鄭凱 王雅靜

HPLC-ELSD法測白癜風(fēng)膠囊中黃芪甲苷的含量

鄭凱 王雅靜

目的 建立HPLC-ESLD法測定白癜風(fēng)膠囊中黃芪甲苷含量的方法。方法 采用Aglient C18 色譜柱；漂移管溫度：50℃；載氣壓力：30 PSI 流動(dòng)相：乙腈-水(32:68)；流速：1.0 ml/min, 柱溫：20℃。 結(jié)果 黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.4169～8.036 ug范圍內(nèi)濃度對數(shù)與峰面積對數(shù)線性關(guān)系良好(r=0.9994)；平均回收率(n=6)為101.3%, RSD為1.7% 。結(jié)論 本法簡捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性好, 可作為評價(jià)白癜風(fēng)膠囊中黃芪甲苷的質(zhì)控方法。

蒸發(fā)光散射檢測器；高效液相色譜；黃芪甲苷；白癜風(fēng)膠囊

白癜風(fēng)膠囊收在于《中國藥典》2010年版一部, 由補(bǔ)骨脂、黃芪、紅花、川穹、當(dāng)歸、香附、桃仁、丹參、烏梢蛇、紫草、白鮮皮、山藥、干姜、龍膽、蒺藜等15味中藥材組成的復(fù)方制劑。具有活血行滯、祛風(fēng)解毒。用于經(jīng)絡(luò)阻隔、氣血不暢所致的白癜風(fēng), 癥見白斑散在分布、色澤蒼白、邊界較明顯。藥典規(guī)定含量測定以補(bǔ)骨脂素為指標(biāo)成分, 有關(guān)黃芪甲苷含量未作規(guī)定, 本研究為白癜風(fēng)膠囊中的黃芪甲苷含量提供了一種較為有效的檢驗(yàn)方法。

1 儀器與試劑

美國Waters E2695高效液相色譜儀(蒸發(fā)光散射檢測器)；CPA225D賽多利斯電子天平(精度±0.01 mg)

標(biāo)準(zhǔn)品：黃芪甲苷(批號(hào)：110781-200612 由中國食品藥品檢定研究院提供)；色譜乙腈(20130322 安徽時(shí)聯(lián)), 自制超純水, 試劑均為分析純, 白癜風(fēng)膠囊, 見表2。

2 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-4 5u (4.6 mm×200 mm)；漂移管溫度50℃；空氣壓力：30 psi；流動(dòng)相：乙腈-水(32:68)；流速：1.0 ml/min; 柱溫：35℃, 進(jìn)樣量：20 μl。

3 溶液的配制

3.1對照溶液 精密稱定黃芪甲苷對照品, 加甲醇分別制成含0.2 mg/ml和0.1 mg/ml的溶液。

3.2供試溶液 取20粒樣品內(nèi)容物, 研細(xì), 稱取, 精密稱定4.0 g置具塞錐形瓶中, 精加甲醇100 ml, 稱重, 超聲30 min,放冷, 再稱重, 補(bǔ)足減失的重量, 搖勻, 過濾, 精取50 ml, 置水浴上蒸干, 殘?jiān)铀?0 ml使溶解, 用水飽和正丁醇振搖提取3次, 共50 ml, 合并正丁醇提取液, 用100 ml氨試液洗滌1次, 再用100 ml正丁醇飽和的水洗滌一次, 取正丁醇液,置水浴上蒸干, 殘?jiān)蛹状既芙? 轉(zhuǎn)移5 ml量瓶中, 稀至刻度, 搖勻, 過濾, 取續(xù)濾液。

3.3空白輔料實(shí)驗(yàn) 按處方量制不含黃芪甲苷空白輔料溶液, 按3.2項(xiàng)下方法制備, 即得。

4 方法與結(jié)果

4.1專屬性試驗(yàn) 取3.3項(xiàng)下空白輔料溶液, 對照溶液和供試溶液各20 μl, 依法測定, 結(jié)果表明, 對照溶液色譜圖中黃芪甲苷主峰的保留時(shí)間為10.806 min, 供試溶液色譜圖與對照溶液色譜圖主峰保留時(shí)間處有色譜峰出現(xiàn), 空白輔料溶液在相應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰, 表明空白輔料溶液無干擾,專屬性好, 見圖1。

圖1 白癜風(fēng)膠囊HPLC色譜圖

4.2精密度試驗(yàn) 精取供試溶液, 連續(xù)進(jìn)樣6次, RSD=1.3%,精密度良好。

4.3重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試溶液(批號(hào)為120406), 依法測定含量, 結(jié)果6次測定平均含量黃芪甲苷為45 μg/粒, RSD=1.5%。

4.4溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試液, 室溫放置后0、2、4、8、24 h, 精密量取20 μl進(jìn)樣, 計(jì)算黃芪甲苷含量平均值為42 μg/粒 RSD=1.7% 表明穩(wěn)定性好。

4.5線性關(guān)系考察 精取黃芪甲苷對照溶液(0.4169 mg/ml) 1、2、5、10、15、20 μl, 重復(fù)進(jìn)樣兩次, 用外標(biāo)兩點(diǎn)對數(shù)方程計(jì)算, 以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo), 色譜峰面積為縱坐標(biāo), 所得線性回歸方程為：logY=1.2937logX+6.0825 r=0.9994 結(jié)果表明, 黃芪甲苷在0.4169～8.036 μg范圍內(nèi)濃度對數(shù)與峰面積對數(shù)呈良好的線性關(guān)系。

4.6加樣回收率試驗(yàn) 精取2 g已知含量的樣品6份, 精密加入對照溶液(0.008338 mg/ml) 50 ml, 搖勻, 再精密加入50 ml甲醇, 搖勻, 依法測定, 結(jié)果平均回收率為101.3% (n=6), RSD=1.3%,見表1。

4.7樣品測定 分別精取對照溶液2、5 μl與供試溶液20 uL, 按給定色譜條件測定, 用外標(biāo)兩點(diǎn)對數(shù)方程計(jì)算, 結(jié)果見表2。

表1加樣回收率結(jié)果

表2黃芪甲苷的含量測定結(jié)果(n=6)

5 討論

5.1流動(dòng)相的選擇 流動(dòng)相的選擇HPLC測定選擇了乙腈：水(體積比32:68), 甲醇：水(體積比35:65)兩種流動(dòng)相體系,通過比較分離情況, 確定了上述體系, 該體系使各成分得到了較好的分離, 滿足定量的要求

5.2測定目的 本文以高效液相色譜法測定白癜風(fēng)膠囊中主要成分黃芪甲苷的含量, 方法分析條件易于精確控制, 待測成分易于分離, 且具有較好的重現(xiàn)性和較高的精密度, 為白癜風(fēng)膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供了依據(jù)

［1］ 張蓮珠.HPLC測定黃芪甲苷概況.中成藥, 2005,27(5):587-587.

［2］ 劉瑋錦,蔡大可,劉亮鋒,等.HPLC測定當(dāng)歸補(bǔ)血片中黃芪甲苷的含量.藥物分析雜志, 2009,29(9):1553-1555.

［3］ 中華人民共和國國家藥典委員會(huì).中國藥典.一部, 2000:283-284.

［4］ 雷健,胡雪蓮,金一南,等.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定益生膠囊中黃芪甲苷含量.中國藥業(yè), 2011,21(16):47-48.

［5］ 史志輝,史萌,吳錦妮,等.HPLC-ELSD法測定扶正散結(jié)膠囊中黃芪甲苷的含量.現(xiàn)代中醫(yī)藥, 2013(2):86-88.

［6］ 曹紅,邢俊波,趙晶.HPLC-ELSD測定腎炎清片中黃芪甲苷的含量.中國醫(yī)藥指南, 2013,1(16):426-427.

122000 朝陽市食品藥品檢驗(yàn)所(鄭凱)；朝陽市食品藥品安全監(jiān)督所(王雅靜)