PTEN在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

張谷月 張志勇 王 曄 吳晨鵬 張 林 劉麗云 李 華 云 翔 沈福海

(唐山市工人醫(yī)院病理科，河北 唐山 063000)

結(jié)腸癌源于結(jié)腸黏膜上皮，發(fā)病率較高，對(duì)人群的影響較大〔1〕。磷酸酶與張力蛋白同源物(PTEN)是新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，具有雙特異性磷酸酶的活性，廣泛作用于細(xì)胞信號(hào)通路中〔2〕，并通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡發(fā)揮調(diào)節(jié)腫瘤生物學(xué)行為的作用。本研究旨在探討PTEN在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為揭示腫瘤的生物學(xué)行為提供理論幫助。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2006年1月1日至2007年9月1日在唐山市工人醫(yī)院普外科住院的結(jié)腸癌并行外科手術(shù)患者的存檔石蠟標(biāo)本86例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合WHO在2008年結(jié)腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，由兩位病理主治醫(yī)師再次確診分型;(2)患者術(shù)前均未接受過放療和化療;(3)臨床隨訪資料完全。其中男46例，女40 例，年齡 36 ～78〔平均(52.5±8.7)〕歲。病理類型分組:高分化25例，中分化30例，低分化31例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組40例。選取癌旁正常組織60例(取自結(jié)腸癌患者癌旁＞5 cm組織)為切緣黏膜組，男:女=1∶1。年齡38～75〔平均(51.6±8.0)〕歲。另選取結(jié)腸腺瘤伴不典型增生60例為腺瘤組，男 ∶女 =1∶1，年齡 37 ～77〔平均(51.4±7.6)〕歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化法染色及判定標(biāo)準(zhǔn) 新鮮標(biāo)本常規(guī)取材后經(jīng)10%中性甲醛固定，蘇木素-伊紅(HE)染色按常規(guī)步驟進(jìn)行。采用免疫組化(S-P)法對(duì)PTEN蛋白進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。兔抗人PTEN單克隆抗體購自Dako公司;SP免疫組織化學(xué)試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):PTEN主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕褐色顆粒染色為陽性。每個(gè)切片于高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)不重復(fù)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞(對(duì)少數(shù)不足10個(gè)高倍視野的，以觀察到的最多高倍視野計(jì)算平均值)，根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行判斷。以陽性細(xì)胞所占百分比＜25%為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)≥25%為陽性。

1.2.2 隨訪 本組患者隨訪時(shí)間為9～60個(gè)月，所有患者術(shù)后均按照美國國籍綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)結(jié)腸癌治療指南進(jìn)行隨訪。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行分析，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，并進(jìn)行生存分析。

2 結(jié)果

2.1 PTEN在結(jié)腸腺癌組、腺瘤組及切緣黏膜組中的表達(dá)PTEN 在腺癌組(34.88%，30 例)、腺瘤組(68.33%，41 例)及切緣黏膜組(83.33%，50例)中的表達(dá)陽性率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。見圖1。

圖1 PTEN在結(jié)腸腺癌組織(IHC，×200)

2.2 結(jié)腸腺癌組中PTEN的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系PTEN在腺癌組分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、腫瘤大小、浸潤深度及不同Ki-67表達(dá)的比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)腸腺癌中PTEN在分化較好、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅰ+Ⅱ期、腫瘤直徑≤3 cm、浸潤深度未達(dá)漿膜、Ki-67低表達(dá)的腫瘤中表達(dá)較高。而在不同年齡、不同性別、有無炎細(xì)胞浸潤、不同結(jié)腸部位的比較差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)，見表1。

表1 PTEN在不同臨床病理特征結(jié)腸腺癌組織中的表達(dá)

2.3 結(jié)腸腺癌組中PTEN表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 本組患者隨訪時(shí)間為9～60個(gè)月，經(jīng)生存分析顯示，結(jié)腸癌中PTEN的表達(dá)均與預(yù)后相關(guān)(P＜0.05)。PTEN低表達(dá)患者的預(yù)后差，高表達(dá)患者的預(yù)后好。見圖2。

圖2 PTEN在結(jié)腸腺癌組織中的表達(dá)與結(jié)腸腺癌患者生存時(shí)間的關(guān)系

3 討論

結(jié)腸癌在我國發(fā)病率高，臨床最常見，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。目前其發(fā)生、發(fā)展機(jī)制尚不清楚?？赡芘c吸煙、飲酒、飲食、空氣污染、病毒感染等因素有關(guān)〔1〕。惡性腫瘤在發(fā)生和進(jìn)展過程中，受到某些異常改變基因和蛋白的異常調(diào)控，當(dāng)其成分發(fā)生突變或異常表達(dá)時(shí)，結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)惡變，而腺瘤發(fā)生的不典型增生是結(jié)腸癌重要的癌前病變〔3，4〕。

PTEN作為抑癌基因，惡性腫瘤中可能存在PTEN/c-myc動(dòng)態(tài)平衡〔5〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明當(dāng)癌變發(fā)生時(shí)，PTEN表達(dá)逐漸丟失，提示PTEN在惡變細(xì)胞中逐漸失去抑癌的作用。PTEN抑制惡性腫瘤進(jìn)展是通過抑制血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的作用實(shí)現(xiàn)的〔6，7〕;即PTEN可以通過降低內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力、增加血管內(nèi)皮生長的抑制因子作用進(jìn)而減少腫瘤的血管新生。還有觀點(diǎn)認(rèn)為PTEN可以直接使磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)的D3位點(diǎn)去磷酸化，有效的降解絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶 B(PKB/AKT)的磷酸化水平，拮抗下游通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)〔8，9〕，抑制VEGF的分泌而抑制血管的新生。PTEN通過其脂質(zhì)磷酸酶活性調(diào)節(jié)局灶聚集黏附激酶對(duì)細(xì)胞與細(xì)胞間的黏附作用、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的降解作用進(jìn)行有效的調(diào)節(jié)，從而多方面調(diào)節(jié)腫瘤的生物學(xué)功能〔10，11〕。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示PTEN表達(dá)丟失參與到結(jié)腸癌的分化、淋巴道播散、腫瘤的生長及細(xì)胞的增殖中，也提示PTEN的抑癌作用廣泛。本研究顯示，PTEN的表達(dá)與患者的預(yù)后相關(guān)，即PTEN低表達(dá)患者的預(yù)后差，因此檢測(cè)PTEN表達(dá)丟失的嚴(yán)重程度可能是判斷結(jié)腸癌預(yù)后的重要指標(biāo)。

總之，PTEN在結(jié)腸癌中低表達(dá)并與結(jié)腸癌患者臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān)，其可能對(duì)結(jié)腸癌的進(jìn)展有抑制作用，檢測(cè)PTEN蛋白表達(dá)可為結(jié)腸癌的診斷及預(yù)后評(píng)估提供幫助。

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