赫秀萍，畢瑞鋒

[1.青島科技大學(xué)化工學(xué)院，山東青島 266042； 2.諾安檢測服務(wù)(青島)有限公司，山東青島 266002]

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定草莓中二噻農(nóng)殘留

赫秀萍1，2，畢瑞鋒2

[1.青島科技大學(xué)化工學(xué)院，山東青島 266042； 2.諾安檢測服務(wù)(青島)有限公司，山東青島 266002]

采用鹽酸酸化乙腈提取草莓中二噻農(nóng)殘留，提取溶液經(jīng)無水硫酸鈉和PSA凈化后，利用安捷倫Poroshell 120 EC-C18色譜柱進(jìn)行分離，以甲醇-水(體積比20∶80，含5 mmol／L乙酸銨溶液)作為流動(dòng)相，ESI負(fù)離子模式下進(jìn)行液相色譜-四極桿串聯(lián)質(zhì)譜分析。結(jié)果表明，在10～200 μg／L濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，r2＞0.999 8，平均回收率為71.8%～78.3 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5% (n=6)，方法定量限為5 μg／kg。該方法簡單快速，可滿足新鮮草莓中二噻農(nóng)殘留檢測工作的需要。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；二噻農(nóng)；草莓

二噻農(nóng)，又稱二氰蒽醌，5,10-二氫-5,10-二氧萘并［2,3,6］-1，4-二噻-2,3-二硫代腈，是20世紀(jì)60年代由德國Merck公司開發(fā)的一種抑制孢子體萌發(fā)的保護(hù)性殺菌劑，具有廣譜、低毒、使用安全的特點(diǎn)。

草莓以其味道鮮美且具有營養(yǎng)價(jià)值豐富的特點(diǎn)，備受消費(fèi)者青睞，隨著大棚種植技術(shù)的推廣，草莓在我國種植面積逐年擴(kuò)大，然而大棚草莓極易遭遇枯萎病的危害，從而造成減產(chǎn)。二噻農(nóng)對(duì)草莓枯萎病菌具有良好的抑制效果，因此噴灑二噻農(nóng)成為防治枯萎病的一種重要手段［1］,但草莓中的二噻農(nóng)殘留會(huì)對(duì)人體造成不良影響。為了保證消費(fèi)者的身體健康，歐盟和日本針對(duì)草莓中的二噻農(nóng)分別制定了限量標(biāo)準(zhǔn)，歐盟規(guī)定的最大殘留限量為0.01 mg／kg，日本規(guī)定的最大殘留限量為0.05 mg／kg。

目前國內(nèi)食品中二噻農(nóng)的檢測方法主要采用高效液相色譜法［2，3］，國外最近有使用氣相質(zhì)譜法［4］和高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法［5］的報(bào)道，檢測二噻農(nóng)的食品包括蘋果、葡萄、梨、辣椒等，沒有針對(duì)草莓基質(zhì)的方法研究。筆者在QuEChERs［6］方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立了草莓中二噻農(nóng)殘留的快速分析方法。該方法簡單快速、靈敏度高，解決了檢測二噻農(nóng)時(shí)回收率低的問題。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜-四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：1260／6460A型，美國Agilent公司；

頂盤天平：BSA2202S型，德國Sartorius公司；

均質(zhì)器：Polytron PT3100D型，瑞士Kinematica公司；

高速離心機(jī)：上海菲恰爾分析儀器；

甲醇、乙腈：色譜純，德國Merck公司；

二噻農(nóng)固體標(biāo)準(zhǔn)品：純度98.0%，德國Dr.Ehrenstorfer公司；

乙酸銨：HPLC級(jí)，美國Sigma公司；

PSA：N-丙基乙二胺，375μm (40目)，美國Agilent公司；

純水：來自超純水儀，電阻率大于等于18 MΩ·cm。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：安捷倫Poroshell 120 EC-C18柱 (3.0 mm×100 mm，2.7 μm)；柱溫：35℃；樣品室溫度：室溫；進(jìn)樣量：2 μL；流量：0.5 mL／min；總運(yùn)行時(shí)間：12 min。流動(dòng)相A為5 mmol／L 乙酸銨甲醇-水(體積比20∶80)，溶液流動(dòng)相B為5 mmol／L 乙酸銨甲醇溶液，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.2.2 質(zhì)譜條件

電離模式：ESI-模式；毛細(xì)管電壓：3 000 V；噴嘴電壓：500 V；干燥器溫度：325℃；干燥氣(氮?dú)?流速：6 L／min；霧化氣壓力：276 kPa (40 Psi)；鞘氣(氮?dú)?溫度：350℃；鞘氣(氮?dú)?流量：10 L／min；采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式。

表2 監(jiān)測離子對(duì)

1.3 樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱取10.0 g混合均勻的新鮮草莓樣品至50 mL塑料離心管中，依次加入5 mL水、1 mL 濃鹽酸和10 mL乙腈溶液，劇烈混合1 min，然后加入5 g氯化鈉，均質(zhì)1 min，然后再以3 000 r／min離心10 min。移取3 mL上清液至15 mL塑料離心管中，加入1 g無水硫酸鈉和20 mg PSA，混合后，以3 000 r／min離心5 min，取上清液過0.45 μm的尼龍濾膜后轉(zhuǎn)入進(jìn)樣瓶中，上機(jī)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品預(yù)處理方法優(yōu)化

QuEChERS方法［6］是一種蔬菜水果樣品中農(nóng)藥殘留快速提取方法，利用吸附劑填料(無水硫酸鎂、PSA、C18、石墨化炭黑)與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達(dá)到除雜凈化的目的。然而在提取過程中無水硫酸鎂吸水的同時(shí)放熱，雖然有助于農(nóng)藥的提?。?］，但可能會(huì)導(dǎo)致二噻農(nóng)回收率不高［4］。金銓［4］的研究證明，二噻農(nóng)在酸性和中性的乙腈中均非常穩(wěn)定，而在堿性的乙腈-水(體積比30∶70)溶液中極不穩(wěn)定。鹽酸是提取二噻農(nóng)良好的pH調(diào)節(jié)劑［8］，因此本實(shí)驗(yàn)選擇乙腈作為提取溶劑，用氯化鈉-鹽酸進(jìn)行酸度調(diào)節(jié)。

PSA作為分散SPE的吸附劑，可有效去除乙腈提取液中的脂肪酸、糖類、酚類等酸性成分以及極性色素［9］，由于PSA對(duì)二噻農(nóng)有一定的吸附作用，所以對(duì)PSA的用量進(jìn)行了考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，每毫升提取液加入20 mg PSA 既能有效去除干擾，又不會(huì)明顯影響二噻農(nóng)的提取效果。

2.2 色譜條件的選擇

Poroshell色譜柱是一種核殼結(jié)構(gòu)的色譜柱，相對(duì)于同樣規(guī)格的普通C18色譜柱，該色譜柱具有更小的系統(tǒng)背景壓力和更高的柱效，有利于化合物的快速分析，因此被選為二噻農(nóng)的分析柱。甲醇-水體系為液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用常用的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)證明在甲醇-水中添加5 mmol／L揮發(fā)性緩沖鹽乙酸銨，比直接采用甲醇-水作為流動(dòng)相目標(biāo)物的響應(yīng)更好；由于乙酸銨水溶液在室溫環(huán)境下極易生長細(xì)菌，因此在弱洗脫相A相中添加20%的甲醇，在表1的梯度條件下，二噻農(nóng)在4.39 min出峰，12 min內(nèi)完成運(yùn)行。

2.3 質(zhì)譜條件的選擇

配制質(zhì)量濃度為5 mg／L的二噻農(nóng)標(biāo)準(zhǔn)品用于質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化。首先在MS2 scan下進(jìn)行母離子掃描，得到其準(zhǔn)分子離子，在MS2 SIM下優(yōu)化準(zhǔn)分子離子對(duì)應(yīng)的fragmentor值；通過子離子掃描Product Ion獲得響應(yīng)最高且最穩(wěn)定的子離子，然后再利用多反應(yīng)監(jiān)測MRM模式優(yōu)化得到子離子最大響應(yīng)時(shí)的CE值，優(yōu)化后的參數(shù)見表2。

對(duì)鞘氣溫度、鞘氣流速、噴嘴電壓進(jìn)行了反復(fù)測試和優(yōu)化，最終確定鞘氣溫度為350℃，鞘氣流速為10 L／min，噴嘴電壓為500 V，在該條件下目標(biāo)物的響應(yīng)值最高。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和定量限

按1.3方法對(duì)草莓基質(zhì)空白樣品進(jìn)行預(yù)處理，用提取的基質(zhì)溶液準(zhǔn)確配制質(zhì)量濃度為5，10，50，100，200 μg／L的二噻農(nóng)基質(zhì)匹配校正標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.2儀器工作條件下進(jìn)行測定。以質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=8.25X-5.06，相關(guān)系數(shù)r2＞0.999 8。圖1為10 μg／L校正標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。

圖1 二噻農(nóng)溶劑標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

根據(jù)10倍信噪比的添加濃度水平，確定該方法的定量限為5 μg／kg，低于歐盟和日本的限量水平。

2.5 回收率和精密度試驗(yàn)

向草莓基質(zhì)空白樣品中加入10，50，100 μg／kg 3個(gè)濃度水平的二噻農(nóng)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行回收試驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)6次,檢測結(jié)果見表3。由表3可知，平均回收率為71.8%～78.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5% (n=6)，滿足GB／T 27404-2008［10］對(duì)痕量分析的要求。

表3 回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.6 方法應(yīng)用

從市場隨機(jī)采購20個(gè)新鮮草莓樣品，按1.3方法對(duì)樣品進(jìn)行處理后，用本法進(jìn)行二噻農(nóng)分析，均未發(fā)現(xiàn)陽性檢出。用該方法對(duì)3個(gè)辣椒樣品進(jìn)行分析，未發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果，回收率良好，由此證明該方法對(duì)其它種類的基質(zhì)具有通用性，但需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。

3 結(jié)語

建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測新鮮草莓中二噻農(nóng)的定量分析方法，該方法具有樣品處理簡單快速，測定周期短，靈敏度、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，為食品安全監(jiān)管提供了新的檢測手段。

［1］于紅梅，趙密珍，錢亞明，等.防治草莓枯萎病菌4種藥劑的篩選試驗(yàn)［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(6): 222-223.

［2］李彩霞，王雅東.分散固相萃取-高效液相色譜法測定水果中的二氰蒽醌殘留［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012(3): 110-111.

［3］金銓.新型殺菌劑二氰蒽醌殘留與光解研究［D］.浙江：浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，2007.

［4］Jang J，Rahman M M，El-Aty A M A，et al. A Simple and improved HPLC method for the analysis of dithianon in red pepper with tandem mass spectrometry confirmation ［J］. Food Anal Methods，2014，7(3): 653-659.

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［10］GB／T 27404-2008 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測［S］.

Determination of Dithianon Residue in Strawberry by Liquid Chromatography-TandemMass Spectrometry

He Xiuping1，2， Bi Ruifeng2
［1. College of Chemical Engineering， Qingdao University of Science and Technology， Qingdao 266042， China； 2. Sino Analytica (Qingdao) Co. Ltd.， Qingdao 266002， China］

Dithianon residue was extracted with acidic acetonitrile，the extract was purified by anhydrous sodium sulfate and PSA powder，and separated by Agilent Poroshell 120 EC-C18column with methanol-water (volum ratio was 20∶80，containing 5 mmol／L ammonium acetate) as the mobile phase，and then determined by using liquid chromatography-tandem mass spectrometry under ESI negative ion mode. The linear relationship was fine in the range of 10-200 μg／L for dithianon, the relative coefficients r2＜0.999 8. The recovery was 71.8%-78.3 % with the relative standard deviations (RSDs) less than 5% (n=6)，and the quantification limit was 5 μg／kg. The developed method is simple，fast and can meet the requirements of determining dithianon in fresh strawberry.

liquid chromatography-tandem mass spectrometry; dithianon; strawberry

O657.7

A

1008-6145(2014)04-0048-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2014.04.014

聯(lián)系人：赫秀萍；E-mail: 13969879875@163.com

2014-03-27