北京萬生藥業(yè)有限責(zé)任公司 (101113) 潘海群 耿玉先 范寶成 劉秀梅 張弛

依折麥布(ezetimibe) 由默克（Merck）公司和先靈葆雅（Schering-Plough）公司共同研制[1]，是第一個(gè)被FDA批準(zhǔn)上市的選擇性抑制膽固醇吸收的藥物[2]，ezetimibe與現(xiàn)有的調(diào)脂藥有著完全不同的作用機(jī)制,為臨床治療高脂血癥等因膽固醇含量高引起的疾病提供了一種新的選擇[3][4]，此藥用于降低人體膽固醇的含量，對(duì)治療原發(fā)性高膽固醇血癥，家族性純合子高膽固醇血癥（HoFH），純合子谷甾醇血癥，混合性高脂血癥和冠心病都有一定作用[5]。依折麥布的劑型主要是片劑，本文采用反相HPLC測(cè)定依折麥布片中依折麥布的含量及其有關(guān)物質(zhì)，該方法簡(jiǎn)便易行、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好，可有效控制片劑的質(zhì)量。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 高效液相色譜系統(tǒng):Shimadzu，型號(hào)LC-20AT，PDA檢測(cè)器，日本島津公司；色譜柱: Hypersil BDS 150mm×4.6mm，5μm，Thermo Fisher Scientific公司；電子天平:Sartorius，型號(hào):BP211D，賽多利斯公司；紫外可見光分光光度儀，型號(hào)UV-1800，SHIMADZU公司。

1.2 試藥與試劑 供試品：依折麥布片，規(guī)格：10mg，批號(hào)：21306006、21306007、21306008，北京萬生藥業(yè)有限責(zé)任公司；市售品：依折麥布片，規(guī)格：10mg，批號(hào)：2EZPA11001，先靈葆雅公司。對(duì)照品：依折麥布，批號(hào)：614401012，Teva API india Ltd.。試劑：乙腈、四氫呋喃為色譜純 (Honeywell公司)；磷酸二氫鉀、冰醋酸為分析純（天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）；純化水(自制)。

2 方法

2.1 波長驗(yàn)證 取對(duì)照品適量，加乙醇制成10μg/ml的溶液，照紫外分光光度法，在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描，記錄圖譜，結(jié)果表明最大吸收波長為232nm，故選擇232nm作為本品檢測(cè)波長。

2.2 色譜條件 C18色譜柱：Hypersil BDS(150mm×4.6mm,5um)，流動(dòng)相：0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈-四氫呋喃（65∶25∶10），流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長為232nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為30μl。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 稱取依折麥布對(duì)照品約20mg，置100ml量瓶中，加0.01mol/L乙醇制氫氧化鈉溶液10ml使溶解，密塞，于55℃加熱15分鐘，取出，立即加0.1mol/L鹽酸溶液2ml，加水-乙腈-冰醋酸（40∶60∶0.1）適量，放冷，加水-乙腈-冰醋酸（40∶60∶0.1）稀釋至刻度，搖勻，即得。照高效液相色譜法（《中國藥典》2010年版二部附錄ⅤD[6]）測(cè)定，精密量取上述溶液30μl注入液相色譜儀，考察主峰與相對(duì)保留時(shí)間約為1.1處出現(xiàn)的色譜峰的分離度。本色譜條件能將主峰與雜質(zhì)峰有效分離，依折麥布保留時(shí)間為21.5min，主峰的理論塔板數(shù)為6987，與RRT1.1的分離度為2.73。

3 專屬性

3.1 溶劑、輔料干擾試驗(yàn)考察 溶劑：水-乙腈-冰醋酸（40∶60∶0.1）。

空白輔料溶液：稱取依折麥布片空白輔料（約相當(dāng)于依折麥布10mg），置50ml量瓶中，加溶劑適量，超聲處理20分鐘，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

取上述溶液各30μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果：溶劑于1.7～3.8min出峰，空白輔料無輔料峰。

供試品溶液：取供試品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于依折麥布10mg），置于50ml量瓶中，加溶劑適量，超聲處理20分鐘，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。取30μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果見圖1：比較以上圖譜可知，溶劑峰均不干擾有關(guān)物質(zhì)的檢查，故在有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定過程中應(yīng)扣除溶劑。

3.2 破壞試驗(yàn)

酸破壞 稱取供試品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于依折麥布10mg），置于50ml量瓶中，加入1mol/L鹽酸溶液3ml，于60℃水浴加熱1小時(shí)后，放冷，再加入1mol/L氫氧化鈉溶液3ml中和，按3.1供試品溶液配制方法進(jìn)行配制。

堿破壞 稱取供試品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于依折麥布10mg），置于50ml量瓶中，加入0.1mol/L氫氧化鈉溶液3ml，于室溫下放置30分鐘后, 再加入0.1mol/L鹽酸溶液3ml中和，按3.1供試品溶液配制方法進(jìn)行配制。

氧化破壞 稱取供試品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于依折麥布10mg），置50ml量瓶中，加入30%過氧化氫溶液3ml, 于60℃水浴加熱1小時(shí)后，放冷，按3.1供試品溶液配制方法進(jìn)行配制。

高溫破壞 稱取供試品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于依折麥布10mg），置于50ml量瓶中，高溫105℃放置6小時(shí)后，放冷，按3.1供試品溶液配制方法進(jìn)行配制。

附表 依折麥布片有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果

光照破壞 稱取經(jīng)在照度為4500lx±500lx條件下光照24小時(shí)后的供試品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于依折麥布10mg），置于50ml量瓶中，按3.1供試品溶液配制方法進(jìn)行配制。

采用高效液相色譜法，取上述續(xù)濾液各30μl分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，考察雜質(zhì)峰與主峰的分離情況。結(jié)果見圖1圖譜中可見溶劑和空白輔料溶液在3.8min之前出峰，對(duì)樣品測(cè)定無干擾；氧化、高溫、光照破壞條件下降解雜質(zhì)較小，各雜質(zhì)與主峰完全分離，主峰峰純度合格；在酸、堿破壞條件下降解雜質(zhì)較大，有明顯的降解雜質(zhì)峰，主峰與各雜質(zhì)完全分離，主峰峰純度合格；酸破壞主要產(chǎn)生8.258min、9.741min、35.406min的雜質(zhì)峰，堿破壞主要產(chǎn)生9.731min和31.666min的雜質(zhì)峰；在主峰3倍保留時(shí)間以后無雜質(zhì)檢出?？梢姳痉梢詫⒁勒埯湶寂c有關(guān)物質(zhì)以及可能降解的雜質(zhì)能完全分離。

3.3 最低檢測(cè)限 取依折麥布對(duì)照品約20mg，置50ml量瓶中，加溶劑適量，超聲處理使溶解，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液A；取上述溶液1ml置于100ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻；取上述溶液1.5ml置于200ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻；取30μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果主峰峰高約為噪音的3倍，計(jì)算此時(shí)的依折麥布濃度為0.03μg/ml，即0.9ng，相當(dāng)于供試品的0.015%，能夠有效檢測(cè)本品的有關(guān)物質(zhì)。

4 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

分別取本品（批號(hào)21306006、21306007、21306008和市售品）10片，置500ml量瓶中，加溶劑適量，超聲處理20分鐘，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。另取依折麥布對(duì)照品適量，用溶劑稀釋制成每1ml中約含有0.4μg的溶液，作為對(duì)照溶液。精密量取對(duì)照溶液30μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分峰的峰高約為滿量程的10%；再精密量取對(duì)照溶液與供試品溶液各30μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如顯雜質(zhì)峰，扣除溶劑峰后，按主成分自身外標(biāo)法計(jì)算最大單雜和總雜質(zhì)含量，自制三批樣品及市售品有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果見附表。

結(jié)論：三批樣品有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果表明，其中各雜質(zhì)均小于0.2%，雜質(zhì)總量均小于0.5%。

5 含量測(cè)定

5.1 線性 量取貯備液A 2.5、4.0、5.0、6.0、7.5ml分別置于10ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為線性溶液；分別取上述溶液30μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并以峰面積與濃度進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程及線性相關(guān)系數(shù)，結(jié)果本品在98.6～295.9μg/ml范圍內(nèi)具有良好的線性相關(guān)性，Y=72.0015X-188.9800，r= 0.9999。5.2 精密度試驗(yàn)

5.2.1 儀器精密度試驗(yàn) 取本品10片，置500ml量瓶中，加溶劑適量，超聲處理20min，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，取供試品溶液30μl，記錄色譜圖，重復(fù)測(cè)定6次，考察主峰面積，峰面積的RSD為0.84%。

5.2.2 方法精密度（重復(fù)性）試驗(yàn) 對(duì)照品溶液的制備：取依折麥布對(duì)照品約10mg，置50ml量瓶中，加溶劑適量，超聲處理使溶解，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備：取本品10片，置500ml量瓶中，加溶劑適量，超聲處理20分鐘，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，同法配制6份。取對(duì)照品溶液和供試品溶液各30μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，平均值為100.4%、RSD=0.72%。

5.3 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取精密度試驗(yàn)項(xiàng)下的供試品溶液在室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果表明：本品的主峰面積無明顯變化，說明依折麥布在溶劑中穩(wěn)定性較好。計(jì)算峰面積的RSD=0.73%。

5.4 回收率試驗(yàn) 供試品溶液的制備：取依折麥布對(duì)照品約16mg、20mg和24mg，分別置100ml量瓶中，分別加入空白輔料約220mg，加溶劑適量，超聲處理20min使主藥溶解，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別取續(xù)濾液作為80%、100%、120%的供試品溶液，每個(gè)濃度平行制備3份。取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的對(duì)照品溶液為對(duì)照品溶液。

取供試品溶液和對(duì)照品溶液各30μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算依折麥布的平均回收率和RSD分別為100.3%、0.52%。結(jié)果表明：在所選擇的測(cè)定條件下，方法的準(zhǔn)確度較好，空白輔料在主峰位無雜質(zhì)峰出現(xiàn)，回收率結(jié)果良好，輔料也不吸附主成分，測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠。

5.5 含量檢測(cè) 取本品10片，置500ml量瓶中，加溶劑適量，超聲處理20分鐘，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液30μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取依折麥布對(duì)照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并定量稀釋制成每1ml中約含有0.2mg的溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。結(jié)果三批樣品含量分別為99.6%、100.0%、100.8%，市售品含量為99.9%。

6 討論

本試驗(yàn)照紫外分光光度法，在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描，記錄色譜圖，其最大吸收波長為232nm。

依折麥布在水中幾乎不溶，樣品溶液的配制，加水-乙腈-冰醋酸（40:60:0.1)均要超聲處理20min，使主藥充分溶解，測(cè)定準(zhǔn)確。

《中國藥典》對(duì)片劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，依折麥布片的含量限度應(yīng)為93.0%～107.0%。實(shí)際測(cè)得三批樣品的含量為99.6%、100.0%、100.8%。三批樣品均符合片劑的質(zhì)量要求。