吳寶成　馮煦　顧紅梅等

摘要：對引種至南京春播和秋播的杭白芷、川白芷、祁白芷、禹白芷、亳白芷的產(chǎn)量和根中香豆素成分進(jìn)行HPLC測定并進(jìn)行了比較。本試驗(yàn)所建立的HPLC同時(shí)測定白芷5種香豆素成分的方法易于操作、靈敏度高、重復(fù)性好，適合香豆素成分的檢測。引種至南京的白芷秋播的產(chǎn)量顯著高于春播，其中江蘇射陽的杭白芷秋播產(chǎn)量最高，隨著收獲期的延長，產(chǎn)量有一定的增加，但增產(chǎn)幅度不明顯。引種至南京的白芷秋播香豆素成分含量普遍比春播高；秋播的川白芷和杭白芷香豆素成分含量均超過1.00%，春播和秋播的香豆素成分含量比祁白芷、禹白芷和亳白芷都高，其中來源于江蘇射陽的秋播杭白芷香豆素成分含量達(dá)到1.10%，來源于河北安國的祁白芷僅為0.47%。川白芷和杭白芷更適應(yīng)在江蘇生長，產(chǎn)量和香豆素成分含量高于其他種質(zhì)來源。秋播利于生物量和香豆素成分的積累，優(yōu)于春播。

關(guān)鍵詞：白芷；產(chǎn)量；香豆素成分；評價(jià)

中圖分類號： S567.23+9.024 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0258-03

收稿日期：2013-09-22

基金項(xiàng)目：江蘇省產(chǎn)學(xué)研聯(lián)合創(chuàng)新資金（編號：BY2009145）。

作者簡介：吳寶成（1980—），男，江蘇南京人，碩士，助理研究員，從事藥用植物化學(xué)和資源研究。Tel：（025）84347105；E-mail：wubaocheng2015@163.com。

通信作者：馮煦，研究員，博士生導(dǎo)師，主要從事植物化學(xué)研究。Tel：（025）84347158；E-mail：fxu026@163.com。中藥白芷為傘形科植物白芷（Angelica dahurica）或杭白芷（Angelica dahurica）等的干燥根，具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿的功效，可用于感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞等癥的治療[1]。同時(shí)中藥白芷還可用于保健品和化妝品，也是一種良好的調(diào)味料和香料。

作為常用中藥材，白芷的人工栽培歷史悠久，全國大部分省區(qū)均有栽培。商品及藥用上有川白芷、杭白芷、祁白芷、禹白芷之分。經(jīng)過長期人工栽培和適生性生長，不同產(chǎn)地白芷已明顯區(qū)別于野生白芷，并形成相對各自獨(dú)立的產(chǎn)地特性[2]。近年來由于安徽亳州白芷的種植規(guī)模和產(chǎn)量在市場上占據(jù)了一定比例，亳白芷也成為新的中藥白芷的來源。生產(chǎn)上，白芷一般秋播，也可春播[3-4]。國內(nèi)外對于白芷化學(xué)成分的研究比較多，也比較深入，僅江蘇省中國科學(xué)院植物研究所就對白芷進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，已分離鑒定化合物43種，其中大多數(shù)為香豆素類成分[5-7]。同時(shí)藥理研究表明，白芷所含的香豆素類成分大多具有光敏感作用，可用于對白癜風(fēng)的治療。

根據(jù)筆者歷年收集的市售白芷藥材的情況看，目前各地藥材的香豆素類成分含量參差不齊，但絕大多數(shù)都在0.5%以下，有的甚至低于0.1%，遠(yuǎn)低于江蘇省中國科學(xué)院植物研究所20世紀(jì)80年代進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)時(shí)市場隨意購得的白芷藥材（當(dāng)時(shí)通常都在1%～2%范圍內(nèi)）。江蘇作為杭白芷的傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)，與其他產(chǎn)區(qū)的白芷存在相同的問題。

為篩選江蘇本地適生、穩(wěn)產(chǎn)、香豆素成分含量高的白芷種質(zhì)資源，本研究將不同種質(zhì)來源的白芷引種至江蘇南京，經(jīng)過秋播、春播栽培，利用HPLC方法對其根部有效化學(xué)成分5種香豆素進(jìn)行檢測和比較，旨在為江蘇白芷的生產(chǎn)提供理論和應(yīng)用依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料及栽培地點(diǎn)

材料：2009年10月采集中國白芷幾個重要產(chǎn)區(qū)收獲的白芷種子，包括杭白芷（江蘇射陽）、禹白芷（河南禹州）、祁白芷（河北安國）、杭白芷（浙江磐安）、川白芷（四川遂寧）和亳白芷（安徽亳州）。采集的白芷種子及實(shí)生苗由江蘇省中國科學(xué)院植物研究所王年鶴研究員鑒定。地點(diǎn)：南京中山植物園北園（海拔40 m）。

1.2方法

1.2.1白芷種質(zhì)資源栽培分別于2009年11月23日和2010年4月15日條播江蘇射陽杭白芷、禹白芷、祁白芷、浙江磐安杭白芷、川白芷和亳白芷。播種前施基肥750 kg/hm2，適時(shí)間苗，株行距20 cm×35 cm，常規(guī)田間管理，生長旺盛期追肥1次，450 kg/hm2，基肥和追肥均為三元復(fù)合肥（全氮4.77%、全磷0.91%、全鉀0.85%、有機(jī)質(zhì)62.3%）。于2010年10月13日和2011年11月10日采收期內(nèi)隨機(jī)采收5株白芷稱量生物量，折算成單位面積的產(chǎn)量。3次重復(fù)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel和SPSS for Windows軟件進(jìn)行分析和顯著性測驗(yàn)。

1.2.2樣品溶液制備及測定按照趙友誼等的方法[8]進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算樣品中比克白芷素、氧化前胡素、歐前胡素、珊瑚菜內(nèi)酯、異歐前胡素等5種香豆素成分的總含量。

1.2.3儀器裝置與藥品LiBORAR AEL-200電子分析天平（島津公司）；Agilent 1100 series 高效液相色譜儀，搭配UV檢測器（美國安捷倫科技公司）；Agilent化學(xué)工作站完成色譜數(shù)據(jù)處理；Phenomenex Gemini C18（250 mm×4.60 mm，5 μm）色譜柱。對照品比克白芷素、氧化前胡素、歐前胡素、珊瑚菜內(nèi)酯、異歐前胡素均為筆者所在實(shí)驗(yàn)室自行分離純化所得，經(jīng)NMR、MS等方法鑒定其結(jié)構(gòu)，HPLC檢測純度，均在98%以上。試驗(yàn)所用水均為去離子蒸餾水。

2結(jié)果與分析

2.1方法學(xué)考察

精確吸取混合對照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，相同色譜條件測定含量。結(jié)果各標(biāo)準(zhǔn)品含量的RSD均小于2.13%，表明精確度良好。

取同一供試品溶液，重復(fù)提取5份，相同色譜條件測定含量，結(jié)果表明各標(biāo)準(zhǔn)品含量的RSD均小于2.05%，表明重復(fù)性良好。

量取已知含量的供試品溶液1～10 mL至容量瓶，加甲醇定容至10 mL。分別精確加入5種香豆素對照品適量，測定各標(biāo)準(zhǔn)品的含量計(jì)算回收率，5種香豆素成分的平均回收率分別為97.8%、103.3%、100.1%、102.7%、97.1%，RSD值分別為1.59%、1.16%、2.36%、0.29%、2.10%。endprint

本試驗(yàn)所建立的HPLC同時(shí)測定白芷香豆素成分的方法，通過精確度、重復(fù)性和加樣回收試驗(yàn)，表明該方法易于操作、靈敏度高、精確度高、重復(fù)性好，適合香豆素成分的檢測。

2.2不同產(chǎn)地白芷的產(chǎn)量和香豆素成分含量的比較

產(chǎn)量和香豆素成分是白芷質(zhì)量的主要評價(jià)指標(biāo)。對不同種質(zhì)來源的白芷產(chǎn)量和香豆素成分的含量進(jìn)行分析，結(jié)果見表1、表2。

3結(jié)論與討論

白芷香豆素成分為多基因控制的數(shù)量性狀，受到自然條件和其自身遺傳的影響。本試驗(yàn)研究表明，白芷秋播的播種至收獲期的生長時(shí)間比春播多出近5個月，有利于香豆素成分的積累和生物量的積累，因此含量和產(chǎn)量普遍高于春播。雖然隨著采收時(shí)間的推遲，川、杭白芷香豆素成分含量略有下降而祁、禹、亳白芷有所增加，但考慮到種植成本和香豆素成分的含量，川、杭白芷更適應(yīng)在江蘇生長，表現(xiàn)為香豆素成分含量和產(chǎn)量均明顯高于祁、禹白芷，也高于亳白芷。這不一定就是后者的含量和產(chǎn)量一定低于前者，可能是川、杭白芷更適應(yīng)在江蘇生長，祁、禹、亳白芷更適應(yīng)在原產(chǎn)地生長。川、杭白芷的香豆素成分含量更高，產(chǎn)量也相對較高，這可能是由于江蘇與杭白芷的原產(chǎn)區(qū)地理距離較近，杭白芷在江蘇種植歷史比較悠久有關(guān)。

由于長期適應(yīng)原產(chǎn)地的氣候特點(diǎn)，原產(chǎn)地不同的白芷形成了各自固有的遺傳性（基因型）。歷史上白芷分為杭白芷、川白芷、禹白芷、祁白芷4個主要地方品種。在近數(shù)十年來安徽亳州因大量種植白芷，形成了一定的種植規(guī)模和使用習(xí)慣，亳白芷也成為一個新的白芷地方品種。已有的形態(tài)解剖[9]、染色體核型、花粉形態(tài)[10]、香豆素成分[11]以及栽培歷史[12]等方面的研究表明，白芷可分為川（杭）白芷、祁（禹）白芷兩大類，但并未形成生物學(xué)意義上有明顯差別的栽培品種。本試驗(yàn)表明，川白芷、杭白芷、祁白芷、禹白芷、亳白芷在江蘇引種栽培的表現(xiàn)并不相同，造成不同來源白芷在江蘇栽培表現(xiàn)差異的原因有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2009：98.

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[6]賈曉東，趙興增，馮煦，等. 杭白芷香豆素類成分的研究（Ⅱ）[J]. 中草藥，2008，39（12）：1768-1771.

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[9]王年鶴，秦慧貞，黃璐琦，等. 中藥白芷的基原植物研究Ⅰ. 中藥白芷及其野生近緣植物的形態(tài)解剖[J]. 中國中藥雜志，2001，26（8）：529-533.

[10]王年鶴，秦慧貞，舒璞，等. 中藥白芷的基原植物研究Ⅱ. 中藥白芷及其野生近緣植物的染色體核型和花粉形態(tài)[J]. 中國中藥雜志，2001，26（9）：584-588.

[11]王年鶴，谷口雅彥，楊濱，等. 中藥白芷的基原植物研究Ⅲ. 中藥白芷及其野生近緣植物的香豆素類成分比較[J]. 中國中藥雜志，2001，26（10）：669-671.

[12]王年鶴，黃璐琦，楊濱，等. 中藥白芷的基原植物研究Ⅳ. 白芷的基原植物、栽培歷史以及其近緣野生植物演化的討論[J]. 中國中藥雜志，2001，26（11）：733-736.endprint

本試驗(yàn)所建立的HPLC同時(shí)測定白芷香豆素成分的方法，通過精確度、重復(fù)性和加樣回收試驗(yàn)，表明該方法易于操作、靈敏度高、精確度高、重復(fù)性好，適合香豆素成分的檢測。

2.2不同產(chǎn)地白芷的產(chǎn)量和香豆素成分含量的比較

產(chǎn)量和香豆素成分是白芷質(zhì)量的主要評價(jià)指標(biāo)。對不同種質(zhì)來源的白芷產(chǎn)量和香豆素成分的含量進(jìn)行分析，結(jié)果見表1、表2。

3結(jié)論與討論

白芷香豆素成分為多基因控制的數(shù)量性狀，受到自然條件和其自身遺傳的影響。本試驗(yàn)研究表明，白芷秋播的播種至收獲期的生長時(shí)間比春播多出近5個月，有利于香豆素成分的積累和生物量的積累，因此含量和產(chǎn)量普遍高于春播。雖然隨著采收時(shí)間的推遲，川、杭白芷香豆素成分含量略有下降而祁、禹、亳白芷有所增加，但考慮到種植成本和香豆素成分的含量，川、杭白芷更適應(yīng)在江蘇生長，表現(xiàn)為香豆素成分含量和產(chǎn)量均明顯高于祁、禹白芷，也高于亳白芷。這不一定就是后者的含量和產(chǎn)量一定低于前者，可能是川、杭白芷更適應(yīng)在江蘇生長，祁、禹、亳白芷更適應(yīng)在原產(chǎn)地生長。川、杭白芷的香豆素成分含量更高，產(chǎn)量也相對較高，這可能是由于江蘇與杭白芷的原產(chǎn)區(qū)地理距離較近，杭白芷在江蘇種植歷史比較悠久有關(guān)。

由于長期適應(yīng)原產(chǎn)地的氣候特點(diǎn)，原產(chǎn)地不同的白芷形成了各自固有的遺傳性（基因型）。歷史上白芷分為杭白芷、川白芷、禹白芷、祁白芷4個主要地方品種。在近數(shù)十年來安徽亳州因大量種植白芷，形成了一定的種植規(guī)模和使用習(xí)慣，亳白芷也成為一個新的白芷地方品種。已有的形態(tài)解剖[9]、染色體核型、花粉形態(tài)[10]、香豆素成分[11]以及栽培歷史[12]等方面的研究表明，白芷可分為川（杭）白芷、祁（禹）白芷兩大類，但并未形成生物學(xué)意義上有明顯差別的栽培品種。本試驗(yàn)表明，川白芷、杭白芷、祁白芷、禹白芷、亳白芷在江蘇引種栽培的表現(xiàn)并不相同，造成不同來源白芷在江蘇栽培表現(xiàn)差異的原因有待進(jìn)一步研究。

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[6]賈曉東，趙興增，馮煦，等. 杭白芷香豆素類成分的研究（Ⅱ）[J]. 中草藥，2008，39（12）：1768-1771.

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[10]王年鶴，秦慧貞，舒璞，等. 中藥白芷的基原植物研究Ⅱ. 中藥白芷及其野生近緣植物的染色體核型和花粉形態(tài)[J]. 中國中藥雜志，2001，26（9）：584-588.

[11]王年鶴，谷口雅彥，楊濱，等. 中藥白芷的基原植物研究Ⅲ. 中藥白芷及其野生近緣植物的香豆素類成分比較[J]. 中國中藥雜志，2001，26（10）：669-671.

[12]王年鶴，黃璐琦，楊濱，等. 中藥白芷的基原植物研究Ⅳ. 白芷的基原植物、栽培歷史以及其近緣野生植物演化的討論[J]. 中國中藥雜志，2001，26（11）：733-736.endprint

本試驗(yàn)所建立的HPLC同時(shí)測定白芷香豆素成分的方法，通過精確度、重復(fù)性和加樣回收試驗(yàn)，表明該方法易于操作、靈敏度高、精確度高、重復(fù)性好，適合香豆素成分的檢測。

2.2不同產(chǎn)地白芷的產(chǎn)量和香豆素成分含量的比較

產(chǎn)量和香豆素成分是白芷質(zhì)量的主要評價(jià)指標(biāo)。對不同種質(zhì)來源的白芷產(chǎn)量和香豆素成分的含量進(jìn)行分析，結(jié)果見表1、表2。

3結(jié)論與討論

白芷香豆素成分為多基因控制的數(shù)量性狀，受到自然條件和其自身遺傳的影響。本試驗(yàn)研究表明，白芷秋播的播種至收獲期的生長時(shí)間比春播多出近5個月，有利于香豆素成分的積累和生物量的積累，因此含量和產(chǎn)量普遍高于春播。雖然隨著采收時(shí)間的推遲，川、杭白芷香豆素成分含量略有下降而祁、禹、亳白芷有所增加，但考慮到種植成本和香豆素成分的含量，川、杭白芷更適應(yīng)在江蘇生長，表現(xiàn)為香豆素成分含量和產(chǎn)量均明顯高于祁、禹白芷，也高于亳白芷。這不一定就是后者的含量和產(chǎn)量一定低于前者，可能是川、杭白芷更適應(yīng)在江蘇生長，祁、禹、亳白芷更適應(yīng)在原產(chǎn)地生長。川、杭白芷的香豆素成分含量更高，產(chǎn)量也相對較高，這可能是由于江蘇與杭白芷的原產(chǎn)區(qū)地理距離較近，杭白芷在江蘇種植歷史比較悠久有關(guān)。

由于長期適應(yīng)原產(chǎn)地的氣候特點(diǎn)，原產(chǎn)地不同的白芷形成了各自固有的遺傳性（基因型）。歷史上白芷分為杭白芷、川白芷、禹白芷、祁白芷4個主要地方品種。在近數(shù)十年來安徽亳州因大量種植白芷，形成了一定的種植規(guī)模和使用習(xí)慣，亳白芷也成為一個新的白芷地方品種。已有的形態(tài)解剖[9]、染色體核型、花粉形態(tài)[10]、香豆素成分[11]以及栽培歷史[12]等方面的研究表明，白芷可分為川（杭）白芷、祁（禹）白芷兩大類，但并未形成生物學(xué)意義上有明顯差別的栽培品種。本試驗(yàn)表明，川白芷、杭白芷、祁白芷、禹白芷、亳白芷在江蘇引種栽培的表現(xiàn)并不相同，造成不同來源白芷在江蘇栽培表現(xiàn)差異的原因有待進(jìn)一步研究。

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[11]王年鶴，谷口雅彥，楊濱，等. 中藥白芷的基原植物研究Ⅲ. 中藥白芷及其野生近緣植物的香豆素類成分比較[J]. 中國中藥雜志，2001，26（10）：669-671.

[12]王年鶴，黃璐琦，楊濱，等. 中藥白芷的基原植物研究Ⅳ. 白芷的基原植物、栽培歷史以及其近緣野生植物演化的討論[J]. 中國中藥雜志，2001，26（11）：733-736.endprint