小柴胡湯對C6膠質(zhì)瘤大鼠模型抑瘤及免疫功能的影響

于慧玲 麻春杰 蓋 聰 (北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

小柴胡湯由柴胡、黃芩、人參、半夏、甘草、生姜、大棗組成，是中醫(yī)和解少陽的代表方，主治少陽病證〔1〕。本方配伍嚴謹，組合巧妙，具有扶正祛邪，和解少陽，疏肝利膽，通達表里陰陽，協(xié)調(diào)臟腑等多種功用，被古今臨床廣泛運用〔2〕。近年來，有實驗〔3〕表明小柴胡湯在治療腫瘤方面有一定的優(yōu)勢。本研究采用C6膠質(zhì)瘤大鼠模型，旨在觀察小柴胡湯對C6膠質(zhì)瘤大鼠的抑瘤作用及免疫增強作用。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 小柴胡湯組成:柴胡(78.125 g);黃芩3兩(46.875 g);人參 3 兩(46.875 g);清半夏半升(42 g);炙甘草3 兩(46.875 g);生姜3 兩(46.875 g);大棗(30 g)。替莫唑胺由江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司提供;ELISA試劑盒:腫瘤壞死因子(TNF)α、白細胞介素(IL)-2和IL-6均由南京建成生物有限公司提供。

1.2 實驗分組及模型制備〔4〕清潔級Wistar老年雄性大鼠70 只，體重(321.5±3.3)g，18 月齡，10 只作為正常對照組，60只右前肢腋窩皮下接種2×106/20 μl的C6膠質(zhì)瘤細胞懸液;隨機分為腫瘤對照組、陽性藥A組(替莫唑胺;50 mg/kg)、陽性藥B組(替莫唑胺;25 mg/kg)、小柴胡湯C組(50 g/kg)、小柴胡湯D組(20 g/kg)、小柴胡湯E組(10 g/kg)。

1.3 中藥制備 小柴胡湯組成中的7味中藥，以8倍量蒸餾水浸泡30 min，加熱保持微沸30 min，過濾;殘渣加6倍量蒸餾水，微沸30 min，過濾，合并2次濾液，混合后濾液干燥濃縮至100 ml，即小柴胡湯E(10 g/ml);以類似方法濃縮熬制小柴胡湯D(20 g/ml);小柴胡湯C(50 g/ml);4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 給藥方法及取材 每組均分別灌胃給予生理鹽水、陽性藥A、陽性藥B、小柴胡湯C、小柴胡湯D和小柴胡湯E，連續(xù)服藥5 d，休息4 d，共給藥3次，于最后1次給藥后2 d處死動物，眼球取血，分離血清(3 000 r/min，10 min)，標(biāo)記好后置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 檢測指標(biāo)

1.5.1 體重隨時間變化的檢測方法從實驗開始至實驗結(jié)束，使用NL-200電子天平每日稱量大鼠體重。

1.5.2 腫瘤體積隨時間變化的檢測方法 從腫瘤肉眼可見至實驗結(jié)束，使用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的短徑(a)和長徑(b)，腫瘤體積公式=1/2×ab2(mm3)，記錄。

1.5.3 大鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-6蛋白含量的檢測方法采用ELISA試劑盒，嚴格按照試劑盒方法操作。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進行分析，數(shù)據(jù)以s表示，采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體重隨時間的變化 腫瘤對照組及小柴胡湯各劑量組大鼠的體重均隨時間呈增長趨勢(均P＜0.01)，陽性藥各劑量組大鼠的體重均隨時間呈降低趨勢(均 P＜0.01)。見圖1。

2.2 各組大鼠腫瘤體積隨時間的變化 各實驗組大鼠的腫瘤體積均隨時間呈增長趨勢，但陽性藥各劑量組和小柴胡湯各劑量組大鼠的腫瘤體積均明顯增長緩慢，有明顯的抑瘤作用，與腫瘤對照組比較，各組之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.01)。見圖2。

圖1 體重隨時間的變化趨勢

圖2 腫瘤體積隨時間的變化趨勢

2.3 各組大鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-6的蛋白水平 血清學(xué)檢測結(jié)果顯示，與腫瘤對照組比較，小柴胡湯各劑量組大鼠血清中TNF-α、IL-2、IL-6的蛋白水平均明顯升高且各劑量組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.01);陽性藥各劑量組大鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-6的蛋白水平均明顯降低且各劑量組之間差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.01)。見表1。

表1 小柴胡湯對C6膠質(zhì)瘤大鼠血清TNF-α、IL-2、IL-6蛋白水平的影響(s，n=10)

表1 小柴胡湯對C6膠質(zhì)瘤大鼠血清TNF-α、IL-2、IL-6蛋白水平的影響(s，n=10)

與正常對照組比較:1)P＜0.01;與腫瘤對照組比較:2)P＜0.01;與陽性藥A組比較:3)P＜0.01;與小柴胡湯C組比較:4)P＜0.01;與小柴胡湯 D 組比較:5)P＜0.01

組別 TNF-α(pg/ml)IL-2(pg/ml)IL-6(pg/ml)正常對照組 9.76±0.83 3.24±0.22 2.61±0.43腫瘤對照組 5.56±0.241) 1.82±0.171) 1.42±0.311)陽性藥 A 組 3.51±0.452) 1.08±0.312) 0.83±0.162)陽性藥 B 組 4.17±0.683) 1.33±0.423) 1.01±0.173)小柴胡湯 C 組 9.34±0.792) 2.91±0.562) 2.26±0.612)小柴胡湯 D 組 8.01±0.914) 2.37±0.264) 1.98±0.634)小柴胡湯 E 組 6.98±0.745) 2.01±0.345) 1.77±0.495)

3 討論

機體的免疫功能狀態(tài)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有密切關(guān)系，一旦腫瘤發(fā)生，只有不斷地調(diào)節(jié)免疫，充分發(fā)揮機體自身抗腫瘤的能力，控制轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，使癌細胞逐漸向正常細胞發(fā)生逆轉(zhuǎn)，腫瘤患者才能逐漸走向康復(fù)〔5〕。惡性腫瘤患者常有免疫力低下的狀況，因此檢測機體免疫力是評價腫瘤患者臨床用藥療效的重要指標(biāo)之一〔6〕。研究表明:IL-2對腫瘤細胞無直接的細胞毒性作用，主要通過調(diào)節(jié)機體的免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)，IL-2具有促進 T細胞增殖、增強殺傷 T細胞、自然殺傷(NK)細胞的活性等廣泛的免疫調(diào)節(jié)作用，IL-2水平的高低是機體細胞免疫的重要標(biāo)志〔7〕。IL-6是由T淋巴細胞、B淋巴細胞、單核細胞等產(chǎn)生的一種多功能細胞因子，具有廣泛的生物學(xué)活性，主要包括促進B細胞分化;刺激B細胞分泌免疫球蛋白;刺激未成熟的胸腺細胞分化為成熟的細胞毒性T細胞;擴大NK細胞的殺傷能力;啟動抗病毒及抗腫瘤作用等〔8〕。TNF-α是由單核巨噬細胞產(chǎn)生的內(nèi)源性細胞因子，具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，增強T細胞、B細胞對抗原和絲裂原刺激的增殖反應(yīng)等多種生理學(xué)作用，與機體的免疫反應(yīng)也密切相關(guān)〔9〕。

小柴胡湯是《傷寒論》的著名代表方，有報道〔10〕稱該方具有預(yù)防、治療腫瘤及提高機體免疫力的作用，并且取得了很好的療效。

綜上，小柴胡湯能夠抑制腫瘤的生長，升高C6膠質(zhì)瘤大鼠血清IL-2、IL-6及TNF-α蛋白的水平，其中小柴胡湯中、高劑量組效果更顯著;推測小柴胡湯其抑瘤作用可能與促進C6膠質(zhì)瘤大鼠免疫系統(tǒng)功能有關(guān)，具體的機制還有待進一步探討。

1 李 玲，劉歡慶，王 萍.小柴胡湯防治腫瘤機制研究進展〔J〕.中醫(yī)藥學(xué)報，2012;40(3):148-50.

2 林子洪，廖威明，傅 明，等.莪蓮小柴胡湯的抗癌作用及其機制研究〔J〕.中國病理生理雜志，2008;24(9):1741-5.

3 茅 敏，付 虹，黃秀深，等.小柴胡湯誘導(dǎo)荷瘤小鼠S180細胞凋亡及對細胞周期的影響〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005;14(20):2646-8.

4 王曉剛，魏學(xué)忠，周定標(biāo).Wistar大鼠C6膠質(zhì)瘤動物模型的腫瘤生長特點〔J〕.軍醫(yī)進修學(xué)院學(xué)報，2001;22(4)300-2.

5 劉德宜，劉光智，張 超，等.小柴胡湯免疫調(diào)節(jié)作用的實驗研究〔J〕.山東醫(yī)藥，2003;43(22):26-7.

6 黃秀深，張豐華，茅 敏，等.小柴胡湯對S180荷瘤小鼠紅細胞免疫功能的實驗研究〔J〕.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2003;26(3):9-10.

7 張 磊，彭龍玲，楊 薇，等.小柴胡湯提取物對小鼠的免疫增強作用研究〔J〕.中藥藥理與臨床，2002;18(1):4-5.

8 方樂堃，潘凌霄，黎雅婷，等.復(fù)方小柴胡湯對荷EAC鼠IL-2水平和CD+4/CD+8比值的影響〔J〕.中國病理生理雜志，2007;23(9):1720-3.

9 茅 敏，黃秀深，賈 波，等.小柴胡湯誘導(dǎo)單核細胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子的實驗研究〔J〕.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2003;26(4):35-6.

10 梁靚靚，殷東風(fēng).小柴胡湯抗腫瘤作用的實驗研究進展〔J〕.甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008;25(5):51-4.