溶磷真菌PFK—1的解磷能力及其對(duì)油菜的促生作用

徐文鳳　邢芳芳　宋濤　胡兆平　李新柱

摘要：利用固體、液體培養(yǎng)法測(cè)定溶磷真菌PFK-1的解磷能力；通過(guò)盆栽試驗(yàn)，研究其對(duì)油菜的促生作用及對(duì)土壤磷素變化的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，以Ca3（PO4）2為唯一磷源的液體培養(yǎng)基，接種參試菌株P(guān)FK-1，在28℃、120 r/min條件下培養(yǎng)144 h溶磷量高達(dá)768.1 mg/L；液體培養(yǎng)基中pH值隨溶磷量的增加而下降，在144 h時(shí)液體培養(yǎng)基pH值降至1.87，以后仍繼續(xù)保持在低pH值水平；盆栽試驗(yàn)表明，與單施硝基肥的處理相比，1%、2%微生物與硝基肥復(fù)配的處理，油菜鮮重和干重增長(zhǎng)率分別為7.19%、22.15%和33.11%、40.88%；土壤有效磷分別增加了30.27%、52.36%。

關(guān)鍵詞：真菌PFK-1；溶磷能力；促生作用

中圖分類號(hào)：S154.38文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）05-0085-05

磷是植物生長(zhǎng)發(fā)育所必需營(yíng)養(yǎng)元素之一，是植物體內(nèi)核酸及多種酶、輔酶、ATP等的重要組成成分，在植物生長(zhǎng)發(fā)育中的作用僅次于氮[1，2]。土壤中95%以上的磷是植物不易吸收利用的難溶性磷，我國(guó)土壤中的磷素含量較低，約74%的耕地土壤缺磷[3]，約66.7%嚴(yán)重缺磷[4]。因此，必須向土壤中施入大量可溶性磷肥，以提高作物產(chǎn)量，但當(dāng)季磷肥利用率較低，約為5%～10%[5]，大部分磷與Ca2+、Fe3+、Fe2+、Al3+結(jié)合形成難溶性磷酸鹽，作物難以利用，使得磷元素在土壤中大量積累，降低磷利用率并帶來(lái)嚴(yán)重的環(huán)境污染。

近年來(lái)，利用植物根際與磷循環(huán)相關(guān)的生物學(xué)系統(tǒng)來(lái)調(diào)節(jié)植物根際磷的有效性，特別是利用解磷微生物來(lái)活化土壤難溶性磷，已成為提高土壤磷有效性的研究熱點(diǎn)[6]。土壤中具有解磷作用的微生物包括細(xì)菌、真菌和放線菌等，其中解磷真菌的溶磷能力較強(qiáng)，而且遺傳性狀相對(duì)穩(wěn)定。具有解磷能力的微生物能夠?qū)㈦y溶性無(wú)機(jī)磷轉(zhuǎn)化為可溶性磷，它們以自身的代謝產(chǎn)物或者與其他微生物協(xié)同作用溶解土壤中難溶性無(wú)機(jī)磷，以提高土壤中磷的利用率、有機(jī)質(zhì)含量、作物產(chǎn)量，改善土壤結(jié)構(gòu)，并減少化肥的施用量，降低農(nóng)業(yè)成本，是增加土壤中可溶性磷的重要途徑之一[7]。

本研究對(duì)溶磷真菌PFK-1進(jìn)行了一系列試驗(yàn)，觀察其在固體無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基上溶磷圈大小，測(cè)定其對(duì)無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基的溶磷能力；在盆栽試驗(yàn)中，研究其對(duì)油菜的促生作用以及對(duì)土壤中有效磷變化的影響，為利用溶磷菌提高土壤中磷利用率提供一定的參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試菌株溶磷真菌PFK-1，由山東金正大生態(tài)工程股份有限公司研發(fā)中心微生物實(shí)驗(yàn)室分離保存。

1.1.2培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂18 g，水1 000 mL。用于溶磷真菌的培養(yǎng)。

無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基[8]：葡萄糖10 g，（NH4）2SO4 0.5 g，NaCl 0.3 g，KCl 0.3 g，MgSO4 ·7H2O 0.3 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4 ·H2O 0.03 g，Ca3（PO4 ）2 5.0 g，瓊脂 20 g，定容至1 000 mL，pH 7.0～7.5。

無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基[8]：葡萄糖10 g，（NH4）2SO4 0.5 g，NaCl 0.3 g， KCl 0.3 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.03 g， MnSO4 ·H2O 0.03 g，Ca3（PO4）2 5.0 g，定容至 1 000 mL，pH 7.0～7.5。

查氏酵母膏瓊脂培養(yǎng)基（CYA）：K2HPO4 1.0 g，查氏濃縮液 10.0 mL，酵母抽提粉5.0 g，蔗糖30.0 g，瓊脂 15.0 g，無(wú)菌水 1 000 mL。

查氏濃縮液配方： NaNO3 30.0 g， KCl 5.0 g， MgSO4·7H2O 5.0 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.1 g，ZnSO4·7H2O 0.1 g，CuSO4·5H2O 0.05 g，無(wú)菌水100 mL。

1.1.3儀器設(shè)備主要有Biolog 微生物自動(dòng)分析系統(tǒng) （Gen III Microstation 自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)）、立式電熱蒸汽壓力滅菌鍋、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、烘箱、空氣浴培養(yǎng)搖床、超凈工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱、電子天平。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1固體培養(yǎng)條件下溶磷能力測(cè)定將純化后的溶磷菌株接種于無(wú)機(jī)磷固體平板上，重復(fù)3次。28℃恒溫倒置培養(yǎng)7 d測(cè)定菌落直徑（d）及溶磷圈直徑（D），根據(jù)溶磷圈直徑與菌落直徑的比值（D/d）大小初步確定該菌株溶磷能力的強(qiáng)弱，以無(wú)溶磷能力的對(duì)照菌株為參照。

1.2.2液體培養(yǎng)條件下溶磷能力測(cè)定 將供試溶磷菌株接種到PDA平板上，待菌落長(zhǎng)滿平板后，用直徑0.6 cm打孔器取一菌塊接種到裝有200 mL無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基的500 mL三角瓶中，28℃、120 r/min 振蕩培養(yǎng)。分別在24、48、72、96、120、144 h時(shí)取出過(guò)濾去除菌絲，用鉬藍(lán)比色法測(cè)定濾液OD700的吸光值及pH值，通過(guò)有效磷含量標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算溶液中有效磷含量，以確定菌株對(duì)Ca3（PO4 ）2 的溶磷能力。

磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.2195 g經(jīng)105℃烘干的KH2PO4（分析純），溶解在400 mL水中，加濃硫酸5 mL，轉(zhuǎn)入1 L容量瓶中，加水定容。此溶液為50 μg/mL 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取該磷標(biāo)準(zhǔn)溶液25 mL，稀釋至250 mL，即為5 μg/mL 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制參考文獻(xiàn)[9]。

1.2.3溶磷真菌形態(tài)鑒定及Biolog鑒定將溶磷真菌接種于CYA平板上，25℃倒置培養(yǎng)7 d后，觀察菌落外部形態(tài)及產(chǎn)孢梗、孢子等性狀，參照文獻(xiàn)[10，11]進(jìn)行菌株初步鑒定。endprint

初步確定微生物類型后，在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，然后接種到Biolog專用接種液IF-FF中制備成均一的菌懸液，轉(zhuǎn)接到鑒定板上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)24、48、72、96、168 h后在讀數(shù)儀上讀取數(shù)據(jù)，并在 Biolog 數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行相似性比對(duì)，查找最接近的結(jié)果。

1.2.4溶磷真菌PFK-1對(duì)盆栽油菜生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)將制備好的溶磷真菌孢子粉，按不同配比包裹在（N-P-K）15-6-20硝基肥復(fù)混肥顆粒表面，制成微生物包裹型肥料。試驗(yàn)設(shè)2個(gè)處理，3個(gè)對(duì)照，重復(fù)3次。

處理：T1施用1%微生物包裹型硝基肥1.2 g；T2施用2%微生物包裹型硝基肥1.2 g。

對(duì)照：CK0不施肥；CK1施用溶磷真菌孢子粉0.024 g；CK2施用硝基肥1.2 g。

將采自山東省臨沭縣的農(nóng)田土（土壤類型為棕壤、質(zhì)地為砂壤、pH值5.42、有機(jī)碳 0.89%、全氮 654.05 mg/kg、有效磷 39.46 mg/kg、速效鉀 59.88 mg/kg）在室內(nèi)風(fēng)干，粉碎后裝入直徑18 cm、高18.5 cm的塑料盆中，每盆2 kg。將處理好的肥料與土壤摻混均勻，播種油菜（Brassica napus） 蘇州青種子6～8粒，澆水。盆栽從2013年5月14日開(kāi)始至7月1日收獲，共48天，油菜長(zhǎng)出2片真葉后間苗定植，每盆2株，于收獲時(shí)測(cè)定鮮重及葉片數(shù)，烘干后稱干重。

土壤有效磷采用NaHCO3浸提、鉬藍(lán)比色法測(cè)定 [12]。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 進(jìn)行處理，SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2結(jié)果與分析

2.1難溶無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)條件下溶磷能力

溶磷圈的大小，是表征溶磷菌相對(duì)溶磷能力的一個(gè)指標(biāo)，大致可以說(shuō)明此溶磷菌分解無(wú)機(jī)磷能力的強(qiáng)弱，從而可以初步判斷溶磷菌溶磷能力。將溶磷真菌接種至無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基平板上，倒置培養(yǎng)7 d后，形成肉眼可見(jiàn)的透明溶磷圈（圖1），溶磷真菌菌落直徑d=4.5 cm，溶磷圈直徑D=8.1 cm，D/d=1.8。表明該溶磷真菌在難溶性無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，其溶磷能力較好。

2.2難溶無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)條件下溶磷能力及pH值變化

2.2.1溶磷能力根據(jù)1.2.3的方法繪制磷含量與吸光度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=1.9095x-0.0014 （R2=1.0000），相關(guān)性達(dá)極顯著水平。根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及溶磷真菌培養(yǎng)液的OD值，可以計(jì)算出培養(yǎng)液中的磷含量。

無(wú)機(jī)磷液體定量測(cè)磷方法能夠更精確地確定溶磷真菌的解磷能力。由表1可以看出，與對(duì)照（CK）相比，隨著培養(yǎng)時(shí)間的變化，培養(yǎng)液中有效磷含量顯著增多，培養(yǎng)144 h時(shí)溶磷量達(dá)到768.1 mg/L，溶磷率達(dá)76.8%；總體上，培養(yǎng)時(shí)間為24～144 h，液體培養(yǎng)基中有效磷含量隨時(shí)間增加而增大。

2.2.2不同培養(yǎng)時(shí)間液體培養(yǎng)基pH值變化溶磷真菌PFK-1在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)144 h，液體培養(yǎng)基pH值變化過(guò)程見(jiàn)圖2。從圖中可以看出：液體培養(yǎng)基對(duì)照初始pH值為7，接種溶磷真菌后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，液體培養(yǎng)基的pH值明顯下降，培養(yǎng)144 h時(shí)，pH值下降至1.87。

2.3溶磷真菌形態(tài)鑒定及Biolog鑒定

2.3.1培養(yǎng)特征觀察在CYA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d后，菌落直徑7.4 cm，初期產(chǎn)生白色菌絲，后期形成大量黑色孢子；菌落呈暗黑褐色，菌落絲絨狀，中心凸起，有放射狀溝紋。菌落背面黃色至黃褐色（圖3-A）。

2.3.2顯微形態(tài)觀察挑取適量菌體，制作顯微形態(tài)觀察玻片，在光學(xué)顯微鏡下觀察，分生孢子頭球形，分生孢子梗無(wú)隔膜，頂端膨大形成球形頂囊，直徑50～80 μm，在頂囊上生出2層小梗，下面一層是?；總€(gè)?；现鷰讉€(gè)小梗，每個(gè)小梗頂端生出一串分生孢子。分生孢子球形，直徑3.0～4.5 μm，壁粗糙（圖3-B）。初步確定供試溶磷真菌PFK-1為曲霉屬真菌（Aspergillus spp.）

2.3.3Biolog鑒定結(jié)果根據(jù)菌株的培養(yǎng)類型，將菌株接種到麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上，3 d后用棉簽沾起孢子，分散到IF-FF專用接種液中，制備成均一的菌懸液，調(diào)整濁度到（75±2）%，接種到FF鑒定板上，接種量 100 μL，26℃培養(yǎng)，在培養(yǎng)24、48、72、96、168 h讀取數(shù)據(jù)一次；培養(yǎng)72 h后，鑒定結(jié)果為巴西曲霉（Aspergillus brasiliensis），PROB為99.8%，SIM為0.76，DIST為4.00。

2.4溶磷真菌PFK-1對(duì)油菜的促生長(zhǎng)作用及土壤有效磷變化

由表2可以看出，施用溶磷真菌處理能夠提高油菜的鮮重與干重，增加土壤有效磷含量，對(duì)油菜的生長(zhǎng)發(fā)育有一定的促生作用。單獨(dú)施用溶磷真菌的CK1與不施用任何肥料的CK0相比，鮮重與干重均有顯著提高，分別增長(zhǎng)11.21%和14.09%。而施用硝基肥與溶磷真菌的T1、T2處理與單施硝基肥的CK2比較，鮮重分別增加7.19%與22.15%，干

3結(jié)論與討論

目前已報(bào)道的具有溶磷能力的微生物包括細(xì)菌、真菌和放線菌等。溶磷真菌種類數(shù)量比溶磷細(xì)菌少得多，但溶磷真菌溶磷活性均高于細(xì)菌[13]。溶磷真菌類主要有青霉菌（Penicillium）、曲霉菌（Asperillus）、根霉（Rhizopus）、鐮刀菌（Fusarium）、小菌核菌（Selerotium）等[14]。研究表明，在為數(shù)眾多的溶磷微生物中，曲霉的溶磷活性最高[15]，溶磷能力在300～400 mg/L之間。本研究中，結(jié)合形態(tài)鑒定和Biolog自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)鑒定，得出溶磷真菌PFK-1是巴西曲霉（Aspergillus brasiliensis）；其具有較強(qiáng)的溶磷能力，在無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，溶磷量增大；培養(yǎng)144 h時(shí)溶磷量為768.1 mg/L，溶磷率達(dá)76.8%，這與Cerezine等[16]報(bào)道的曲霉在液體培養(yǎng)過(guò)程中隨著菌絲體的生長(zhǎng)，對(duì)難溶性磷酸鹽的溶解能力逐漸增加相符合。Agnihotd[17]報(bào)道一株曲霉在30℃條件下培養(yǎng)20 d，磷礦粉中87.7%的磷可被釋放出來(lái)。陳明會(huì)等[18]從滇池流域富磷區(qū)篩選獲得的 48 株溶磷真菌對(duì)Ca3（PO4）2 有較好的溶磷效果，釋放的有效磷含量在14.45～64.87 mg/L 之間，其中黑曲霉 （Aspergillus niger）PSF 47的溶磷能力最好，釋放的有效磷含量達(dá)64.87 mg/L。endprint

范丙全等[19]在測(cè)定溶磷草酸霉菌溶磷圈大小時(shí)得出，培養(yǎng)第7 d時(shí)D/d值在1.07 ～1.26之間；林啟美等[20]測(cè)得培養(yǎng)7 d時(shí)芽孢桿菌屬溶解無(wú)機(jī)磷的D/d 值范圍為 1.14 ～1.43。本研究中，在固體培養(yǎng)條件下，D/d為1.8，表明該株溶磷真菌PFK-1具有較強(qiáng)的溶磷能力。

溶磷真菌在液體中培養(yǎng)時(shí)，能夠產(chǎn)生草酸、檸檬酸等多種有機(jī)酸[21]，從而使pH值降低。趙小蓉等[22]發(fā)現(xiàn)溶磷量與培養(yǎng)液中的pH值存在一定的相關(guān)性，但培養(yǎng)介質(zhì)pH值的下降，并不是微生物溶磷的必要條件。本研究中，隨著pH值的下降，溶磷量增加，培養(yǎng)144 h時(shí)溶液pH值下降至1.87，溶液中有效磷含量最大為768 mg/L，具有一定的相關(guān)性。溶磷菌培養(yǎng)液中 pH值下降的原因，可能是因?yàn)槿芰拙芙忉尫懦龅挠坞x磷改變了培養(yǎng)液的酸堿度，也可能是溶磷菌本身向周圍環(huán)境分泌酸性物質(zhì)或者兩者兼而有之[23]。

溶磷真菌能夠溶解土壤中的難溶性磷，促進(jìn)植物對(duì)磷素的吸收，從而促進(jìn)植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。在植物根系接種溶磷真菌不僅可以提高植物吸收磷素，轉(zhuǎn)化難溶性磷為有效磷[24]；也能夠促進(jìn)植物對(duì)水分的吸收和利用，提高植物的抗旱能力[25]；還能夠增強(qiáng)葉片的光合作用，提高植物的碳素營(yíng)養(yǎng)， 促進(jìn)植物生長(zhǎng)，增加植物的生物量或干重[26]。本試驗(yàn)中，溶磷真菌PFK-1對(duì)油菜有明顯的促生作用，能不同程度地提高鮮重和干重，與單施硝基肥的對(duì)照相比，處理T1、T2油菜的鮮重和干重分別增加了7.19%、22.15%和33.11%、40.88%；土壤有效磷分別增加了30.27%、52.36%。

溶磷微生物在土壤中存活及溶磷特性受到土壤環(huán)境和作物生長(zhǎng)等諸多因素影響。本試驗(yàn)中，溶磷菌對(duì)油菜生長(zhǎng)影響只進(jìn)行了盆栽試驗(yàn)，雖表現(xiàn)良好，但實(shí)驗(yàn)室條件與大田土壤環(huán)境條件差異很大，對(duì)菌株促生效應(yīng)發(fā)揮有較大影響。所以，驗(yàn)證菌株在大田土壤中的定殖、生長(zhǎng)和生存能力應(yīng)作為后續(xù)研究工作的重點(diǎn)。

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[26]金術(shù)超，杜春梅，平文祥，等.解磷微生物的研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)雜志，2006，26（2）： 73-78.山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)2014，46（5）：90～92Shandong Agricultural Sciences山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)第46卷第5期潘軍，等endprint

范丙全等[19]在測(cè)定溶磷草酸霉菌溶磷圈大小時(shí)得出，培養(yǎng)第7 d時(shí)D/d值在1.07 ～1.26之間；林啟美等[20]測(cè)得培養(yǎng)7 d時(shí)芽孢桿菌屬溶解無(wú)機(jī)磷的D/d 值范圍為 1.14 ～1.43。本研究中，在固體培養(yǎng)條件下，D/d為1.8，表明該株溶磷真菌PFK-1具有較強(qiáng)的溶磷能力。

溶磷真菌在液體中培養(yǎng)時(shí)，能夠產(chǎn)生草酸、檸檬酸等多種有機(jī)酸[21]，從而使pH值降低。趙小蓉等[22]發(fā)現(xiàn)溶磷量與培養(yǎng)液中的pH值存在一定的相關(guān)性，但培養(yǎng)介質(zhì)pH值的下降，并不是微生物溶磷的必要條件。本研究中，隨著pH值的下降，溶磷量增加，培養(yǎng)144 h時(shí)溶液pH值下降至1.87，溶液中有效磷含量最大為768 mg/L，具有一定的相關(guān)性。溶磷菌培養(yǎng)液中 pH值下降的原因，可能是因?yàn)槿芰拙芙忉尫懦龅挠坞x磷改變了培養(yǎng)液的酸堿度，也可能是溶磷菌本身向周圍環(huán)境分泌酸性物質(zhì)或者兩者兼而有之[23]。

溶磷真菌能夠溶解土壤中的難溶性磷，促進(jìn)植物對(duì)磷素的吸收，從而促進(jìn)植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。在植物根系接種溶磷真菌不僅可以提高植物吸收磷素，轉(zhuǎn)化難溶性磷為有效磷[24]；也能夠促進(jìn)植物對(duì)水分的吸收和利用，提高植物的抗旱能力[25]；還能夠增強(qiáng)葉片的光合作用，提高植物的碳素營(yíng)養(yǎng)， 促進(jìn)植物生長(zhǎng)，增加植物的生物量或干重[26]。本試驗(yàn)中，溶磷真菌PFK-1對(duì)油菜有明顯的促生作用，能不同程度地提高鮮重和干重，與單施硝基肥的對(duì)照相比，處理T1、T2油菜的鮮重和干重分別增加了7.19%、22.15%和33.11%、40.88%；土壤有效磷分別增加了30.27%、52.36%。

溶磷微生物在土壤中存活及溶磷特性受到土壤環(huán)境和作物生長(zhǎng)等諸多因素影響。本試驗(yàn)中，溶磷菌對(duì)油菜生長(zhǎng)影響只進(jìn)行了盆栽試驗(yàn)，雖表現(xiàn)良好，但實(shí)驗(yàn)室條件與大田土壤環(huán)境條件差異很大，對(duì)菌株促生效應(yīng)發(fā)揮有較大影響。所以，驗(yàn)證菌株在大田土壤中的定殖、生長(zhǎng)和生存能力應(yīng)作為后續(xù)研究工作的重點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

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[22]趙小蓉，林啟美，李保國(guó).C、N源及C/N比對(duì)微生物溶磷的影響[J].植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)，2002，8（2）：197-204.

[23]梁艷瓊，雷照鳴，賀春萍，等.一株溶磷真菌的分離鑒定及其溶磷能力的初步研究[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2011，32（6）：1116-1121.

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范丙全等[19]在測(cè)定溶磷草酸霉菌溶磷圈大小時(shí)得出，培養(yǎng)第7 d時(shí)D/d值在1.07 ～1.26之間；林啟美等[20]測(cè)得培養(yǎng)7 d時(shí)芽孢桿菌屬溶解無(wú)機(jī)磷的D/d 值范圍為 1.14 ～1.43。本研究中，在固體培養(yǎng)條件下，D/d為1.8，表明該株溶磷真菌PFK-1具有較強(qiáng)的溶磷能力。

溶磷真菌在液體中培養(yǎng)時(shí)，能夠產(chǎn)生草酸、檸檬酸等多種有機(jī)酸[21]，從而使pH值降低。趙小蓉等[22]發(fā)現(xiàn)溶磷量與培養(yǎng)液中的pH值存在一定的相關(guān)性，但培養(yǎng)介質(zhì)pH值的下降，并不是微生物溶磷的必要條件。本研究中，隨著pH值的下降，溶磷量增加，培養(yǎng)144 h時(shí)溶液pH值下降至1.87，溶液中有效磷含量最大為768 mg/L，具有一定的相關(guān)性。溶磷菌培養(yǎng)液中 pH值下降的原因，可能是因?yàn)槿芰拙芙忉尫懦龅挠坞x磷改變了培養(yǎng)液的酸堿度，也可能是溶磷菌本身向周圍環(huán)境分泌酸性物質(zhì)或者兩者兼而有之[23]。

溶磷真菌能夠溶解土壤中的難溶性磷，促進(jìn)植物對(duì)磷素的吸收，從而促進(jìn)植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。在植物根系接種溶磷真菌不僅可以提高植物吸收磷素，轉(zhuǎn)化難溶性磷為有效磷[24]；也能夠促進(jìn)植物對(duì)水分的吸收和利用，提高植物的抗旱能力[25]；還能夠增強(qiáng)葉片的光合作用，提高植物的碳素營(yíng)養(yǎng)， 促進(jìn)植物生長(zhǎng)，增加植物的生物量或干重[26]。本試驗(yàn)中，溶磷真菌PFK-1對(duì)油菜有明顯的促生作用，能不同程度地提高鮮重和干重，與單施硝基肥的對(duì)照相比，處理T1、T2油菜的鮮重和干重分別增加了7.19%、22.15%和33.11%、40.88%；土壤有效磷分別增加了30.27%、52.36%。

溶磷微生物在土壤中存活及溶磷特性受到土壤環(huán)境和作物生長(zhǎng)等諸多因素影響。本試驗(yàn)中，溶磷菌對(duì)油菜生長(zhǎng)影響只進(jìn)行了盆栽試驗(yàn)，雖表現(xiàn)良好，但實(shí)驗(yàn)室條件與大田土壤環(huán)境條件差異很大，對(duì)菌株促生效應(yīng)發(fā)揮有較大影響。所以，驗(yàn)證菌株在大田土壤中的定殖、生長(zhǎng)和生存能力應(yīng)作為后續(xù)研究工作的重點(diǎn)。

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[22]趙小蓉，林啟美，李保國(guó).C、N源及C/N比對(duì)微生物溶磷的影響[J].植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)，2002，8（2）：197-204.

[23]梁艷瓊，雷照鳴，賀春萍，等.一株溶磷真菌的分離鑒定及其溶磷能力的初步研究[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2011，32（6）：1116-1121.

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[26]金術(shù)超，杜春梅，平文祥，等.解磷微生物的研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)雜志，2006，26（2）： 73-78.山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)2014，46（5）：90～92Shandong Agricultural Sciences山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)第46卷第5期潘軍，等endprint