韓忠麗，郝貴周，陳小偉

(魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東臨沂276006)

阿法替尼(afatinib)為酪氨酸激酶抑制劑類(lèi)抗癌藥［1］，由勃林格殷格翰公司開(kāi)發(fā)。2013年7月美國(guó)FDA批準(zhǔn)Gilotrif(阿法替尼片)用于表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變的晚期(轉(zhuǎn)移性)非小細(xì)胞肺癌(NSCL)患者的治療，EGFR基因突變可通過(guò)FDA批準(zhǔn)的診斷試劑進(jìn)行檢測(cè)。大約85%的肺癌為非小細(xì)胞肺癌，使其成為肺癌中最常見(jiàn)的形式。EGFR基因突變?cè)诜切〖?xì)胞肺癌中大約能占到10%，而EGFR基因突變的大多數(shù)形式是EGFR外顯子19缺失或外顯子21 L858R置換［2，3］。本文通過(guò)反復(fù)研究建立了反相HPLC法測(cè)定阿法替尼片含量的方法，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于阿法替尼片質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀;Sartorius LA120S分析天平，乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、氫氧化鈉為分析純，水為純化水。阿法替尼對(duì)照品(山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司標(biāo)定，批號(hào):131001S)，阿法替尼原料(山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，批號(hào):130902)。

2 方法與結(jié)果

2.1 阿法替尼片的制備［4］稱(chēng)取阿法替尼細(xì)粉30 g、微晶纖維素155 g、乳糖100 g、羧甲基淀粉鈉12 g，加入濕法混合制粒機(jī)混合10 min，加入3%聚維酮k30乙醇溶液制粒，過(guò)20目篩;流化床50℃干燥20 min，過(guò)20目篩整粒;加入硬脂酸鎂3 g，混合5 min;Φ9 mm淺弧沖壓片。

2.2 色譜條件 色譜柱:Phenomenex Luna C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀(2 mol·L－1氫氧化鈉溶液調(diào)pH 6.0)－乙腈(50∶50);柱溫:30℃;檢測(cè)波長(zhǎng):252 nm;進(jìn)樣量:20 μL。理論板數(shù)按阿法替尼峰計(jì)算不低于3 000。

2.3 溶液制備

2.3.1 供試品溶液的制備 取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含阿法替尼0.1 mg的溶液，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取阿法替尼對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含阿法替尼0.1 mg的溶液，搖勻，即得。

2.3.3 空白輔料溶液的制備 取阿法替尼片空白輔料適量，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約相當(dāng)于含阿法替尼0.1 mg的溶液，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件，分別量取對(duì)照品溶液、供試品溶液及空白輔料溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果表明，空白輔料對(duì)本品的含量測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 液相色譜圖

2.5 線性與范圍試驗(yàn) 取阿法替尼對(duì)照品適量(約相當(dāng)于阿法替尼50 mg)，精密稱(chēng)定，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。分別精密量取儲(chǔ)備液 1、2.5、4、5 和6 mL，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，以峰面積A對(duì)濃度C進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:A=63.293C+21.339，r=0.999 9。結(jié)果表明:阿法替尼濃度在20～120 μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密稱(chēng)取阿法替尼對(duì)照品，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成濃度分別約為80、100和120 μg·mL－1的溶液，取上述3 種溶液，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，每份測(cè)定3次。記錄峰面積，考察精密度，計(jì)算 RSD 分別為 0.52%、0.37%、0.39%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液與對(duì)照品溶液，分別在配制后0、1、2、4、6、8 h 取樣，依法測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。經(jīng)試驗(yàn)，供試品溶液與對(duì)照品溶液峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.64%與0.51%，說(shuō)明溶液8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取阿法替尼對(duì)照品適量(約相當(dāng)于阿法替尼16、20、24 mg)，各3份，分別置200 mL量瓶中，分別加入處方量的空白輔料適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。另精密稱(chēng)取阿法替尼對(duì)照品約20 mg，置200 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，測(cè)定平均回收率為100.3%，RSD 為 0.93%(n=9)。

2.9 樣品測(cè)定 按“2.1”項(xiàng)下方法分別制備3批樣品(批號(hào):131201、131202、131203)，取本品及對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液及對(duì)照品溶液，精密量取上述供試品溶液及對(duì)照品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 阿法替尼片含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 以流動(dòng)相作為溶劑，配制阿法替尼溶液，在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果阿法替尼在252 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故檢測(cè)波長(zhǎng)選擇為252 nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇 調(diào)整磷酸二氫鉀溶液的濃度、pH值及與乙腈的比例，經(jīng)反復(fù)摸索，最終選用0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀(2 mol·L－1氫氧化鈉溶液調(diào)pH 6.0)－乙腈(50∶50)為流動(dòng)相。經(jīng)試驗(yàn)，該方法主峰保留時(shí)間適中，專(zhuān)屬性強(qiáng)，精密度良好，準(zhǔn)確度高，溶液穩(wěn)定，可用于阿法替尼片的質(zhì)量控制。

［1］史寧，韋林毅，吳久鴻.小分子抗腫瘤蛋白激酶抑制劑的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2011，46(23):1784－1789.

［2］焦瑾.非小細(xì)胞肺癌治療藥—Gillotrif［J］.藥學(xué)研究，2013，32(9):557 －558.

［3］Bruns A，Eichner S，Lehmann F，et al.Crystalline forms of afatinib di－maleate:WO，2013052157 A1［P］.2013 －4－11.

［4］Barta A.Process for drying of bibw2992，of its salts and solid pharmaceutical formulations comprising this active ingredient:US，20120107399 A1［P］.2012 －5 －3.