袁霞，柴克霞，秦雅婧，楊潔，胡月正

（1.青海大學附屬醫(yī)院血液風濕科，青海 西寧 810001；2.溫州醫(yī)學院第二醫(yī)院骨科，浙江 溫州 325027）

醋氯芬酸對骨關節(jié)炎軟骨細胞增殖和基質代謝的影響

袁霞1，柴克霞1，秦雅婧1，楊潔1，胡月正2

（1.青海大學附屬醫(yī)院血液風濕科，青海 西寧 810001；2.溫州醫(yī)學院第二醫(yī)院骨科，浙江 溫州 325027）

目的探討醋氯芬酸對骨關節(jié)炎軟骨細胞增殖和基質代謝的影響。方法選擇2011年9月～2013年9月于青海大學附屬醫(yī)院就診的65例骨關節(jié)炎患者，根據隨機分組原則分成觀察組（n＝35），采用醋氯芬酸治療；對照組（n＝30），采用布洛芬治療。比較2組患者治療后的療效差異，比較觀察組患者與對照組患者的人關節(jié)軟骨細胞的5-溴脫氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine，BrdU）陽性率、蛋白多糖（proteoglycan，PG）與Ⅱ型膠原含量。結果觀察組和治療組患者治療有效率分別為74.29%、73.33%，組間比較差異無統(tǒng)計學意義；觀察組患者關節(jié)活動痛、關節(jié)壓痛、15米行走時間、日?；顒幽芰εc對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；觀察組不良反應發(fā)生率顯著低于對照組（P＜0.05）；2組BrdU陽性率之間的比較差異無統(tǒng)計學意義，觀察組Ⅱ型膠原含量顯著高于對照組（P＜0.05），觀察組PG含量顯著低于對照組（P＜0.05）。結論醋氯芬酸治療骨關節(jié)炎療效佳，不良反應發(fā)生率低，醋氯芬酸通過促進Ⅱ型膠原分泌和減少PG生成緩解患者的臨床癥狀。

醋氯芬酸；骨關節(jié)炎；軟骨細胞；增殖；代謝

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機選取2011年9月至2013年9月于青海大學附屬醫(yī)院血液風濕科就診的65例骨關節(jié)炎患者，納入標準：符合骨關節(jié)炎的診斷標準［3］，排除感染、發(fā)熱、血液疾病、惡性腫瘤、合并類風濕性關節(jié)炎及其他關節(jié)炎癥性疾病患者。經倫理委員會批準，并與患者簽署知情同意書。隨機分為2組，觀察組35例，男12例，女23例，年齡25～77歲，平均（46.87±12.04）歲，病程10～21月，平均病程（11.89±5.14）月；對照組30例，男9例，女21例，年齡27～75歲，平均（47.01±10.72）歲，病程12～20月，平均病程（12.04±6.07）月；2組患者在性別、年齡、病程等一般情況上的差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 材料與方法 全部患者均停用非甾體類抗炎藥2周后進行藥物治療，觀察組患者給予醋氯芬酸腸溶膠囊（廣州白云山光華制藥公司，國藥準字 H20050479）100mg，2次／d，口服，早晚餐后服用；對照組患者給予布洛芬緩釋膠囊（吉林力勝制藥公司，國藥準字 H22026083）300mg，2次／d，口服，早晚餐后服用。2組患者服藥療程均為3個月。治療前即取觀察組患者與對照組患者的第1代骨關節(jié)炎軟骨細胞分別進行培養(yǎng)，觀察組給予醋氯芬酸，對照組給予布洛芬，藥物溶于二甲基亞砜中，充分搖勻后配成溶液，探討不同藥物對細胞增殖與代謝的影響。主要選用的實驗儀器與試劑：培養(yǎng)基、Ⅱ型膠原酶、Ⅱ型膠原抗體和5-溴脫氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine，BrdU）購買自圣克魯斯生物公司，ELISA試劑盒購自深圳新博盛生物公司。

1.3 觀察指標

1.3.1 臨床指標：記錄患者治療后膝關節(jié)活動痛（正常0分，上下樓有癥狀、屈伸無影響為2分，上下樓有癥狀、下蹲疼痛為4分，行走疼痛為6分）、關節(jié)壓痛指數（正常0分，重壓時疼痛為2分，重度壓力疼痛為4分，輕度壓痛為6分）、15米行走時間、日?；顒幽芰υu分（不受限為0分，輕度受限為2分，中度受限為4分，重度受限為6分）。臨床療效評價根據美國膝關節(jié)協(xié)會評分［4］：患者癥狀、體征和紅細胞沉降率（erythrocyte sedimentation tate，ESR）的改善程度＜30%提示治療無效，改善程度30%～49%提示好轉，改善程度50%～74%提示有效，改善程度≥75%提示顯效。安全性評價：記錄藥物不良反應情況和發(fā)生率，定期進行肝腎功能檢查。

1.3.2 實驗室指標：采用BrdU免疫熒光法檢測關節(jié)軟骨組織的軟骨細胞增殖能力，在熒光顯微鏡下觀察軟骨細胞的細胞核，細胞核呈綠色熒光的為BrdU陽性，記錄5個高倍視野（×100）下BrdU陽性細胞數與細胞總數，BrdU陽性率＝BrdU陽性細胞數／細胞總數×100%。取第3代軟骨細胞，采用ELISA方法檢測軟骨細胞的蛋白多糖（proteoglycan，PG）與Ⅱ型膠原的含量。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行分析，正態(tài)計量資料用“±s”表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2組患者臨床療效的比較 觀察組患者治療療效情況：5例好轉，15例有效，6例顯效，總有效人數為26例，總有效率74.29%；觀察組患者治療療效情況：4例好轉，16例有效，2例顯效，總有效人數為22例，總有效率73.33%，2組患者治療有效率比較差異無統(tǒng)計學意義。觀察組4例患者出現(xiàn)惡心嘔吐、腹痛等不良反應，不良反應發(fā)生率為11.43%，對照組8例患者出現(xiàn)不良反應，不良反應發(fā)生率為26.67%，2組不良反應情況比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 2組患者臨床指標比較 觀察組患者關節(jié)活動痛評分、關節(jié)壓痛評分、15米行走時間、日?；顒幽芰υu分與對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表1）。

表1 2組患者臨床指標比較Tab.1 Comparison of clinical indicator in two groups

2.3 2組BrdU陽性率、PG、Ⅱ型膠原含量之間的比較 熒光顯微鏡下見胞核呈綠色熒光的細胞為BrdU陽性細胞（見圖1），統(tǒng)計患者軟骨細胞BrdU陽性率，2組BrdU陽性率之間的比較差異無統(tǒng)計學意義，觀察組Ⅱ型膠原含量顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義，對照組PG含量顯著高于觀察組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表2）。

圖1 熒光顯微鏡下的軟骨細胞BrdU陽性標記圖（×100）Fig.1 Fluorescencemicroscope cartilage cells of BrdU positive（×100）

表2 2組BrdU陽性率、PG、Ⅱ型膠原含量之間的比較Tab.2 Comparison of BrdU positive rate，PG and collagen typeⅡcontent in two groups

3 討論

本臨床研究表明，醋氯芬酸治療骨關節(jié)炎的療效較好，不良反應顯著低于布洛芬治療患者（P＜0.05），是一種有效安全的治療藥物。醋氯芬酸可增強骨關節(jié)炎患者軟骨細胞的細胞增殖能力與促進對Ⅱ型膠原的分泌，緩解患者關節(jié)疼痛，增加治療總有效率，同對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。布洛芬通過增強患者軟骨細胞增殖能力與促進PG分泌的途徑緩解患者的關節(jié)疼痛，達到治療的目的。醋氯芬酸通過促進Ⅱ型膠原的分泌抑制關節(jié)軟骨的退化，具有緩解關節(jié)疼痛與修復關節(jié)軟骨的作用［5-7］。但是，自身抗原產生的免疫反應對細胞增殖與基質代謝的影響、免疫反應在醋氯芬酸對軟骨細胞增殖與基質代謝影響中的作用有待進一步的臨床研究。陳海南等［8-11］研究表明：原發(fā)性骨關節(jié)炎不僅與職業(yè)性使用過度、肥胖、高齡等因素相關，更與自身抗原產生的免疫性反應相關，醋氯芬酸在治療骨關節(jié)炎方面具有顯著的療效與不良反應低等優(yōu)點，與本文結論類似。骨關節(jié)炎是一種復雜疾病，非甾體類抗炎藥可緩解患者的癥狀與體征，但是，醋氯芬酸對軟骨細胞基質代謝的影響需要綜合多種因素進行評價。黃瑛等［12-15］研究表明：自身抗原產生免疫反應對自身組織損傷也表現(xiàn)在抑制軟骨細胞增殖及基質代謝方面，主要病理表現(xiàn)為：T細胞活化異常后分化不同功能亞群并產生大量的細胞炎癥因子，造成關節(jié)滑膜炎癥性反應，軟骨骨質破壞，影響了關節(jié)軟骨細胞的基質代謝。因此，骨關節(jié)炎的免疫反應是一個復雜的過程，醋氯芬酸是否對軟骨細胞的增殖及基質代謝產生影響有待進一步的臨床探討。

［1］ 李路玲，鄭毅.非甾體抗炎藥對人骨關節(jié)炎軟骨細胞生長代謝的影響［J］.天津醫(yī)藥，2013，41（9）：860-864.

［2］ 歐云生，安洪，譚超，等.非甾體抗炎藥對大鼠骨關節(jié)炎關節(jié)軟骨細胞 IL-1β、TNF-α、IL-1α表達的影響［J］.重慶醫(yī)科大學學報，2013，38（3）：260-265.

［3］ 冀全博，張強，王巖帶.小板凝血酶敏感蛋白結構域的解聚素與金屬蛋白酶4、5在骨關節(jié)炎中作用的研究進展［J］.中國修復重建外科雜志，2013，27（9）：1080-1084.

［4］ Insall JN，Dorr LD，Scott RD，et al.Rationale of the Knee Society clinical rating system［J］.Clin Orthop Relat Res，1989（248）：13-14.

［5］ 曾玉，吳新忠.吲哚胺2，3-雙加氧酶與自身免疫性疾?。跩］.實用醫(yī)學雜志，2013，29（19）：3257-3259.

［6］ 朱芳曉，周潤華，石宇紅，等.小白菊內酯對兔膝骨關節(jié)炎血清IL-1β及 TNF—α的影響［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2013，33（10）：1382-1384.

［7］ 段成茜，高作寧.醋氯芬酸在nano-TiO2／PF6修飾碳糊電極上的電催化氧化及電分析方法［J］.藥物分析雜志，2012，32（2）：365-369.

［8］ 陳海南，董啟榕，姜偉，等.骨關節(jié)炎早期軟骨下骨三維結構變化及二磷酸鹽的干預效應［J］.中華創(chuàng)傷雜志，2013，29（8）：790-795.

［9］ Driban JB，Barr AE，Amin M，et al.Joint inflammation and early degeneration induced by high-force reaching are attenuated by ibuprofen in an animal model of work-related musculoskeletal disorder［J］.JBiomed Biotechnol，2011，69：12-14.

［10］ 林定齊.非甾體類抗炎藥及解熱鎮(zhèn)痛藥用藥情況分析［J］.當代醫(yī)學，2012，18（2）：132-133.

［11］ 郭鈺琪，齊冬梅，郝鈺.三七皂苷R1調節(jié)炎性T細胞亞群保護血管內皮的實驗研究［J］.中國藥理學通報，2012，28（2）：240-244.

［12］ 黃瑛，林志，李波，等.藥物誘導性自身免疫性疾病研究進展［J］.中國新藥雜志，2013，22（19）：2244-2249.

［13］ 杜國輝，屈愛存，陳建英.透明質酸對關節(jié)軟骨蛋白聚糖aggrecan的影響［J］.中國生化藥物雜志，2011，32（2）：125-127.

［14］ Prasadam I，Crawford R，Xiao Y.Aggravation of ADAMTS and matrix metalloproteinase production and role of ERK1／2 pathway in the interaction of osteoarthritic subchondral bone osteoblasts and articular cartilage chondrocytes--possible pathogenic role in osteoarthritis［J］.J Rheumatol，2012，39（3）：621-634.

［15］ Fosang AJ，Beier F.Emerging Frontiers in cartilage and chondrocyte biologe［J］.Best Pract Res Clin Rheumatol，2011，25（6）：751-766.

（編校：李璐璐）

The influence of aceclofenac to cartilage cell proliferation and substratemetabolism in osteoarthritis

YUAN Xia1，CAIKe-xia1，QIN Ya-jing1，YANG Jie1，HU Yue-zheng2

（1.Department of Rheumatism and Hematology，Affiliated Hospital of Qinghai University，Xining 810001，China；2.Department of Orthopedics，The Second Hospital ofWenzhou Medical College，Wenzhou 325027，China）

ObjectiveTo invesgate the influence of aceclofenac to cartilage cell proliferation and substratemetabolism in osteoarthritis.MethodsSelect65 cases of patientswith osteoarthritiswhowere treated in Department of Rheumatism and Hematology of Affiliated Hospital of Qinghai University from September 2011 to September 2013.Patients were divided into observation group（n＝35）and control group（n＝30）.The observation group were treated with aceclofenac，while control group were treated with ibuprofen，Compare the efficacy of patients in two group.Compare human articular cartilage cells of5-bromodeoxyuridine（BrdU）positive rate，the content of glycogen protein（PG）and collagen typeⅡ in two groups.ResultsThe effective rate of observation group and control group was 74.29%and 73.33%respectively.There was significant difference between the two groups.Compared with control group，the joints pain，joints tenderness，15 meters walking time，daily activity ability（P＜0.05）.The incidence of adverse reactions of observation group（11.43%）was significantly lower than that of control group（P＜0.05）.The difference of BrdU positive rate in two groups had no statistical significance.Ⅱ type collagen content of observation group was significantly higher than that of control group（P＜0.05）.PG of observation group was significantly lower than that of control group（P＜0.05）.ConclusionThe efficacy of aceclofenac is good and the incidence of adverse reactions is low in treatment of osteoarthritis.Aceclofenac can alleviate clinical symptoms of patients by increasing collagen typeⅡand decreasing PG.

aceclofenac；osteoarthritis；cartilage cells；proliferation；metabolic

R331.1

A

1005－1678（2014）04－0128－03

骨關節(jié)炎［1］（ostearthritis，OA）是一種累及關節(jié)為主的多系統(tǒng)性自身免疫性疾病，是常見的關節(jié)疾患之一，主要病理特征［2-3］是關節(jié)軟骨細胞凋亡、軟骨細胞外基質減少及關節(jié)軟骨細胞功能異常。非甾體類抗炎藥是治療骨關節(jié)炎的常規(guī)臨床用藥，醋氯芬酸是常用的非甾體類抗炎藥，且在治療骨關節(jié)炎中具有一定效果。本研究通過對骨關節(jié)炎軟骨細胞的體外培養(yǎng)，探討非甾體類抗炎藥醋氯芬酸對骨關節(jié)炎軟骨細胞增殖和基質代謝的影響，現(xiàn)報道如下。

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生計劃（2011KYB052）

袁霞，女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：風濕免疫病，E-mail：qianghaiyuanxia＠163.com。