孫曙光，李玉潔，李玲玲，袁培培，赫金麗，王小蘭

河南中醫(yī)學(xué)院 鄭州450046

卷柏為多年生草本植物，為蕨類卷柏科卷柏屬植物卷柏的全草，主要功效為活血通經(jīng)。前期研究結(jié)果表明卷柏具有雌激素樣作用［1-2］，還可降血糖［3-5］、降血脂［6-7］、預(yù)防骨質(zhì)疏松［8-9］和抗輻射等。該課題組對卷柏的化學(xué)成分進行了全面系統(tǒng)的研究，從中分離并富集得到大量的黃酮類化合物，且對卷柏黃酮的富集工藝進行了研究［10］。該研究著重探討了卷柏黃酮對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響，為進一步進行臨床研究和安全用藥提供資料，也可為長期毒性實驗設(shè)計和開發(fā)新藥提供參考。

1 材料與方法

1．1 實驗動物、藥物、儀器及主要試劑 140只昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，購自河南省實驗動物中心，實驗期間在二級動物房喂養(yǎng)，環(huán)境溫度為(25 ±1)℃。卷柏科卷柏屬卷柏，加體積分數(shù)70%乙醇回流提取2次，回收乙醇，濃縮至1．05～1.10 kg/L，按比例取提取部位上聚酰胺柱，依次用水、體積分數(shù)50%乙醇、體積分數(shù)80%乙醇洗脫，所得的體積分數(shù)80%乙醇部位即為卷柏黃酮部位。80%乙醇部位回收乙醇，濃縮至密度達1．3～1．4，計算浸膏重量，加入已均勻混合干燥的輔料，充分混勻，淀粉漿制粒(18 目篩)，45℃干燥，整粒，加入滑石粉，混勻，壓制成片，即得66．7 g/L 的卷柏黃酮片劑。ZZ-6 小鼠自主活動測試儀(成都泰盟科技有限公司)，AB204-N 萬分之一精密分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)

1．2 各組小鼠自發(fā)活動的變化 采用隨機數(shù)字表法將40只小鼠分為空白對照組、卷柏黃酮低劑量(74 mg/kg)組、中劑量(148 mg/kg)組、高劑量(296 mg/kg)組4組，每組10只，各藥物組單次灌胃給藥后30 min 將小鼠投入自主活動記錄儀中，適應(yīng)5 min 后，觀察5、15、30、60、90 min 內(nèi)小鼠自主活動次數(shù)。對照組給予等體積的生理鹽水灌胃。

1．3 各組小鼠協(xié)調(diào)運動的變化 采用隨機數(shù)字表法將50只小鼠分為5組(分組同1．2，另以氯丙嗪給藥為陽性對照組)，每組10只，單次灌胃給藥后，取直徑1．0 cm、長70 cm 的光滑金屬棒一根，垂直豎立固定，并于給藥后30、60、90 min 將小鼠置于棒頂端，頭向下使其自然爬行，觀察小鼠協(xié)調(diào)運動能力，每只小鼠觀察3次，記錄爬桿時間并進行評分。評分標準:3 s 內(nèi)完成爬行全程得4 分;超過3 s 并向下滑得3 分;未完成全程爬桿得2 分;抓不住桿得1分;正反反射消失得0 分。

1．4 各組小鼠對閾下劑量戊巴比妥鈉催眠持續(xù)時間的比較 采用隨機數(shù)字表法將50只小鼠分為5組(分組同1．2，另以地西泮給藥為陽性對照組)，每組10只，單次灌胃給藥后30 min，各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(40 mg/kg)，以翻正反射消失1 min為標準，記錄睡眠持續(xù)時間。

1．5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13．0 進行分析，應(yīng)用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析比較各組小鼠自主活動次數(shù)和爬桿評分，應(yīng)用單因素方差分析和LSD-t 檢驗比較各組小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉催眠持續(xù)時間，檢驗水準α=0．05。

2 結(jié)果

2．1 卷柏黃酮對小鼠自主活動的影響 見表1。給藥5 min 后，3個藥物組小鼠的自主活動次數(shù)有所增加。

表1 卷柏黃酮對小鼠自主活動的影響(n=10)

2．2 卷柏黃酮對小鼠協(xié)調(diào)運動的影響 見表2。

表2 卷柏對小鼠協(xié)調(diào)運動影響(n=10)

2．3 卷柏黃酮對小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉催眠作用的影響 見表3。卷柏黃酮對小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠持續(xù)時間無明顯影響。

表3 卷柏對小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉催眠作用的影響

3 討論

動物的自主活動度反映其中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能狀態(tài)，興奮時其自主活動增加，抑制時則減少。因此，記錄動物自主活動次數(shù)是神經(jīng)精神藥物研究中經(jīng)典的實驗方法。該實驗結(jié)果顯示，高劑量卷柏黃酮組小鼠給藥后自主活動次數(shù)低于其他組。該實驗用爬桿實驗作為測定動物協(xié)調(diào)運動的指標，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，中、低劑量卷柏黃酮對小鼠的協(xié)調(diào)運動能力無明顯影響，而高劑量卷柏黃酮可明顯降低小鼠的協(xié)調(diào)運動能力;閾下劑量戊巴比妥催眠作用的實驗也顯示，不同劑量卷柏黃酮對小鼠睡眠持續(xù)時間的影響也不明顯。

有文獻［11］顯示，含有卷柏藥材的復(fù)方藥物有鎮(zhèn)靜作用，該實驗結(jié)果也顯示中、低劑量卷柏黃酮具有一定的鎮(zhèn)靜作用，但該作用還需一定的重復(fù)性實驗及作用機制等實驗進一步的驗證。

［1］鄭曉珂，李冬梅，蔣赟，等．卷柏中雌激素類成分的提取［J］．中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(12):1

［2］鄭曉珂，呂鵬飛，王玲巧，等．卷柏等5種中藥植物雌激素活性篩選的實驗研究［J］．中國中藥雜志，2006，31(15):1254

［3］鄭曉珂，李玉潔，張莉，等．卷柏對2 型糖尿病大鼠模型葡萄糖代謝影響的實驗研究［J］．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009，36(10):1918

［4］Zheng XK，Li YJ，Zhang L，et al．Antihyperglycemic activity of Selaginella tamariscina(Beauv．)Spring［J］．J Ethnopharmacol，2011，133(2):531

［5］Zheng XK，Zhang L，Wang WW，et al．Anti-diabetic activity and potential mechanism of total flavonoids of Selaginella tamariscina(Beauv．)Spring in rats induced by high fat diet and low dose STZ［J］．J Ethnopharmacol，2011，137(1):662

［6］鄭曉珂，張鑫，王小蘭，等．卷柏提取物改善高脂血癥大鼠肝臟脂肪變及肝臟保護作用的實驗研究［J］．中國新藥雜志，2010，19(14):1216

［7］鄭曉珂，寧桃麗，王小蘭，等．卷柏總黃酮及穗花杉雙黃酮對人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖及VEGF 蛋白表達的影響［J］．中國藥學(xué)雜志，2011，46(13):998

［8］鄭曉珂，陳克宇，侯慶偉，等．卷柏提取物對去卵巢大鼠骨代謝的影響［J］．中草藥，2010，41(10):1686

［9］王小蘭，鄭曉珂，魏悅，等．卷柏提取物對去勢大鼠股骨中羥脯氨酸含量的影響［J］．中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(10):132

［10］鄭曉珂，侯慶偉，李民，等．卷柏總黃酮提取工藝的研究［J］．中國新藥雜志，2011，20(16):1509

［11］陳美琳，李嚴．高貴波．卷柏復(fù)方的中樞抑制作用［J］．中成藥研究，1987(11):45