徐 彬，馬俊杰，2，王小龍，李智強(qiáng)，周 雷，徐增柏

(1沭陽(yáng)縣中醫(yī)院，江蘇沐陽(yáng)223600;2南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

化療是目前晚期或復(fù)發(fā)乳腺癌患者主要的治療手段，但仍有40%的患者死于腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移［1］。近年來(lái)隨著免疫學(xué)的發(fā)展及深入研究，生物治療取得了較大進(jìn)展，以樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)為基礎(chǔ)構(gòu)建的乳腺癌治療疫苗成為研究熱點(diǎn)［2］。但如何將DC疫苗特異性免疫治療與放、化療聯(lián)合，發(fā)揮綜合治療優(yōu)勢(shì)，尚需進(jìn)一步探索。近2年來(lái)，我們采用DC自體回輸聯(lián)合TA方案化療治療晚期乳腺癌患者22例，取得較好效果?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 44例晚期乳腺癌患者，年齡33～75歲，平均45歲;病程3～21個(gè)月。均經(jīng)病理及影像學(xué)檢查確診。排除合并有心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病;并發(fā)其他惡性腫瘤;有精神或心理疾病不能配合治療及療效評(píng)估者;妊娠、哺乳期婦女及過(guò)敏體質(zhì)患者。按照《中國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤診療規(guī)范》［3］中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期，存活期預(yù)計(jì)＞3個(gè)月，體力狀況(KPS)評(píng)分＞60分。血常規(guī)、肝腎功能、心電圖等檢查正常。曾先后行3～6個(gè)周期化療，化療方案為CAF或CEF;已停止化療1～3個(gè)月。將患者隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組各22例。

1.2 治療方法 對(duì)照組給予TA方案化療，第1～3天口服地塞米松片4.5 mg，2次/d。第2天靜滴多西紫杉醇(應(yīng)用前先予西咪替丁、非那根，預(yù)防其可能引起的胃腸道及過(guò)敏反應(yīng))75 mg/m2。第3天靜脈推注表柔比星50 mg/m2。同步予護(hù)胃、鎮(zhèn)吐、補(bǔ)液等常規(guī)對(duì)癥治療。21 d為1個(gè)療程。觀察組在上述治療基礎(chǔ)上給予DC，療程與化療同步。具體操作方法:采集患者外周血50 mL，分離外周血單核細(xì)胞(PBMC)加粒細(xì)胞—巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMGSF)、IL-4及培養(yǎng)液培養(yǎng)，采用同源異體的腫瘤細(xì)胞株裂解物作為腫瘤相關(guān)抗原(TAA)進(jìn)行抗原沖擊，培養(yǎng)7 d后成為致敏的成熟DC，取少量培養(yǎng)成熟的DC進(jìn)行細(xì)菌和真菌培養(yǎng)，結(jié)果為陰性時(shí)收集細(xì)胞。觀察組在采血后第2天進(jìn)行TA方案化療，用法、用量同對(duì)照組?；煹?、15、21、28天進(jìn)行DC回輸，每次回輸DC數(shù)量為(1.0～3.0)×107個(gè)，選擇腋下或腹股溝皮下注射。

1.3 血清IL-2和TNF-α檢測(cè)方法 采集治療第1天及治療后第29天清晨空腹靜脈血3 mL，待血塊收縮后，以4 000 r/min離心10 min，置-75℃冰箱保存。采用雙抗夾心ELISA法測(cè)定血清中IL-2和TNF-α。試劑盒購(gòu)于北京四正柏生物科技有限公司。按說(shuō)明書(shū)操作，并進(jìn)行質(zhì)量控制。酶標(biāo)儀(瑞士帝肯公司Rainbow型)由專(zhuān)人操作，自動(dòng)打印結(jié)果。

1.4 療效評(píng)價(jià)方法 ①近期療效。按WHO實(shí)體瘤標(biāo)準(zhǔn)判定，腫瘤完全消失并維持4周以上，無(wú)新病灶出現(xiàn)為完全緩解(CR);腫瘤體積減小50%以上，并維持4周以上，無(wú)新病灶出現(xiàn)為部分緩解(PR);腫瘤體積增大25%以下或縮小25%以下，并維持4周以上，無(wú)新病灶出現(xiàn)為穩(wěn)定(SD);腫瘤體積增大25%以上或有新病灶出現(xiàn)為進(jìn)展(PD)。②生活質(zhì)量。采用KPS評(píng)分方法對(duì)生活質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。③不良反應(yīng)。按WHO抗癌藥物急性亞急性毒性反應(yīng)分度標(biāo)準(zhǔn)分為0～Ⅳ度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以±s表示，兩組比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組CR 6例，PR 10例，SD 4例，PD 2例，有效率為72.7%，對(duì)照組分別為 3、6、9、4 例，40.9%，兩組有效率比較，P＜0.05。兩組治療前后血清IL-2和TNF-α水平及KPS評(píng)分比較見(jiàn)表1。兩組患者在治療過(guò)程中出現(xiàn)的毒性反應(yīng)主要是骨髓抑制、惡心、嘔吐、末梢神經(jīng)毒性等。觀察組骨髓抑制反應(yīng)如白細(xì)胞、血小板的下降程度較對(duì)照組輕;惡心、嘔吐、乏力的發(fā)生率低于對(duì)照組(P＜0.05)。末梢神經(jīng)毒性不良反應(yīng)未見(jiàn)明顯差異，均為Ⅰ～Ⅱ度，于治療結(jié)束后逐漸恢復(fù)。觀察組患者行DC治療時(shí)主要的不良反應(yīng)為發(fā)熱(5例，約22.7%)、關(guān)節(jié)疼痛(2例，約9%)，均為Ⅲ度以下，予消炎痛類(lèi)藥物對(duì)癥處理后改善。未發(fā)現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，無(wú)治療相關(guān)性死亡發(fā)生。

表1 兩組治療前后血清IL-2和TNF-α水平及 KPS 評(píng)分比較(±s)

表1 兩組治療前后血清IL-2和TNF-α水平及 KPS 評(píng)分比較(±s)

注:與同組治療前比較，*P＜0.01;與對(duì)照組治療后比較，▲P＜0.01

組別 KPS 評(píng)分(分) IL-2(μg/L) TNF-α(μg/L)63.00 ±11.74 8.04 ±2.24 3.85 ±1.53觀察組治療前 72.05 ± 9.03 8.33 ±1.66 4.40 ±1.47治療后 74.75 ±14.46＊▲ 12.49 ±1.71＊▲ 6.62 ±2.81＊▲對(duì)照組治療前 73.42 ± 9.45 8.81 ±3.93 4.37 ±1.49治療后

3 討論

乳腺癌是危及女性健康的主要疾病之一，發(fā)病率及病死率隨年齡的升高而上升。目前研究［4］發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及復(fù)發(fā)與機(jī)體的免疫功能下降密切相關(guān)，大部分腫瘤患者機(jī)體長(zhǎng)期處于免疫力低下?tīng)顟B(tài)。

DC作為專(zhuān)職抗原呈遞細(xì)胞，因其抗原呈遞功能及免疫佐劑作用，可誘導(dǎo)出高效而特異的抗腫瘤免疫，越來(lái)越引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視［5］。研究［6］表明，DC是已知體內(nèi)功能最強(qiáng)的專(zhuān)職抗原呈遞細(xì)胞，最大特點(diǎn)是能刺激初始型T細(xì)胞活化和增殖，是特異性免疫應(yīng)答的始動(dòng)者。DC還能誘導(dǎo)機(jī)體的體液免疫，激活 NK、NK-T細(xì)胞，參與非特異性免疫［7］。馬騰等［8］用熱休克法制備的DC腫瘤疫苗治療乳腺癌療效滿意，且能增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。TA方案是治療乳腺癌常用的化療方案，療效肯定，耐受性好［9］，然而目前國(guó)內(nèi)外尚缺乏DC聯(lián)合該方案治療乳腺癌的臨床隨機(jī)對(duì)照研究報(bào)道。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組治療有效率及生活質(zhì)量改善程度明顯優(yōu)于對(duì)照組，而不良反應(yīng)尤其是骨髓抑制情況卻顯著低于對(duì)照組，此可能與DC能減輕化療對(duì)機(jī)體造成的短暫免疫抑制狀態(tài)有關(guān)［10］。

IL-2又稱(chēng)T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng);增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)及自然殺傷細(xì)胞與單核細(xì)胞的吞噬作用，在機(jī)體抗腫瘤、抗感染中具有重要作用。TNF-α參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有雙向作用［11］。TNF-α能增強(qiáng)宿主免疫力，激活 NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞，對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用;高水平TNF-α能促進(jìn)腫瘤血管生成，使氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖及分化。本研究中，對(duì)照組血清 IL-2和TNF-α水平較治療前下降，說(shuō)明化療降低了機(jī)體的免疫功能。而觀察組患者免疫功能明顯較治療前改善。

近年來(lái)，隨著DC在腫瘤治療中的廣泛應(yīng)用，其臨床應(yīng)用時(shí)出現(xiàn)的不良反應(yīng)日益受到重視。其引起的不良反應(yīng)類(lèi)似于化療藥物，可見(jiàn)發(fā)熱惡寒、乏力、流感樣癥狀，注射部位紅腫、酸痛、瘙癢等［12］;胃腸道反應(yīng)主要是惡心、嘔吐，食欲下降［13］。嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，干擾進(jìn)一步治療計(jì)劃。而在這些常見(jiàn)不良反應(yīng)中尤以發(fā)熱最常見(jiàn)，是決定DC治療成敗的重要因素［14］。本研究觀察組行DC回輸時(shí)，常見(jiàn)的不良反應(yīng)有發(fā)熱、關(guān)節(jié)疼痛，均為Ⅲ度以下，予消炎痛類(lèi)藥物對(duì)癥處理后改善。未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的不良發(fā)應(yīng)，與國(guó)外報(bào)道［15］一致。據(jù)報(bào)道，此類(lèi)發(fā)熱為非細(xì)菌性炎癥引起，主要與抗原抗體復(fù)合物引起的免疫性炎癥密切相關(guān)［16］。我們認(rèn)為回輸?shù)腄C雖然由患者自體的外周血培養(yǎng)而來(lái)，但培養(yǎng)過(guò)程中的壞死組織殘留，抗原殘余的影響需要考慮。綜上所述，DC自體回輸聯(lián)合TA方案化療治療乳腺癌效果較好，可改善患者免疫功能，提高生活質(zhì)量，減輕化療的不良反應(yīng)。

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