辛 穎

子宮內(nèi)膜腺癌中熱休克蛋白70、90的表達(dá)及其臨床意義

辛 穎

目的 分析子宮內(nèi)膜腺癌組織中的熱休克蛋白70、90的表達(dá)和其臨床意義。方法 使用免疫組化Envision法和圖像分析儀，檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜、增生過長(zhǎng)子宮內(nèi)膜以及子宮內(nèi)膜腺癌中的熱休克蛋白70、90的表達(dá)。結(jié)果 子宮內(nèi)膜腺癌中的熱休克蛋白70表達(dá)灰度值為（209．05±5．35），比正常內(nèi)膜（145．20±4．08）明顯更高，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。其與增生過長(zhǎng)內(nèi)膜（148．58±4．22）相比也有顯著性差異（P＜0．05）；子宮內(nèi)膜腺癌中熱休克蛋白90其表達(dá)灰度值為（166．87±5．70），與正常子宮內(nèi)膜（208．56±3．13）和增生過長(zhǎng)子宮內(nèi)膜（249．72±4．62）差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。結(jié)論 熱休克蛋白70、90與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生有密切關(guān)系，并對(duì)子宮內(nèi)膜腺癌的診斷及判斷腫瘤的惡性程度以及治療有參考價(jià)值。

子宮內(nèi)膜腺癌；熱休克蛋白；免疫組織化學(xué)

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，以來源于子宮內(nèi)膜腺體的腺癌最常見[1]。為女生生殖道三大惡性腫瘤之一，出現(xiàn)概率最高的年齡段是58～61歲，分為雌激素依賴性和非雌激素依賴性兩種發(fā)病機(jī)制[2]。但是關(guān)于子宮內(nèi)膜病變的分子病理學(xué)機(jī)制的了解還非常少。熱休克蛋白體系中熱休克蛋白(heat shock protein， HSP) 70、90與腫瘤的發(fā)生具有相關(guān)性。本次研究中使用免疫組織化學(xué)法以及圖像分析儀對(duì)子宮內(nèi)膜腺癌組織當(dāng)中的熱休克蛋白70、90表達(dá)方式以及臨床意義進(jìn)行了探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院2013年10月～2014年5月入院進(jìn)行子宮切除或者內(nèi)膜刮除的正常子宮內(nèi)膜、增生過長(zhǎng)子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜腺癌標(biāo)本的蠟塊，正常內(nèi)膜50例，年齡34～63歲，平均年齡（54.00±5.39）歲；增生過長(zhǎng)內(nèi)膜55例，平均年齡（52.00±6.77）歲，子宮內(nèi)膜腺癌45例，年齡33～64歲，平均年齡（53.00±6.80）歲。所有研究標(biāo)本全部經(jīng)過HE染色，經(jīng)過病理學(xué)檢測(cè)確診，子宮內(nèi)膜腺癌患者在手術(shù)前均未經(jīng)化療，所有患者手術(shù)前半年均未使用過雌激素藥物，也無合并任何其他惡性腫瘤。

1.2 方法 所有檢測(cè)標(biāo)本當(dāng)中的熱休克蛋白70、90表達(dá)，全部使用Envision免疫組化染色法做檢測(cè)，把石蠟切片經(jīng)過二甲苯做脫蠟操作、梯度酒精入水和PSB沖洗之后，將其放在微波爐中加入0.01 mol/L的枸櫞酸鈉緩沖液做抗原修復(fù)操作，每次持續(xù)時(shí)間5 min，一共進(jìn)行2次。待其自然冷卻之后，再另外加入30 mL/L的過氧化氫放置在常溫環(huán)境中0.5 h，封閉內(nèi)源性過氧化物酶。之后再使用20 mL/L的正常指標(biāo)山羊血清將非特異性抗原封閉10 min。

使用濾紙將血清吸去，各加入兔抗人熱休克蛋白70、90抗體her山羊抗兔IgG，之后使用DAB做顯色，同時(shí)還有蘇水精復(fù)染、脫水、透明以及樹膠封片等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 結(jié)果選擇LeicaQ 500 Mc當(dāng)成圖像分析儀，對(duì)其做半定量操作分析，另外一種灰度值對(duì)結(jié)果的差異進(jìn)行判定。本組數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與分析，正態(tài)計(jì)量資料結(jié)果用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

子宮內(nèi)膜腺癌中，HSP 70的表達(dá)相比正常子宮內(nèi)膜以及增生過長(zhǎng)子宮內(nèi)膜明顯更強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；子宮內(nèi)膜腺癌中HSP 90表達(dá)和正常內(nèi)膜以及增生過長(zhǎng)子宮內(nèi)膜相比明顯減弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

表1 不同子宮內(nèi)膜中熱休克蛋白70、90的表達(dá)

3 討論

熱休克蛋白是機(jī)體細(xì)胞在一些理化因素刺激后高效表達(dá)的一組蛋白質(zhì)，又稱為應(yīng)激蛋白(stress protein，CSP)或分子伴侶(Chaperones)。HSP是生物細(xì)胞（包括原核細(xì)胞及真核細(xì)胞）在受熱、生物應(yīng)激、理化因素等應(yīng)激原刺激后，發(fā)生熱休克反應(yīng)時(shí)所產(chǎn)生的一類在生物進(jìn)化中最保守并由熱休克基因編碼的伴隨細(xì)胞蛋白。因最先發(fā)現(xiàn)于果蠅唾液腺的熱應(yīng)激反應(yīng)中而得名?，F(xiàn)在已經(jīng)有研究結(jié)果顯示，熱休克蛋白和腫瘤的出現(xiàn)以及腫瘤細(xì)胞的增殖和調(diào)亡有密切聯(lián)系[3-4]。熱休克蛋白70是進(jìn)化上高度保守的一種的蛋白質(zhì)，具有細(xì)胞保護(hù)及抗細(xì)胞凋亡功能，并參與免疫調(diào)節(jié)。熱休克蛋白90參與細(xì)胞中眾多信號(hào)蛋白的構(gòu)象成熟和功能穩(wěn)定的調(diào)控，而這些信號(hào)蛋白的過度表達(dá)或突變能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖及存活。

子宮內(nèi)膜腺癌中熱休克蛋白70的表達(dá)對(duì)于腫瘤細(xì)胞的損傷保護(hù)性明顯，內(nèi)膜腺癌組織中的熱休克蛋白90表達(dá)有明確的抗腫瘤活性，并與腫瘤細(xì)胞有高親和力，可選擇性地殺傷腫瘤細(xì)胞。研究表明，當(dāng)子宮內(nèi)膜腺癌中的熱休克蛋白HSP 70表達(dá)越高時(shí)，相應(yīng)的熱休克蛋白90表達(dá)就會(huì)越弱，其細(xì)胞分化程度也更低，臨床表現(xiàn)的惡性程度也相應(yīng)的越高[5]。所以熱休克蛋白70、90可以作為對(duì)子宮內(nèi)膜腺癌的診斷及判斷腫瘤的惡性程度的一項(xiàng)重要生物學(xué)指標(biāo)。對(duì)控制熱休克蛋白70、90的表達(dá)能夠有效的抑制腫瘤細(xì)胞增生和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，將其和腫瘤化療藥物結(jié)合能夠有效提升子宮內(nèi)膜腺癌的臨床治療效果[6]。

本研究中，正常子宮內(nèi)膜和增生過長(zhǎng)子宮內(nèi)膜中均有熱休克蛋白70、90表達(dá)，與前期的報(bào)道一致[8]，提示熱休克蛋白70、90對(duì)維持正常子宮內(nèi)膜的生長(zhǎng)和功能具有積極作用。與正常子宮內(nèi)膜和增生過長(zhǎng)子宮內(nèi)膜相比，熱休克蛋白70在子宮內(nèi)膜腺癌中表達(dá)量增加，熱休克蛋白90表達(dá)量下降，提示熱休克蛋白70、90表達(dá)對(duì)內(nèi)膜腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)的作用不同。目前有研究表明，熱休克蛋白90在膽囊癌及乳腺癌組織中高表達(dá)[7-8]，但本研究中，子宮內(nèi)膜腺癌組織中熱休克蛋白90表現(xiàn)為低表達(dá)，其機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

本次研究結(jié)果顯示，在子宮內(nèi)膜腺癌中，熱休克蛋白70高表達(dá)，而熱休克蛋白90低表達(dá)。說明熱休克蛋白70、90與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生有密切聯(lián)系，對(duì)子宮內(nèi)膜腺癌的診斷、判斷腫瘤惡性程度以及治療有一定參考價(jià)值。在今后的研究中，可以針對(duì)熱休克蛋白70、90表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)性進(jìn)行進(jìn)一步分析。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2014.35.046

遼寧 116001 大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院（辛穎）