史兵偉，秦峰，吳琳

（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬常州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，江蘇常州213003）

AtheNA Multi-Lyte系統(tǒng)在抗核抗體檢測中的應(yīng)用

史兵偉，秦峰，吳琳

（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬常州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，江蘇常州213003）

目的：探討AtheNA定量檢測系統(tǒng)在抗核抗體檢測中的性能，同時評價其對抗dsDNA抗體檢測的敏感性和特異性。方法：收集系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）標(biāo)本16例，其他自身免疫病標(biāo)本57例及健康對照標(biāo)本20例，分別以線性免疫印跡法（LIA法）和AtheNA系統(tǒng)進(jìn)行抗dsDNA，抗SSA，抗SSB，抗Sm，抗核糖核蛋白（RNP），抗Scl-70，抗Jo-1，抗著絲點B和抗組蛋白9種自身抗體檢測；同時以LIA法、間接免疫熒光（IIF）法、ELISA法和AtheNA系統(tǒng)4種方法檢測抗dsDNA抗體，評價不同檢測方法的性能。結(jié)果：LIA法和AtheNA系統(tǒng)對抗核抗體的檢測結(jié)果顯示，健康對照者與SLE患者、不同自身免疫病患者的總體陽性率相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。AtheNA系統(tǒng)與LIA法對9種自身抗體的檢測結(jié)果具有良好的一致性（P＜0.01）。LIA法、IIF法、ELISA法和AtheNA系統(tǒng)4種檢測方法對抗dsDNA抗體檢測結(jié)果顯示，AtheNA系統(tǒng)檢測抗dsDNA抗體具有較好的敏感性和特異性（68.8%，83.1%），但4種方法對SLE患者和其他自身免疫病患者的檢測陽性率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：AtheNA系統(tǒng)對抗核抗體的檢測具有良好的性能，其對抗dsDNA抗體的檢測具有較好的敏感性和特異性。

抗核抗體；線性免疫印跡法；AtheNA Multi-lyte系統(tǒng)

抗核抗體是一組以真核細(xì)胞的核成分為靶抗原，具有多種細(xì)胞核成分的自身抗體的總稱。目前，抗核抗體靶抗原的分布已由傳統(tǒng)的細(xì)胞核抗原擴展至整個細(xì)胞，可與不同來源的細(xì)胞核起反應(yīng)，無器官特異性和種屬特異性［1］?？购丝贵w不僅在多種自身免疫病中呈不同程度的陽性，而且還存在于在許多慢性疾?。ㄈ绺斡不?、慢性胃潰瘍）和某些腫瘤（如肝癌、肺癌、骨髓瘤、淋巴瘤等）患者的血清中［2］?？购丝贵w對自身免疫病的臨床診斷、鑒別診斷、療效評價和預(yù)后估計等具有一定的臨床意義。本文采用AtheNA Multi-Lyte檢測系統(tǒng)對抗核抗體和抗dsDNA抗體進(jìn)行檢測，并與其他方法進(jìn)行比較，探討AtheNA系統(tǒng)對抗核抗體的檢測性能，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象

收集本院2013年1月至9月期間的93份血清標(biāo)本，包括確診的系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者16例，其他自身免疫病患者57例和健康對照者血清20例。送檢人群的年齡范圍為24～74（42.2± 15.0）歲。

1.2 儀器與方法

AtheNA Multi-LyteTM抗核抗體檢測試劑盒（多重微珠免疫法）由美國宙斯公司提供，可半定量地檢測人血清中8種IgG抗體，包括抗SSA，抗SSB，抗Sm，抗核糖核蛋白（RNP），抗Scl-70，抗Jo-1，抗著絲點B和抗組蛋白，同時還可定量檢測人血清中抗dsDNA的IgG抗體及抗核抗體的IgG抗體。檢測時，取10μL稀釋血清（1∶200）與50μL微珠懸浮液，室溫溫育30 min，加50μL結(jié)合劑（羊抗人IgG-藻紅蛋白），溫育30 min后上機檢測。微粒通過流動室時，垂直的光分散器檢測每個微粒的顏色以及熒光強度，通過熒光—數(shù)字轉(zhuǎn)換系統(tǒng)轉(zhuǎn)換為最終結(jié)果，通過該方法可知總抗核抗體定性結(jié)果、每個特異性分析物的半定量值以及抗dsDNA的定量結(jié)果。

抗可提取的核抗原抗體譜檢測試劑盒（線性免疫印跡法，以下簡稱LIA法）、抗dsDNA抗體IgG酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒（ELISA法）和抗dsDNA抗體IgG間接免疫熒光檢測試劑盒（IIF法）均由德國歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷公司提供，按照其說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，陽性檢出率比較采用χ2檢驗，AtheNA系統(tǒng)與LIA法9種自身抗體檢測結(jié)果采用Kappa一致性檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AtheNA系統(tǒng)與LIA法檢測不同人群抗核抗體的總體陽性率比較

SLE組中兩種檢測方法的陽性率均為100%，在其他自身免疫病組和健康對照組中，LIA法的陽性率高于AtheNA系統(tǒng)，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。見表1。

表1 2種檢測系統(tǒng)對不同樣本抗核抗體檢測的陽性率比較

2.2 AtheNA系統(tǒng)與LIA法中9項自身抗體檢測結(jié)果比較

以LIA法為參考標(biāo)準(zhǔn)，AtheNA系統(tǒng)與LIA法檢測抗SSA、抗SSB、抗RNP、抗Sm、抗組蛋白、抗Jo-1、抗Scl-70和抗著絲點-B的單項符合率均大于85%，分別為90.3%，95.7%，93.5%，94.6%，90.3%，87.1%，98.9%，100.0%，抗dsDNA抗體的符合率為77.4%；對兩種方法檢測結(jié)果作一致性分析，均顯示良好一致性（P值均小于0.01）。見表2。

2.3 4種檢測方法抗dsDNA抗體陽性率比較

LIA法、IIF法、ELISA法和AtheNA系統(tǒng)4種檢測方法對3組抗dsDNA抗體檢測結(jié)果顯示，LIA法診斷的特異性最高，為90.9%，但敏感性較低，為43.8%；AtheNA系統(tǒng)定量檢測抗dsDNA抗體的敏感性最高，為68.8%，特異性為83.1%；IIF法和ELISA法的敏感性分別為37.5%和50.0%，不及AtheNA系統(tǒng)，但比較4種方法測得的兩組陽性檢出率，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。見表3。

表2 所有送檢樣本AtheNA系統(tǒng)與LIA法9項自身抗體檢測結(jié)果

表3 不同檢測方法檢測抗dsDNA抗體的陽性率

3 討論

LIA法的原理是在反應(yīng)膜條上平行包被多種高度純化或重組的抗原物質(zhì)，一次可檢測多種與自身免疫病相關(guān)的自身抗體，屬于抗核抗體確認(rèn)檢測中的一種，具有易實現(xiàn)自動化、操作簡單快速、結(jié)果判讀方便等優(yōu)點［3－4］。而AtheNA系統(tǒng)結(jié)合了熒光編碼微球技術(shù)、激光分析技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)等，為抗核抗體的分析提供了一種高精度、易于操作的方法，實現(xiàn)了在單一微孔中對多種抗體的同時檢測，具有高通量、高速度、低成本、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好、靈敏度高、線性范圍廣等優(yōu)點［5］。本文采用LIA法和A-theNA系統(tǒng)對93份不同來源的血液樣本進(jìn)行分析，以歐蒙印跡膜條檢驗各種可溶性自身抗體作對照，AtheNA檢測相應(yīng)結(jié)果與之對比，所有項目均有良好相關(guān)性。兩種方法在總體符合率方面一致性較高，對9項可溶性自身抗體檢出結(jié)果一致，說明AtheNA系統(tǒng)對抗核抗體的檢測具有很好的臨床應(yīng)用價值。

SLE是一種累及多器官、多系統(tǒng)的小血管及結(jié)締組織疾病，病程中往往復(fù)發(fā)與緩解交替出現(xiàn)，患者體內(nèi)可產(chǎn)生針對核酸、核蛋白和組蛋白的抗核抗體及其他自身抗體，其中dsDNA就是SLE診斷和療效觀察中最有效的自身抗體。有文獻(xiàn)報道，在抗dsDNA抗體的檢測中，IIF法具有靈敏度高、操作簡單等優(yōu)勢［6］，但會因干擾現(xiàn)象或者基質(zhì)中部分靶抗原分布不均而產(chǎn)生假陽性結(jié)果。ELISA法操作簡單，更適用于大批量標(biāo)本的檢測［7］。本文采用LIA法、IIF法、ELISA法和AtheNA系統(tǒng)4種檢測方法對抗dsDNA抗體進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示AtheNA系統(tǒng)檢測抗dsDNA抗體的敏感性和特異性綜合指標(biāo)最好；與其他3種方法相比，AtheNA系統(tǒng)檢測出的抗dsDNA結(jié)果為定量結(jié)果，符合SLE患者動態(tài)觀察的需要，敏感性高于其他3種方法。研究認(rèn)為，這種敏感性是由于所用抗原基質(zhì)及測定方法不同所致［8］。

作為一種新型的自身抗體自動化檢測技術(shù)，A-theNA系統(tǒng)具有較好的精確度和敏感性，且操作簡便，適合高通量篩選，實現(xiàn)了在單一微孔中對多種抗體同時檢測［5，9］，可溶性自身抗體檢出效率與歐蒙印跡膜條相當(dāng)，抗dsDNA檢測能提供可靠的定量結(jié)果。因此，在臨床診治自身免疫病中，AtheNA為多種可溶性抗體的同時檢測提供了一種簡便易行的方法。

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Application of AtheNA Multi-Lyte system in the detection of antinuclear antibodies

SHIBing-wei，QIN Feng，WU Lin

（Clinical Laboratory，Changzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Changzhou Jiangsu 213003，China）

Objective：To access the detection property of AtheNA system in antinuclear antibodies and anti-dsDNA antibodies.M ethods：Ninety and three serum sampleswere tested utilizing the AtheNA system and LIAmethod：16 samples from patientswith systemic lupus erythematosus（SLE），57 samples from other known autoimmune diseases and 20 healthy donors.The antinuclear autoantibodies to nine different analytes（SSA，SSB，Sm，RNP，Jo-1，Scl-70，dsDNA，Centromere B and Histone）were tested.Meanwhile，the dsDNA antibodieswere tested using line immunoassay（LIA），IIF，ELISA and the AtheNA system.Results：There were no significant difference in the antinuclear antibodies detected in three subjects.Antinuclear autoantibodies screening by AtheNA system revealed high concordance with the LIA in samples obtained from 16 samples from patients with SLE，20 healthy donors，57 samples from other known autoimmune diseases samples，respectively.The test results of4methods showed that the sensitivity and specificity of AtheNA system was better in anti-dsDNA antibody test（68.8%，83.1%）than other threemethods.Conclusion：The AtheNA system is a sensitive and automaticmethod for simultaneous quantitative detection of antinuclear antibodies and anti-dsDNA antibodies profiles.

antinuclear antibody；line immunoassay；AtheNA Multi-Lyte system

R446.62

A

1671－7783（2014）01－0044－04

10.13312／j.issn.1671-7783.y130229

史兵偉（1971—），男，江蘇常州人，副主任技師，主要從事自身免疫病等研究。

2013－10－14 ［編輯］劉星星