范巖巖，宋玉芹，李 楨，張廷榮

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 青島 266109）

抗菌肽（Antimicrobial Peptides，AMPs）是生物界中廣泛存在的一類生物活性小肽，目前世界上已知的抗菌肽有1 500多種[1]。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)抗菌肽廣泛分布于動(dòng)植物和微生物中，它們分子量小，熱穩(wěn)定性高，抗菌譜廣，還可以抗真菌、抗腫瘤、抗病毒,且不易產(chǎn)生抗藥性[2]。瑞典科學(xué)家G Boman等（1972）從惜古比天蠶蛹中誘導(dǎo)分離的一種殺菌肽，并將其命名為天蠶素[3]。天蠶素作為抗菌肽的家族成員之一，它在畜禽生產(chǎn)中應(yīng)用的基礎(chǔ)研究報(bào)道很少。本試驗(yàn)通過飼料中添加天蠶素與添加免疫多糖、圓蔥寡糖和維吉尼亞霉素的對比試驗(yàn)來說明天蠶素對肉仔雞生產(chǎn)性能及免疫功能的影響，為抗菌肽-天蠶素在肉雞生產(chǎn)上的開發(fā)與應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)在本學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房進(jìn)行。試驗(yàn)選擇羅斯308商品代肉仔雞，購自青島正大集團(tuán)孵化廠。天蠶素由北京中農(nóng)穎泰生物技術(shù)有限公司提供。圓蔥寡糖在青島農(nóng)業(yè)大學(xué)化藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提取。免疫多糖由中國海洋大學(xué)提供。維吉尼亞霉素由珠海遠(yuǎn)晨醫(yī)藥化工有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)所用疫苗，均購自齊魯動(dòng)物保健品有限公司。

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)雞群按常規(guī)管理方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理，采用平面籠養(yǎng)、自然通風(fēng)，電熱控溫，自由采食和飲水。肉仔雞免疫采用現(xiàn)行生產(chǎn)免疫程序，在7日齡ND-IB二聯(lián)疫苗點(diǎn)眼，同時(shí)肌肉注射ND-AI二聯(lián)滅活油苗0.3 mL，14 d IBD中等毒力活疫苗2倍量飲水、21 d ND IV疫苗2倍量飲水?；A(chǔ)日糧采用全價(jià)配合飼料。

1.3 試驗(yàn)分組 選擇健康、體重相近的1日齡肉仔雞雛120只，隨機(jī)分為4組，每組30只，3個(gè)重復(fù)。第1組為試驗(yàn)組，第2、3、4組為對照組，各組飼喂相同的基礎(chǔ)日糧。1組為抗菌肽-天蠶素試驗(yàn)組，添加量為100 mg/kg，2組為免疫多糖組，添加量均為5 mg/kg，3組為圓蔥寡糖組，添加量均為5 mg/kg；4組為抗生素組（維吉尼亞霉素），添加量為5 mg/kg。各組分別在14 d、28 d和42 d稱重、測定耗料量，于14 d、28 d采集血樣，28 d每重復(fù)隨機(jī)取雞1只，宰殺分離脾臟、腔上囊和胸腺等器官。

1.4 方法

1.4.1 指標(biāo)測定 測定體重、耗料量、脾臟重、胸腺重，用微量法檢測ND抗體效價(jià)[4]，血細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行血液中白細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.4.2 器官指數(shù)計(jì)算 免疫器官指數(shù)=免疫器官重（mg）／體重（g）。

1.4.3 數(shù)據(jù)處理 利用SAS10.0 ANOVA進(jìn)行數(shù)據(jù)分析[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 天蠶素對肉仔雞生產(chǎn)性能的影響 在基礎(chǔ)日糧中添加天蠶素、免疫多糖、圓蔥寡糖和維吉尼亞霉素對肉仔雞生產(chǎn)性能的影響如表1所示。結(jié)果表明，在14 d、28 d和42 d時(shí)不同添加物各組間的平均體重、日增重、料重比均無顯著性差異（P＞0.05）。14 d時(shí)，天蠶素組肉雞的平均體重、日增重較免疫多糖組和圓蔥寡糖組略高，較維吉尼霉素組略低，料重比低于免疫多糖組，高于圓蔥寡糖組和維吉尼霉素組（P＞0.05）。28 d與42 d時(shí)，天蠶素試驗(yàn)組肉仔雞的平均體重、日增重較圓蔥寡糖組和維吉尼霉素組有所提高，低于免疫多糖組，但差異仍不顯著（P＞0.05）。由此可見，基礎(chǔ)日糧中添加100 mg/kg抗菌肽天蠶素，肉仔雞的生產(chǎn)性能達(dá)到了添加免疫多糖、圓蔥寡糖和維吉尼亞霉素的效果。

表1 肉仔雞在14d、28d和42d生產(chǎn)性能的測定 （g）

2.2 天蠶素對肉仔雞免疫器官的影響 不同添加物對肉仔雞免疫器官的影響結(jié)果見表2。結(jié)果表明，天蠶素試驗(yàn)組與免疫多糖組和維吉霉素組的脾臟重和脾臟指數(shù)、胸腺重和胸腺指數(shù)差異顯著（P＜0.05），與圓蔥寡糖組差異不顯著（P＞0.05）；天蠶素試驗(yàn)組的腔上囊重和腔上囊指數(shù)顯著低于免疫多糖組（P＜0.05），與圓蔥寡糖組和維吉霉素組差異不顯著（P＞0.05）。由此可見天蠶素對肉仔雞腔上囊器官的生長促進(jìn)作用低于免疫多糖。綜合分析不同添加物的試驗(yàn)結(jié)果，天蠶素對肉仔雞免疫器官的影響與圓蔥寡糖一致，顯著高于添加免疫多糖和抗生素維吉霉素。

2.3 天蠶素對肉仔雞免疫功能的影響 不同添加物對肉仔雞免疫功能的影響見表3。結(jié)果表明，添加天蠶素、免疫多糖、圓蔥寡糖和維吉尼霉素各組的ND抗體效價(jià)都達(dá)到了免疫保護(hù)水平。14 d時(shí)各組之間抗體水平?jīng)]有顯著差異（P＞0.05），28d時(shí)添加天蠶素組、免疫多糖組和圓蔥寡糖組的ND抗體效價(jià)差異不顯著（P＞0.05），但這3組的ND抗體效價(jià)都顯著高于添加維吉尼霉素組（P＜0.05）。由此可見添加天蠶素、免疫多糖和圓蔥寡糖有提高免疫效果的作用。14 d與28 d時(shí)的血液白細(xì)胞數(shù),不同添加物各組的白細(xì)胞數(shù)均較正常水平有顯著增加。14 d時(shí)各組間的白細(xì)胞數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。28 d時(shí)添加天蠶素與圓蔥寡糖組的白細(xì)胞數(shù)顯著高于免疫多糖組（P＜0.05），極顯著高于添加維吉尼霉素組（P＜0.01）。結(jié)果表明，天蠶素、圓蔥寡糖和免疫多糖具有促進(jìn)免疫細(xì)胞生長，增強(qiáng)肉仔雞免疫功能的作用。

表2 28日齡肉仔雞免疫器官的重量與器官指數(shù)

表3 各組肉仔雞ND抗體效價(jià)測定結(jié)果 （log2，萬／mm3）

3 討論

3.1 胸腺、脾臟及腔上囊免疫功能的產(chǎn)生機(jī)制禽類的胸腺能夠產(chǎn)生胸腺素、胸腺生成素和血清胸腺因子等活性物質(zhì)。胸腺素是一種小的多肽混合物，它作用于骨髓前體細(xì)胞，使之成熟，成為至少具有某些T細(xì)胞特征的細(xì)胞。胸腺生成素有兩種多肽，能夠引起T細(xì)胞前體的分化，并借降低環(huán)腺苷酸(cAMP)水平而增強(qiáng)T細(xì)胞的功能。血清胸腺因子是由胸腺上皮細(xì)胞分泌的肽類,它能部分地恢復(fù)胸腺切除后的T細(xì)胞功能[6]。因此胸腺素、胸腺生成素和血清胸腺因子對誘導(dǎo)T細(xì)胞成熟有重要的作用。

另外，脾臟不僅具有造血功能，還能通過網(wǎng)狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的巨大纖維網(wǎng)來清除衰老死亡的紅細(xì)胞和血流中的大部分抗原。脾臟還能對血液中的循環(huán)抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)。當(dāng)巨噬細(xì)胞把抗原帶至白骨髓的脾小結(jié)處，數(shù)日后形成抗體的細(xì)胞由此遷移到紅髓，并在此部位產(chǎn)生免疫抗體[6]。

腔上囊是中樞淋巴器官，是抗體生成系統(tǒng)的細(xì)胞成長和分化的部位。在胚胎發(fā)育早期，骨髓產(chǎn)生生血干細(xì)胞（淋巴樣細(xì)胞），分化過程中有一支遷入腔上囊原基，受腔上囊微環(huán)境的影響而定向分化為B淋巴細(xì)胞。雛鳥孵出后B淋巴細(xì)胞逐步分布到脾臟和周圍淋巴。腔上囊是最早發(fā)生并提供B淋巴細(xì)胞的器官。遷入的淋巴細(xì)胞進(jìn)而分化出現(xiàn)IgM生成細(xì)胞，再分化出現(xiàn)IgG生成細(xì)胞等，尤其是從IgM生成細(xì)胞向IgG生成細(xì)胞的轉(zhuǎn)化必須依賴腔上囊的微環(huán)境。腔上囊還產(chǎn)生促進(jìn)B淋巴細(xì)胞分化成熟的激素物質(zhì)，腔上囊因子或腔上囊素。腔上囊活性肽是一種能夠顯著提高機(jī)體免疫功能的強(qiáng)有力的免疫增強(qiáng)物質(zhì)，有可能成為一種新型的免疫調(diào)節(jié)劑。

本試驗(yàn)的結(jié)果表明，添加天蠶素、免疫多糖和圓蔥寡糖顯著地增加了肉仔雞胸腺與脾臟的絕對質(zhì)量和相對重，各處理組的ND抗體水平及血液白細(xì)胞數(shù)均高于同期正常平均水平。這表明，在基礎(chǔ)日糧中添加天蠶素與添加免疫多糖及功能性圓蔥寡糖有相同的效果，可提高機(jī)體免疫力，激活巨噬細(xì)胞的吞噬活性，這對增強(qiáng)肉仔雞的抗感染能力、促進(jìn)生長具有重要作用。天蠶素在肉仔雞生產(chǎn)中應(yīng)用具有了現(xiàn)實(shí)意義。

3.2 天蠶素的促生長作用 抗菌肽又稱為抗微生物肽或肽抗生素，是機(jī)體非特異性免疫的重要組成部分，具有廣譜抗菌活性，可以抑殺細(xì)菌、真菌,抗腫瘤、抗病毒[7-9]?？咕姆肿拥淖饔梅绞接兴煌皇鞘拱屑?xì)胞膜快速去極化，導(dǎo)致K+外流而引起細(xì)胞的快速死亡。二是抗菌肽分子通過緊密結(jié)合到核糖體S0S亞基上，抑制蛋白合成起始復(fù)合物的形成，導(dǎo)致細(xì)胞死亡[10-11]。天蠶素是抗菌肽的一種，具有抗菌作用。本試驗(yàn)肉仔雞生產(chǎn)性能結(jié)果表明飼料中添加天蠶素能增強(qiáng)肉仔雞的抗感染能力、促進(jìn)生長。

3.3 天蠶素應(yīng)用存在的問題 由于腸道、組織和血漿中廣泛存在著蛋白水解酶，能夠很快降解進(jìn)入體內(nèi)的抗菌肽，使其失去抗菌活性。因此，抗菌肽的穩(wěn)定性也是制約其應(yīng)用的主要原因之一?？咕倪€可以發(fā)揮類似內(nèi)酰胺類抗生素的作用，通過激活溶菌酶，導(dǎo)致細(xì)菌自容。然而，由于大量細(xì)胞壁成分釋放可造成嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，因此，我們必須控制細(xì)菌在體內(nèi)的自溶現(xiàn)象[12]。毒性作用是當(dāng)前研究亟待解決的問題之一，隨著對抗菌肽構(gòu)效關(guān)系及藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)的深入研究，其臨床應(yīng)用存在的障礙正在逐一攻克?？咕氖且活悩O具發(fā)展前景的抗微生物制劑，它不僅能夠有效解決傳統(tǒng)的抗生素日益嚴(yán)重的耐藥性問題，而且以其獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)功能，為抗感染治療提供更有效的方法。

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