張小博 李艷會 李開良 張 平 (吉林大學(xué)第一醫(yī)院肝膽胰外科，吉林 長春 300)

胰腺癌是預(yù)后最差的腫瘤之一，具有發(fā)病隱匿、早期癥狀不典型、診斷困難、可出現(xiàn)局部淋巴結(jié)和血行轉(zhuǎn)移、惡性程度高以及對各種治療均不敏感等特點。有研究表明〔1〕，胰腺癌轉(zhuǎn)移是該病難以治愈的主要原因之一。腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移等過程與腫瘤血管生成密切相關(guān)，也與多種細胞因子的作用有關(guān)〔2〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)主要作用于血管內(nèi)皮細胞?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一類活性依賴于鋅離子和鈣離子的蛋白水解酶，幾乎在所有腫瘤組織中的表達均較正常組織明顯增加〔3〕，其過量表達后打破癌細胞生存的微環(huán)境平衡狀態(tài)，破壞了細胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜(BM)的結(jié)構(gòu)，促進了癌細胞的侵襲能力和轉(zhuǎn)移能力。本文分析胰腺癌組織的中VEGF、MMP-2、MMP-9的表達情況及相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源 取自2009年1月至2013年1月于吉林大學(xué)第一醫(yī)院接受手術(shù)治療的50例胰腺癌患者手術(shù)切除病理標(biāo)本作為樣本。年齡34～76〔平均(55.2±10.3)歲〕，中位年齡55歲，其中男33例，女17例。病理分化情況:低分化腺癌13例，中分化23例，高分化14例。所有患者均有完整的臨床資料。另取同期行膽胰腺癌根治術(shù)(胰十二指腸切除術(shù))的膽管癌或胰腺癌癌旁1 cm正常胰腺組織10例作為對照。

1.2 SP法 所有標(biāo)本均經(jīng)過甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋;分別采用兔抗人VEGF多克隆抗體(bs-0279R)、兔抗人MMP-2多克隆抗體(bs-0412R)、兔抗人MMP-9多克隆抗體(bs-0397R)均購自北京博奧森生物制品廠。采用福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司的S-P免疫組化試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，具體步驟參照邁新公司免疫組化染色步驟說明書。

1.3 結(jié)果判斷 參照文獻〔4～6〕，MMP-2、MMP-9、VEGF 表達判定陽性的標(biāo)準(zhǔn):胞質(zhì)有棕黃色顆粒為陽性細胞，高倍鏡下(400倍)隨機取10個高倍視野，陽性細胞數(shù)＞10%定為陽性，＜10%定為陰性。染色強度與陽性細胞所占百分比結(jié)果評分相加，0～3分為陰性(－)，4～7分為陽性(+)。見表1。

表1 免疫組化計分標(biāo)準(zhǔn)

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進行分析，陽性率組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)分析用非參數(shù)相關(guān)(Spearman)分析。

2 結(jié)果

2.1 MMP-2表達及與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 MMP-2在胰腺癌組織及胰腺正常組織均有表達。胰腺癌患者MMP-2陽性表達〔34例(68%)〕明顯高于胰腺正常組織〔2例(20%)〕(P＜0.05)。圖1。

MMP-2的陽性表達率隨著胰腺癌分化程度的降低而呈上升趨勢，但三者間表達無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。MMP-2陽性表達率隨著胰腺癌臨床分期的增高而增強(P＜0.05)，有、無轉(zhuǎn)移組間表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而與年齡，性別，腫瘤部位及大小無關(guān)(P＞0.05)。見表2。

表2 MMP-2在胰腺癌中的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

2.2 MMP-9的表達及與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 MMP-9在胰腺癌組織及胰腺正常組織均有表達。胰腺癌患者MMP-9陽性表達〔32例(64%)〕高于胰腺正常組織〔1例(10%)〕(P＜0.01)。見圖1。

MMP-9陽性表達率隨著胰腺癌臨床分期的增高而增強P＜0.01，無轉(zhuǎn)移組間表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，但與年齡、性別、病理分化程度、腫瘤部位及大小無關(guān)(P＞0.05)。見表3。

表3 MMP-9在胰腺癌中的表達與腫瘤生物學(xué)指標(biāo)的關(guān)系(n)

2.3 VEGF的表達及與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 VEGF在胰腺癌組織及胰腺正常組織均有表達。胰腺癌患者VEGF陽性表達〔32例(64%)〕高于胰腺正常組織〔2例(20%)〕(P＜0.05)。見圖1。

VEGF陽性表達率隨著胰腺癌臨床分期的增高而增強(P＜0.05)，有、無轉(zhuǎn)移組及不同胰腺癌分化程度組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，與年齡、性別、腫瘤部位及大小無關(guān)(P＞0.05)。見表4。

表4 VEGF在胰腺癌中的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

2.4 MMP-2、MMP-9、VEGF在胰腺癌組織中表達相關(guān)性VEGF、MMP-2與MMP-9三者之間表達均具有高度相關(guān)性(P＜0.01，Kappa＞0.4)。其中 MMP-9(+)時，VERF(+)26 例，(－)6例;MMP-9(－)時，VEGF(+)6例，(－)12例;MMP-2(+)時，VEGF(+)29例，(－)5例;MMP-2(－)時，VEGF(+)3 例，(－)13例;MMP-9(+)時，MMP-2(+)28例，(－)4例;MMP-9(－)時，MMP-2(+)6例，(－)12例。

圖1 MMP-2、MMP-9、VEGF在胰腺癌組織的陽性表達(×400)

3 討論

腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力作為腫瘤的主要特點之一，是決定惡性程度重要因素之一。其包括腫瘤細胞自身的黏附性降低，癌細胞與ECM之間相互作用。這將主要依賴于MMPs和VEGF的作用。MMPs是其中較為重要的一類，其中MMP-2、MMP-9的作用顯得尤為重要。Curran等〔7〕研究發(fā)現(xiàn)MTI-MMP可以激活 MMP-2酶原，激活的MMP-2反過來又可以激活MMP-9，從而形成正反饋回路，促進惡性腫瘤的擴散。血管的生成受到許多因子的調(diào)控，其中最重要的是VEGF，VEGF能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞增殖，毛細血管袢形成，促進新生血管形成，并可增加微血管通透性。An等〔8〕認(rèn)為VEGF是調(diào)控因子中目前針對腫瘤新生血管過程中最強的，具有高度特異性。Suzuki等〔9〕認(rèn)為VEGF具有促進血管內(nèi)皮細胞生長、增殖、促進血管新生、增加血管通透性以及血管維持功能，還直接與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)。

本研究提示MMP-2、MMP-9在胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中都起著重要作用。另外提示，MMP-2、MMP-9通過降解BM及ECM，促進胰腺癌細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移，且MMP-2、MMP-9表達率越高，該腫瘤的浸潤性越強，因此，聯(lián)合檢測胰腺組織中MMP-2、MMP-9的表達，對于臨床上做出早期診斷，判斷預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義，同時又可為臨床選用合適的MMPs抑制劑進行后期治療提供參考。VEGF的表達與胰腺癌的分化程度相關(guān)，這提示VEGF表達的高低與胰腺癌的惡性程度密切相關(guān)，而胰腺癌的惡性程度與預(yù)后密切相關(guān)。這與有關(guān)的研究成果相一致〔10～13〕。

本結(jié)果還表明MMP-2、MMP-9、VEGF可能在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展及血管生成中發(fā)揮協(xié)同作用，促進BM及ECM的分解，有利于胰腺癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，但其機制尚有待進一步研究。

1 成文武，劉魯明，于爾辛.202例胰腺癌臨床分析〔J〕.中華消化雜志，2003;23(12):758-9.

2 Gupta MK，Qin RY.Mechanism and its regulation of tumor-induced angiogenesis〔J〕.World J Gastroenterol，2003;9(6):1144-55.

3 Mc Cawley LJ，Matrisian LM.Matrix metalloproteinases:they＇re not just for matrix any－more〔J〕.Curr Opin Cell Biol，2001;13(5):534-40.

4 Kikuchi R，Noguehi T，Takeno S，et al.Immunohistochemieal detection of membrane-type-l-matrix metalloproteinase in colorectal carcinoma〔J〕.Br J Cancer，2000;83:215-8.

5 譚江平，校宏兵.血管內(nèi)皮生長因子表達與結(jié)腸癌預(yù)后的關(guān)系〔J〕.中國癌癥雜志，2001;11(4):17-22.

6 Maeda K，Chung YS，Ogawa Y，et al.Prognostic value of vascular Endothelial growth factor expression in gastric carcinoma〔J〕.Cancer，1996;77(6):858-63.

7 Curran S，Murray G.Matrix metalloproteinases:molecular aspects of their:roles in tumour invasion and metastasis〔J〕.Eur J Cancer，2000;36(3):1621-30.

8 An FQ，Matsuda M，F(xiàn)ujii H，et al.Expression of vascular endothelial growth factor in surgical specimens of hepatocellular carcinoma〔J〕.J Cancer Res Clino Ncol，2000;126(3):153-60.

9 Suzuki K，Hayashi N，Miyamoto Y，et al.Expression of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor in human hepatocellular carcinoma〔J〕.Cancer Res，1996;56(13):3004-9.

10 李春龍，崔云甫，杜雪飛，等.VEGF和MMP-9在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的表達及臨床意義〔J〕.世界華人消化雜志，2008;16(9):1012-6.

11 朱學(xué)鋒，陳益君，顧繼禮，等.基質(zhì)金屬蛋白酶-2在胰腺癌組織中的表達及其臨床意義〔J〕.中國綜合臨床，2009;25(10):1032-4.

12 陳建峰.HIF-lα、VEGF在胰腺癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.肝膽胰外科雜志，2008，20(5):343-4.

13 Bramhall SR，Neoptolemos JP，Stamp GW，et al.Imbalance of expression of matrix metalloproteinase(MMPs)and tissue inhibition of the matrix metalloproteinase(TIMPs)in human pancreatic carcinoma〔J〕.J Pathol，1997;182(3):347-55.