蔡靈超 葉建平 陳 沖 陳萍萍

(紹興文理學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，浙江 紹興312000 )

兩種麝鼩的核型和G-帶研究

蔡靈超 葉建平 陳 沖 陳萍萍

(紹興文理學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，浙江 紹興312000 )

采用空氣干燥法制作染色體標(biāo)本，以胰酶法制作G帶，報(bào)道了云南2種麝鼩的核型和G帶.白尾梢麝鼩(Crocidurafuliginosa)二倍染色體數(shù)目(2n)為40，常染色體臂數(shù)(FN)為50；灰麝鼩(Crociduraattenuate)2n=40，F(xiàn)N=52.G-帶比較結(jié)果顯示，2種麝鼩的G帶很相似，進(jìn)一步表明該屬動(dòng)物的核型進(jìn)化很保守；兩者核型差異在于：灰麝鼩6號(hào)染色體是亞端著絲粒染色體，它與白尾梢麝鼩6號(hào)端著絲粒染色體以及19號(hào)端著絲粒染色體近著絲粒部分的帶型相一致.

麝鼩屬；白尾梢麝鼩；灰麝鼩；核型；G-帶

麝鼩屬(Crocidura)隸屬食蟲(chóng)目鼩鼱科(Insectivora:Soricidae)，是哺乳動(dòng)物中最大的一個(gè)屬，共有180余種，廣泛分布于非洲區(qū)、古北區(qū)和東洋區(qū)[1].該屬1/3以上的物種都有染色體核型報(bào)道，其染色體數(shù)目從2n=22到2n=68不等，是哺乳動(dòng)物中染色體數(shù)目變化最大的屬之一[2].但是麝鼩屬動(dòng)物的核型國(guó)外研究較多，比如Grafodatsky等[3]曾報(bào)道了5種麝鼩屬動(dòng)物的核型，并研究了其中幾個(gè)物種的G-帶和C-帶；Biltueva等[4]也曾對(duì)麝鼩屬5個(gè)物種的G-帶核型進(jìn)行了比較，研究結(jié)果表明，羅伯遜易位、串聯(lián)融合以及整條染色體的易位是造成這幾個(gè)物種核型差異的主要原因.而我國(guó)麝鼩屬動(dòng)物的核型研究起步較晚，迄今為止，國(guó)內(nèi)期刊上有關(guān)我國(guó)麝鼩核型的文章共2篇，涉及2個(gè)種[5，6].本文著重研究來(lái)自于云南省的白尾梢麝鼩(C.fuliginosa)和灰麝鼩(C.attenuate)的常規(guī)核型和G-帶核型，旨在為研究其種屬間進(jìn)化關(guān)系提供一定的理論依據(jù).

1 材料與方法

1.1細(xì)胞培養(yǎng)

本實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞均為成纖維細(xì)胞(組織材料分別來(lái)源于耳朵、肺、心臟等部位)，細(xì)胞培養(yǎng)按照常規(guī)的方法進(jìn)行.均采用DMEM添加10%-15%的新生牛血清(NCS，Hyclone)或者胎牛血清(FBS，杭州四季青公司)、青霉素100 μg/mL、鏈霉素100 μg/mL，于37℃，5% CO2下培養(yǎng).

1.2染色體標(biāo)本制備

終止培養(yǎng)前，用10 μg/mL BrdU處理5 h，之后用0.025-0.05 μg/mL的秋水仙素處理30-60 min.中期染色體的制備按常規(guī)方法進(jìn)行，包括用0.075M KCl溶液低滲20分鐘，用甲醇∶冰乙酸(3∶1)固定液固定2～3次，最后懸液置于-20℃保存.采用常規(guī)空氣干燥法進(jìn)行染色體制片.

1.3 G顯帶

按常規(guī)胰酶-Giemsa法進(jìn)行G-帶顯示.將染色體玻片標(biāo)本在65℃烤箱中老化3-12 h，取出冷卻至室溫后，用0.005%胰酶處理5-7 min(不同物種胰酶處理時(shí)間有所不同)，然后將染色體玻片標(biāo)本置于2×SSC中，終止胰酶反應(yīng)，最后用Giemsa染液(Giemsa原液：0.025M KH2PO4緩沖液=1：6稀釋?zhuān)琍H 7.0)染色5分鐘，清水沖洗干凈，室溫下晾干后即可在顯微鏡下檢測(cè).對(duì)染色體顯帶和分散較好的分裂相用CytoVision System (Applied Imaging) 軟件拍攝并進(jìn)行圖像分析.

1.4染色體命名

白尾梢麝鼩的染色體分類(lèi)按Levan等[7]的標(biāo)準(zhǔn).根據(jù)染色體的長(zhǎng)度、著絲粒位置和帶型將染色體配對(duì)、排序，得到常規(guī)核型和G-帶核型.灰麝鼩的常規(guī)核型和G-帶核型根據(jù)Motokawa等[6]的報(bào)道排列.

2 結(jié)果

白尾梢麝鼩的染色體數(shù)為2n=40，常染色體臂數(shù)FN=50，與先前的報(bào)道相同[5]，包括3對(duì)中或亞中著絲粒染色體(1～3號(hào)染色體)，3對(duì)亞端著絲粒染色體(4、5、7號(hào)染色體)，13對(duì)端著絲粒染色體(6及8～19號(hào)染色體)；X染色體是相對(duì)較大的亞中著絲粒染色體，Y為端著絲粒染色體(圖1：A).

灰麝鼩的染色體數(shù)目與先前報(bào)道的臺(tái)灣產(chǎn)灰麝鼩相同[6]，也是2n=40，F(xiàn)N=52：包括3對(duì)中或亞中著絲粒染色體(1～3號(hào)染色體)，4對(duì)亞端著絲粒染色體(4～7號(hào)染色體)，12對(duì)端著絲粒染色體(8～19號(hào)染色體)；X染色體是相對(duì)較大的亞中著絲粒染色體，Y為端著絲粒染色體(圖1：B).灰麝鼩的核型與白尾梢麝鼩的基本相同.

3 討論

Motokawa等[8]曾報(bào)道了分別來(lái)自于臺(tái)灣、廣東的灰麝鼩的核型和G-帶，并依據(jù)這兩地的灰麝鼩核型存在差異，建議將來(lái)自臺(tái)灣的灰麝鼩更名為C.tanakae，而產(chǎn)自廣東的灰麝鼩(C.attenuata)則保留該物種名.然而本研究中的云南產(chǎn)灰麝鼩卻與臺(tái)灣產(chǎn)灰麝鼩的染色體數(shù)目相同，均為2n=40，常染色體中含有3對(duì)中或亞中著絲粒染色體，4對(duì)亞端著絲粒染色體，12對(duì)端著絲粒染色體，常染色體臂數(shù)FN=52，G-帶核型也基本一致.但是與廣東產(chǎn)灰麝鼩的染色體數(shù)目明顯不同[8].Motokawa等[8]的研究表明，廣東產(chǎn)灰麝鼩的二倍體染色體數(shù)目存在多態(tài)性，具有35、36和38三種類(lèi)型，但是這三種類(lèi)型的灰麝鼩的常染色體臂數(shù)相同，F(xiàn)N=50，三者之間的核型差異是由于羅伯遜易位所造成的.因此，Motokawa等[8]提出將臺(tái)灣的灰麝鼩更名為C.tanakae的建議有待商榷.

白尾灰麝鼩與灰麝鼩形態(tài)相似，存在同域分布現(xiàn)象[9]，并且都屬于中等大小麝鼩，這給分類(lèi)工作帶來(lái)極大的困難.本研究中的白尾灰麝鼩和灰麝鼩樣品是在同一地點(diǎn)采集的，兩者的染色體數(shù)目相同，均為2n=40，但常染色體臂數(shù)不同.白尾灰麝鼩的常染色體臂數(shù)FN=50，而灰麝鼩FN=52，即多一對(duì)雙臂染色體，據(jù)此可輕易將兩者區(qū)分.

麝鼩屬動(dòng)物的常規(guī)核型研究表明，該屬的二倍體染色體數(shù)目在22～68之間，常染色體臂數(shù)從34到86不等[2].Biltueva等[4]曾對(duì)麝鼩屬中的Crociduradsinezumi(2n=40)、Crocidurawatasei(2n=26)、Crociduragueldenstaedtii(2n=40)、Crociduraleucodon(Georgia，2n=28)以及Crociduraleucodon(Czech Rep，2n=28)這幾個(gè)物種的G-帶核型進(jìn)行了比較，研究結(jié)果表明麝鼩屬動(dòng)物的染色體具有高度的保守性，物種之間的帶型很相似.本文中白尾梢麝鼩和灰麝鼩這二個(gè)物種的G-帶比較結(jié)果也證實(shí)這一觀點(diǎn)(圖2).從圖2中可以看出，這2個(gè)物種的1～5號(hào)染色體、7～18號(hào)染色體以及X染色體的G帶帶型基本相同.兩者的G-帶核型差別在于：灰麝鼩6號(hào)染色體是亞端著絲粒染色體，它與白尾梢麝鼩6號(hào)染色體以及19號(hào)染色體近著絲粒部分的帶型相一致.

上述有關(guān)麝鼩屬動(dòng)物具有保守的核型的觀點(diǎn)，僅是依據(jù)物種間的G帶比較所做出的推論，仍需要進(jìn)行熒光原位雜交(fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)研究加以驗(yàn)證.

[1]Hutterer R.Order Soricomorpha.In:Wilson DE,Reeder D,(eds),Mammal species of the world:a taxonomical reference.Baltimore:John Hopkins University Press,2005:220-311.

[2]Zima J,Lukacova L,Macholan M.Chromosomal evolution in shrews.In:Wojcik JM,Wolsan M,(eds),Evolution of Shrews.Bialowieza:Mammal Research Institute,Polish Academy of Sciences,1998:175-218.

[3]Grafodatsky AS,Radzhabli SI,Sharshov AV,et al.Karyotypes of 5 species of Soricidae-Crocidura in the fauna of the USSR.Tsitologiia,1988,30(10):1247-50.

[4]Biltueva LS,Rogatcheva MB,Perelman PL,et al.Chromosomal phylogeny of certain shrews of the generaCrociduraandSuncus(Insectivora).Journal of Zoological Systematics and Evolutionary Research,2001,39(1):69-76.

[5]王應(yīng)祥,李崇云,陳宜峰.白尾梢麝鼩的染色體研究[J].遺傳,1983,5(3):29-31.

[6]Motokawa M,Harada M,Lin LK,et al.Karyological study of the gray shrewCrociduraattenuata(Mammalia:Insectivora) from Taiwan.Zoological Studies,1997,36(1):70-73.

[7]Levan A,Fredga K,Sandberg AA.Nomenclature for centromeric position on chromossomes.Hereditas,1964,52(2):201-220.

[8]Motokawa M,Harada M,Wu Y,et al.Chromosomal polymorphism in the gray shrewCrociduraattenuata(Mammalia:Insectivora).Zoological Science,2001,18(8):1153-1160.

[9]Jiang XL,Hoffmann RS.Arevision of the white-toothed shrews (Crocidura) of Southern China.Journal of Mammalogy,2001,82(4):1059-1079.

2014-03-18

教育部科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(編號(hào)：212069)；浙江省自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)：LQ12C04002).

蔡靈超(1992-)，女，浙江臺(tái)州人，主要從事動(dòng)物染色體研究.

葉建平，E-mail：yejp02@126.com.

Q953

A

1008-293X(2014)08-0072-04