吳淑馨 孫宏峰 龍泓竹 張 力 楊曉暉

(1北京中醫(yī)藥大學東方醫(yī)院內分泌科，北京，100078;2國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品評價中心，北京，100045)

糖尿病患者常有不同程度的脂質代謝紊亂，血脂異?？蓪е绿悄虿《喾N并發(fā)癥的發(fā)生，最終威脅到糖尿病患者的生命。在前期研究中發(fā)現[1]，益氣養(yǎng)陰散結方對降低血糖，糾正脂代謝紊亂方面有一定作用，對糖尿病心臟病有一定的早期保護作用。本實驗通過觀察益氣養(yǎng)陰散結方對自發(fā)糖尿病小鼠糖脂代謝的影響，以期證實其對糖尿病并發(fā)癥的預防作用，為臨床應用該方提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 動物 雄性SPF級C57BL/6J小鼠，40只，10～12周齡，體重20～25 g，購自中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所。雄性SPF級KKAy小鼠，80只，11～12周齡，購自中國醫(yī)學科學院實驗動物中心。KKAy小鼠測量空腹血糖(FBG)，FBG≥13.9 mmol/L者確定為糖尿病小鼠，納入實驗。實驗期間，自由飲水C57BL/6J小鼠給予小鼠生長維持顆粒飼料，KKAy小鼠給予高脂飼料(含10%豬油、10%蛋黃粉和10%葡萄糖，為KKAy小鼠專用高能量飼料)，飼料均由醫(yī)科院動物所提供，以上動物均飼養(yǎng)于東直門醫(yī)院動物中心。

1.2 藥品 實驗所用益氣養(yǎng)陰散結中藥復方由北京中醫(yī)藥大學東方醫(yī)院提供。

1.3 分組及給藥 小鼠適應性飼養(yǎng)1周后，隨機分組，將KKAy小鼠隨機分為模型組和中藥組，C57BL/6J小鼠則為正常對照組，分組后給藥，根據人和小鼠間的體表面積折算系數計算給藥量，經計算，小鼠給藥量為20.2 g/(kg·d)，即中藥組予20.2 g/(kg·d)灌服益氣養(yǎng)陰散結中藥，模型組及正常組予20.2 g/(kg·d)灌服蒸餾水，給藥共12周。

1.4 觀察指標

1.4.1 一般情況 給藥共12周，平時記錄各組小鼠的活動狀態(tài)、毛色、精神狀態(tài)、飲食、二便情況，定期檢測各組小鼠的體重、血糖情況。

1.4.2 血糖及血脂的測定 在實驗的第4、8、12周末，水合氯醛麻醉后，腹主動脈采血，分離血清，使用全自動生化分析儀測定血糖(GLU)及三酰甘油(TG)、膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)等指標。

1.4.3 統計學處理 對實驗數據均采用SPSS 16.0統計軟件。計量資料以(±s)表示，多組樣本間差異的比較用多因素方差分析的方法。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況 在喂養(yǎng)期間，C57BL/6J小鼠活躍，對抓取抵抗明顯，正常進食飲水，毛色亮澤，KKAy小鼠較C57BL/6J小鼠肥胖，體重增長迅速，活動遲緩、懶動、反應遲鈍，毛色干枯無光澤。

2.2 各組大鼠血糖測定情況 如表1所示，與正常組比較，從第4周開始，模型組及中藥組小鼠空腹血糖就已經明顯升高，在實驗的第4、8、12周差異均有統計學意義(P＜0.01)，在第12周時，中藥組與模型組相比，差異有統計學意義(P＜0.05)。

表1 各組小鼠FBG的比較(mmol/L)

表2 各組小鼠TC的比較(mmol/L)

2.3 各組大鼠TG、TC測定情況 如表2和表3所示，與正常組比較，從第4周開始，模型組及中藥組小鼠TG及TC水平明顯升高，在第4、8、12周均有統計學意義(P＜0.01)，在第8周時，中藥組與模型組相比，TC有統計學意義(P＜0.05);在第8、12周時，中藥組與模型組相比，TG均有統計學意義(P＜0.05)。

表3 各組小鼠TG的比較(mmol/L)

2.4 各組大鼠LDL、HDL測定情況 如表4和表5所示，與正常組比較，從第4周開始，模型組及中藥組小鼠LDL及TC水平明顯升高，在第4、8、12周均有統計學意義(P＜0.01)，在第8周時，中藥組與模型組相比，LDL有統計學意義(P＜0.05);在第8周時，中藥，HDL(P＜0.05)。

表4 各組小鼠LDL的比較(mmol/L)

表5 各組小鼠HDL的比較(mmol/L)

3 討論

3.1 動物模型特點 KKAy小鼠系能自發(fā)出現肥胖、高血糖及高胰島素血癥的一種動物模型，表現為天生的葡萄糖耐受不良和胰島素抵抗，隨年齡增長逐漸轉變?yōu)楦哐呛吞悄虿?。其編碼皮毛顏色信息的Agout(ia)基因位于小鼠2號染色體上，該基因為a/a純合子時，小鼠皮毛表達為正常的黑色，將黃色肥胖基因(A7)轉至KKAy小鼠而得到的KKAy小鼠變異為Ay/a雜合子時，不僅從外表上有了改變，小鼠皮毛呈現了黃色，同時具有了肥胖、高血糖、脂質代謝紊亂等代謝異常綜合征的特征[2]。KKAy糖尿病小鼠與人類2型糖尿病的發(fā)病過程極其相似，其發(fā)病的基礎都為遺傳因素和環(huán)境因素的共同參與，這種轉基因技術與自發(fā)性動物模型結合制備的動物模型，不僅可應用于脂代謝紊亂、胰島素抵抗的研究，是目前研究2型糖尿病及其并發(fā)癥較為理想的自發(fā)動物模型。Bray[3]早在1971年就曾報道KKAy小鼠在8周時發(fā)生肥胖，16～20周時體重、血糖等指標相對穩(wěn)定，大約1年左右血糖開始降低，亦有實驗研究報道KKAy小鼠在5周齡時血糖、胰島素水平以及HbA1c水平就逐步升高，并且肝脂肪化和脂肪組織增多[4]，在10周齡時有明顯的糖脂代謝紊亂[5]，我們選擇11～12周齡的 KKAy小鼠，并且在實驗的第4、8、12周分別觀察其血脂變化，以期動態(tài)觀察KKAy小鼠的血糖血脂變化，及中藥干預后的影響。

3.2 糖脂代謝紊亂與糖尿病血管并發(fā)癥密切相關

糖尿病的發(fā)病率日益升高，且多伴有多種慢性并發(fā)癥，因此對糖尿病并發(fā)癥的防治尤為重要。糖脂代謝紊亂是各種并發(fā)癥的發(fā)病基礎，高血糖、高血脂、高血壓、肥胖等構成了糖尿病慢性并發(fā)癥的獨立危險因素[6]。2型糖尿病患者易并發(fā)血脂紊亂，其在糖尿病血管并發(fā)癥尤其是心血管事件的發(fā)生上起重要作用，三酰甘油和游離脂肪酸等在心肌細胞內聚集增多，對心肌細胞內酶系統的活性具有抑制作用[7]，而小而密的LDL與引起心力衰竭的風險有關[8]，同時血脂紊亂亦可使血液黏度增高，可誘發(fā)微血管病變;所以脂代謝異常是血管并發(fā)癥的重要因素[9]。美國國家膽固醇教育計劃成人治療方案第三次指南(NECP－ATPIII)將糖尿病視為冠心病的高危癥，還指出升高的LDL－C水平是冠心病的主要危險因子，應將糖尿病患者的血漿LDL－C水平嚴格控制在100 mg/dl(2.6 mmol/L)以下[10]。

3.3 益氣養(yǎng)陰通絡散結方對KKAy小鼠糖脂代謝的影響 許多流行病學調查顯示糖尿病患者的脂質代謝異常通常表現為TG水平升高、LDL－C水平和HDLC水平的降低[11]。本實驗中的模型組及中藥組與正常組相比，在第4、8、12周時都表現出了明顯的FBG、TG、TC、LDL－C升高、HDL－C降低，與以往的實驗報道一致[12－14]。中藥組的脂代謝紊亂明顯減輕，與模型組相比，降低了血TG、TC和LDL－C，升高了血HDLC，且在實驗的第8周更加明顯。

益氣養(yǎng)陰散結方由黃芪等藥物組成，具有益氣養(yǎng)陰散結之功效，全方補而不滯，祛瘀不傷正。臨床運用該方治療糖尿病微血管、神經并發(fā)癥取得了較為滿意的效果，其中治療早期糖尿病心臟病變34例，總有效率88.2%，優(yōu)于對照組的73.3%(P ＜0.05)[15]。

本實驗發(fā)現，益氣養(yǎng)陰散結方可顯著改善自發(fā)糖尿病小鼠的糖脂代謝紊亂，具有明顯的降糖和調脂功效，這可能對控制糖尿病的進程，防治早期血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展具有重要意義。該方具體作用的環(huán)節(jié)和靶點，有待于進一步研究，下一步可進一步研究益氣養(yǎng)陰散結方在調節(jié)糖脂代謝的作用靶點和糖尿病血管并發(fā)癥防治中的作用。

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