(nèi)比較,采取單因素方差分析, Levene 統(tǒng)計(jì)量=0.687, P=0.566>0.05,滿足方差齊性。F=10.841, P=0.000<0.01, 急性脊髓損傷模型大鼠在注射強(qiáng)的松龍情況下, 在造模后1、2、4、8 h脊髓組織中HSP70表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.4.2各組對8 h時(shí)脊髓組織中HSP70進(jìn)行組間比較①對NS組和NO組運(yùn)用單樣本的t檢驗(yàn), 結(jié)果顯示：F=0.006, P=0.937>0.05, 滿足方差齊性。則t檢驗(yàn)顯示：P=0.074>0.05。提示：NS組與NO組對脊髓組織中HSP70表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②STS組與NO組進(jìn)行組間運(yùn)用單樣本的t檢驗(yàn), 結(jié)果顯示：F=0.080, P=0.781>0.05, 滿足方差齊性。則t檢驗(yàn)顯示：P=0.003<0.01。可以判斷兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 提示：STS組對脊髓組織中HSP70表達(dá)作用優(yōu)于NO組。③對STS組和NS組運(yùn)用單樣本的t檢驗(yàn), 結(jié)果顯示：F=0.498, P=0.490>0.05, 滿足方差齊性。則t檢驗(yàn)顯示：P=0.022<0.05。可以判斷兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示：STS組對脊髓組織中HSP70表達(dá)作用優(yōu)于NS組。④對MP組和NO組運(yùn)用單樣本的t檢驗(yàn), 結(jié)果顯示：F=2.15, P=0.16>0.05, 滿足方差齊性。則t檢驗(yàn)顯示：P=0.000<0.01, 可以判斷兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01), 提示：MP組對脊髓組織中HSP70表達(dá)作用優(yōu)于NO組。⑤對MP組和NS組運(yùn)用單樣本的t檢驗(yàn), 結(jié)果顯示：F=3.643, P=0.072>0.05, 滿足方差齊性。則t檢驗(yàn)顯示：P=0.000<0.01, 可以判斷兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01), 提示：MP組對脊髓組織中HSP70表達(dá)作用優(yōu)于NS組。⑥對STS組和MP組運(yùn)用單樣本的t檢驗(yàn), 結(jié)果顯示：F=1.219, P=0.284>0.05, 滿足方差齊性。則t檢驗(yàn)顯示：P=0.033<0.05, 可以判斷兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),提示強(qiáng)的松龍對脊髓組織中HSP70表達(dá)作用優(yōu)于丹參酮ⅡA。HSP70在各組的分布密度比較, 見表1。

表1 HSP70在各組的分布密度比較

表1 HSP70在各組的分布密度比較

注：STS組表示丹參酮ⅡA組, MP組表示強(qiáng)的松龍組, NO組表示不給藥組, NS組表示生理鹽水組。組內(nèi)比較：STS組：P<0.05, MP組：P<0.01, NS組：P>0.05, NO組：P>0.05；組間比較：NS組與NO組比較, P>0.05；STS組與NO組比較, P<0.01；STS組與NS組比較, P<0.05；MP組與NO組比較, P<0.01; MP組與NS組比較, P<0.01；STS組和MP組比較, P<0.05

組別只數(shù)1 h2 h4 h8 h STS組408.097±2.5958.031±1.9668.145±2.3129.66±1.369 MP組407.421±4.4058.552±1.2639.171±4.74811.34±1.840 NS組408.328±1.7078.452±2.6828.595±1.9958.624±1.063 NO組407.312±2.4187.332±1.6047.437±1.8747.677±1.166

3 討論

熱休克蛋白(HeatShockProtein, HSP)廣泛存在于各種生物體中, 是一簇進(jìn)化上十分保守的蛋白質(zhì), 介入誘導(dǎo)蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)位、折疊、裝配等過程, 但這種蛋白質(zhì)不能成為新合成蛋白質(zhì)的組成部分, 這種功能稱為“分子伴侶”(molecularchaperones)。人類以70KD的一組HSP為主,因而被稱為HSP70。在受熱、缺血、缺氧、病毒感染、機(jī)械性損傷后產(chǎn)生一種應(yīng)激性具有保護(hù)性蛋白。本實(shí)驗(yàn)對機(jī)械性脊髓損傷中HSP70的作用進(jìn)行了研究, 發(fā)現(xiàn)損傷后該蛋白隨時(shí)段的上升而表達(dá)增加。研究表明［2］HSP70的表達(dá)可以作為預(yù)示受損神經(jīng)元能否存活的一個(gè)標(biāo)志。大多數(shù)人認(rèn)為在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的研究中檢測HSP70的表達(dá)可以作為評(píng)價(jià)某種預(yù)防或治療方法對中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷是否有效以及判別神經(jīng)元是否受到損傷的早期方法［3,4］。

丹參酮ⅡA－磺酸鈉( sodium tanshinone ⅡA sulFonate, STS)是一種唇型科目類別中藥丹參經(jīng)磺化分離而得的一種水溶性物質(zhì), 化學(xué)主要成分有隱丹參酮、丹參酮ⅡA、丹參酮甲酯、異丹參酮、羥基丹參酮ⅡA以及丹參新酮等［5］。

脊髓在缺血及缺血再灌注過程中發(fā)生了比較明顯的脂質(zhì)過氧化反應(yīng), 再灌注后脂質(zhì)過氧化反應(yīng)將進(jìn)一步加重。相關(guān)研究表明：丹參酮可改善能量代謝并且清除氧自由基、調(diào)節(jié)局部離子環(huán)境通過活血化瘀作用［6］。STS對于抑制血小板聚集、降低血液黏度有較大的影響［7］。抗血小板聚集、抑制血栓形成作用明顯, 其中抗血小板聚集作用較抗凝血作用更加明顯。此外, STS能減輕腦缺血組織的炎癥反應(yīng)并顯著降低腦缺血-再灌注后的血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)［8］。相關(guān)研究證明：丹參酮具有促進(jìn)大鼠腦缺血后神經(jīng)干細(xì)胞增殖作用［9］。丹參酮通過減少HIF21ɑ的表達(dá)改善脊髓缺血再灌注損傷的局部組織微循環(huán), 促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá),對脊髓缺血再灌注損傷起到積極的防治作用［10］。林翔等［11］運(yùn)用丹參酮治療脊髓缺血型再灌注損傷大鼠模型脊髓、血清谷氨酸含量的影響, 結(jié)果顯示丹參酮能降低脊髓缺血再灌注損傷大鼠脊髓谷氨酸含量, 對大鼠脊髓缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。

總結(jié)丹參酮ⅡA具有以下作用：①天然抗氧化作用。②抗菌抗炎作用。③抗凝抗血小板作用。④促進(jìn)受損組織微循環(huán)。MP與丹參酮ⅡA在理論上對急性脊髓損傷具有相同作用, 丹參酮ⅡA在治療脊髓缺血再灌注損傷也有相關(guān)報(bào)道,但目前國內(nèi)外對丹參酮ⅡA治療急性脊髓損傷方面的研究尚屬空白。

甲基強(qiáng)的松龍近年來在臨床上廣泛應(yīng)用于急性脊髓損傷的早期治療［12］。臨床上甲基強(qiáng)的松龍所使用的劑量和方法被大多數(shù)醫(yī)生所推崇, 但其主要治療作用機(jī)理為抗脂質(zhì)過氧化作用, 隨著深入研究, 急性脊髓損傷研究(NASCISⅡ)的結(jié)果發(fā)表后對此結(jié)果有很大的爭議。甲基強(qiáng)的松龍?jiān)诩毙约顾钃p傷后5 min就可以產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物, 1 h后達(dá)到峰值［13］。大多從以下幾點(diǎn)進(jìn)行［14］：①抗氧化作用。甲基強(qiáng)的松龍脂質(zhì)抗氧化作用被認(rèn)為在脊髓損傷過程中最基礎(chǔ)也是最重要的作用, 研究認(rèn)為其抗氧化而抑制脂質(zhì)過氧化物的生成, 保護(hù)了生物膜的完整性。使得在脊髓損傷后相對較好的能量生成、血液循環(huán)并保護(hù)了脊髓組織的完整性。②減少脊髓損傷的組織缺少。③改善受損傷段脊髓的血流。有相關(guān)學(xué)者在動(dòng)物研究中發(fā)現(xiàn), 脊髓損傷后局部血流在應(yīng)用甲基強(qiáng)的松龍后血流明顯高于對照組［15］。④抗炎癥作用。⑤免疫抑制作用。

臨床常規(guī)治療脊髓損傷時(shí), 需要應(yīng)用比傳統(tǒng)給藥量更大的劑量方能奏效, 而且大劑量應(yīng)用還能對脊髓損傷有遏制創(chuàng)傷后神經(jīng)退行性病變的作用。甲基強(qiáng)的松龍的神經(jīng)保護(hù)作用獨(dú)立于糖皮質(zhì)激素活性；藥理特征需要大劑量給藥；二相模型劑量反應(yīng)曲線；需要早期治療(創(chuàng)傷后8 h以內(nèi))。

急性脊髓損傷后熱休克蛋白作為主要的伴侶蛋白之一,生物細(xì)胞在受熱、缺血、缺氧、病毒感染、機(jī)械性損傷后產(chǎn)生的具有保護(hù)作用的應(yīng)激蛋白, 所以產(chǎn)生表達(dá)。表達(dá)后機(jī)體在相應(yīng)機(jī)制下保護(hù)和修復(fù)機(jī)體受傷細(xì)胞。所以HSP70是急性脊髓損傷后受損程度和損傷修復(fù)的指標(biāo)之一。應(yīng)用藥物后促使該蛋白顯著表達(dá), 兩種藥物在機(jī)理上相同, 甲基強(qiáng)的松龍是脊髓損傷后首選用藥, 所以選擇其作為對照組。而丹參酮ⅡA并未在脊髓損傷臨床上廣泛應(yīng)用, 實(shí)驗(yàn)研究上治療脊髓損傷尚屬空白, 本實(shí)驗(yàn)表明該藥物亦能增加HSP70顯著表達(dá), 在臨床和科研上具有研究意義。

本研究表明：①脊髓損傷后各組的HSP70表達(dá)均呈增加趨勢。STS組和MP組HSP70隨時(shí)段上升陽性神經(jīng)元細(xì)胞表達(dá)上升, 亦呈連續(xù)性, 但STS組數(shù)值雖低于MP組數(shù)值, 但具有可比性。所以二者在急性脊髓損傷后HSP70陽性神經(jīng)元表達(dá)層面上具有相同作用。②急性脊髓損傷過程中神經(jīng)元受到損傷致使HSP70表達(dá)增高是產(chǎn)生應(yīng)激性保護(hù)的一種標(biāo)志, 該標(biāo)志在HSP70表達(dá)中對受損神經(jīng)元起到保護(hù)作用, 也使得HSP70在ASCI后表達(dá)增強(qiáng)。ASCI后機(jī)體同時(shí)發(fā)生了損傷性HSP70增加說明機(jī)體對損傷性刺激能夠快速做出保護(hù)性反應(yīng)。所以丹參酮ⅡA就HSP70表達(dá)層面與甲基強(qiáng)的松龍相同。

實(shí)驗(yàn)證實(shí)了丹參酮ⅡA對大鼠脊髓損傷后在原有基礎(chǔ)上HSP70表達(dá)明顯升高, 也證明了丹參酮ⅡA可以影響大鼠脊髓損傷后的應(yīng)激性反應(yīng)。同時(shí), HSP70也不僅僅是脊髓損傷的唯一指標(biāo), 如更確切的接近客觀規(guī)律, 也可以從其他方面繼續(xù)研究脊髓損傷如：mRNA、NOS等。只能從HSP70角度上對大鼠脊髓損傷的機(jī)理做一推斷, 但為了更確切的了解丹參酮ⅡA對脊髓損傷的治療效果, 還需更直觀、客觀的證實(shí)治療作用的存在。

［1］ 李一帆, 陳東.急性大鼠脊髓損傷Allen’s法模型的改良及電生理評(píng)價(jià).中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)雜志, 2010, 14(8):1169-1172.

［2］ 管陽太.熱休克蛋白在缺血性腦損傷中的作用.國外醫(yī)學(xué)(腦血管疾病分冊), 1994, 2(3):142.

［3］ 崔榮太.紅藻氨酸誘導(dǎo)大鼠癲癇發(fā)作腦組織HSP70表達(dá)的免疫組化及免疫印跡分析.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志, 1998 , 15(5): 277.

［4］ Matz PG.大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血后腦膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元血紅素氧合酶21及HsP70 的誘導(dǎo)(文摘) .國外醫(yī)學(xué)(腦血管疾病分冊), 1997, 5(3):176.

［5］ 李雙, 王琳.丹參酮ⅡA－磺酸鈉注射液的藥理及臨床應(yīng)用進(jìn)展.中藥與臨床, 2011, 2(3):61-63.

［6］ 鄔浩杰.丹參的藥理作用研究.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2008, 32(5):694-695.

［7］ 張玉芳, 趙春景.丹參酮ⅡA及其鈉鹽的藥理研究進(jìn)展.中國藥業(yè), 2008, 17(1):1.

［8］ 胡敏霞, 周密妹, 胡先敏, 等.丹參酮ⅡA預(yù)防性給藥對腦缺血損傷炎癥反應(yīng)的影響.中國藥理學(xué)通報(bào), 2006, 22(4) :436.

［9］ 陳巖, 李志偉, 楊謙, 等.丹參酮對大鼠腦缺血后神經(jīng)干細(xì)胞增殖影響的研究.陜西醫(yī)學(xué)雜志, 2011, 40(7):774-775.

［10］ 伏勇, 黃志高, 張俐, 等.丹參酮對脊髓缺血再灌注損傷HIF121α和VEGF 的作用及機(jī)制.中國中醫(yī)骨傷科雜志, 2010, 18(05):5-12.

［11］ 林翔, 張俐, 劉蔚楠, 等.丹參酮對脊髓缺血再灌注損傷大鼠模型脊髓、血清谷氨酸含量的影響.海峽藥學(xué), 2010, 22(5):49-51.

［12］ 李培建, 哥少汀.脊髓損傷實(shí)驗(yàn)研究的觀察方法.中華外科雜志, 1997, 35(4):254-256.

［13］ 張強(qiáng), 廖維宏, 吳亞民, 等.大劑量甲基強(qiáng)的松龍對大鼠脊髓損傷后脊髓細(xì)胞凋亡的影響.中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志, 2000, 15(4): 218-220.

［14］ 賈連順.甲基強(qiáng)的松龍對急性脊髓損傷治療與預(yù)防性用藥的研究.中國脊柱脊髓雜志, 2005, 15(7):392-393.

［15］ Hsu CY, Dimitrijevic MR.Methylperdnisolone and spinal cord injury:the possible mechanism oF action.J Neurotrauma, 1990 , 7(3):115-119.

2014-05-29］

550002 貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院急診科