田艷芹

MCP-1、COX-2、PPARy聯(lián)合HPV檢測(cè)在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的應(yīng)用

田艷芹

目的 探討單核細(xì)胞趨化因子(MCP-1)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)、過氧化物酶增殖物激活受體y(PPARy)、人類乳頭瘤病毒(HPV)在宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)中的應(yīng)用。方法 用原位雜交技術(shù)檢測(cè)HPV(主要是HR-HPV)及免疫組化法檢測(cè)MPC-1、COX-2、PPARy在27例宮頸癌(CC)、36例低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(LSIL)、46例高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(HSIL)、 40例對(duì)照組(AA)陽性表達(dá)情況。結(jié)果 ①M(fèi)CP-1在AA、LSIL、HSIL中陽性率分別為77.50%、30.56%、6.52%, 相互間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；②COX-2、PPARy在AA、LSIL、HSIL、CC中陽性率分別為0、47.22%、84.78%、92.59%和0、47.22%、60.87%、77.78%；HR-HPV在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為0、 44.44%、76.09%、92.59%。對(duì)照組與各組間陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 MCP-1、COX-2、PPARy 在宮頸早期病變的發(fā)生發(fā)展中起重要作用, MCP-1、COX-2、PPARy聯(lián)合HPV檢測(cè)可作為準(zhǔn)確診斷CIN的指標(biāo)。

免疫組化；單核細(xì)胞趨化因子；環(huán)氧合酶-2；過氧化物酶增殖物激活受體y；原位雜交；人類乳頭瘤病毒；宮頸上皮內(nèi)瘤變

宮頸癌是一種常見的婦科腫瘤, 全世界每年約有50萬新發(fā)病例, 20多萬人死亡。據(jù)統(tǒng)計(jì)浸潤(rùn)性宮頸癌5年的生存率僅為67%, 早期宮頸癌為90%, LSIL少部分可消退, 只有極少數(shù)沒有積極治療才發(fā)展為癌, 以上階段屬于可逆轉(zhuǎn)期。HSIL必須立即手術(shù)治療, 此期屬不可逆轉(zhuǎn)的。本研究采用免疫組織化學(xué)和原位雜交分別檢測(cè)宮頸組織中MCP-1、COX-2、PPARy 蛋白表達(dá)水平和 HR-HPV 感染情況, 并探討各指標(biāo)間的相關(guān)性, 以期為SIL的預(yù)防和靶向治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集棗莊礦業(yè)集團(tuán)棗莊醫(yī)院病理科2010年6月～2014年6月宮頸癌27例、LSIL36例、HSIL46例, 對(duì)照組40例, 所有病例均為非孕期有性生活女性, 年齡21～77歲, 平均年齡49歲。病理及臨床資料完整。一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本切片的制備及診斷 所有標(biāo)本均用10%甲醛固定、脫水、石蠟包埋后制片, 最終有兩名資歷深厚的醫(yī)師判斷結(jié)果。

1.2.2 免疫組織 MCP-1、COX-2為兔抗人單克隆抗體, PPARy兔抗人多克隆抗體；SP染色試劑盒均購自邁新生物技術(shù)公司, 操作嚴(yán)格按照說明進(jìn)行。HR- HPV均用相應(yīng)編號(hào)的探針及通用型檢測(cè)試劑盒, 均購自美國Digene公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MCP-1在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為77.50%、30.56%、6.52%、0, MCP-1在CC癌腫內(nèi)部雖未見陽性表達(dá), 但在癌細(xì)胞間質(zhì)中可見陽性表達(dá)。MCP-1在AA、LSIL、HSIL中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.2 COX-2在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為0、47.22%、84.78%、92.59%。COX-2在CC中的表達(dá)與HSIL相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；HSIL與LSIL差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.3 PPARy在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為0、47.22%、60.87%、77.78%。PPARy在LSIL、HSIL及CC組均有較強(qiáng)陽性表達(dá), 陽性表達(dá)部位主要定位于細(xì)胞核, 但表達(dá)強(qiáng)度不同。此外, PPARy在HSIL和CC周邊部可見到染色程度比癌細(xì)胞更明顯的間質(zhì)表達(dá), PPARy陽性細(xì)胞在子宮頸癌中呈彌散分布, 在細(xì)胞外基質(zhì)中呈灶狀分布。

2.4 HR-HPV在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為0、44.44%、76.09%、92.59%。HR-HPV在LSIL、HSIL和CC陽性率隨著級(jí)別升高陽性表達(dá)率升高(P＜0.01)。

3 討論

CIN是一組與浸潤(rùn)性宮頸癌密切相關(guān)的癌前期病變的統(tǒng)稱, 病因?qū)W研究顯示, 人類乳頭瘤病毒HPV感染, 尤其是HR- HPV持續(xù)感染是CIN發(fā)生發(fā)展的必要條件［1］,未感染HR-HPV者幾乎不會(huì)發(fā)生宮頸癌［2］。由于CIN發(fā)展形成CC的病程較長(zhǎng), 且各類CIN臨床處理方法不一, LSIL患者一般采取定期隨訪, HSIL患者一般采取Leep術(shù)。多年來, 雖說CIN似乎有明確的組織學(xué)分級(jí), 但僅根據(jù)HE切片對(duì)LSIL及HSIL作出明確分級(jí), 不同病理醫(yī)師在診斷時(shí)常存在爭(zhēng)議。隨著分子學(xué)的發(fā)展, 證明有些病毒感染的假象容易誤診, 導(dǎo)致CIN診斷不足及過診斷, 因此尋找相對(duì)準(zhǔn)確診斷CIN的新指標(biāo)是近年分子學(xué)研究熱點(diǎn)之一。

近年來的研究表明MCP-1、COX-2、PPARy在CIN發(fā)生及發(fā)展中起著非常重要的作用。

3.1 COX- 2 為誘導(dǎo)型表達(dá)基因。HR- HPV原癌蛋白與細(xì)胞內(nèi)腫瘤抑制蛋白 P53 結(jié)合, 導(dǎo)致 P53 降解和失活, P53的降解和失活可增強(qiáng)細(xì)胞 COX- 2 基因表達(dá)［3］。促使體內(nèi)c-myb基因表達(dá)增加, 從而進(jìn)一步促進(jìn)COX-2基因高表達(dá)［4］。本研究發(fā)現(xiàn) COX- 2 在LSIL相對(duì)AA組中的高表達(dá) , 說明COX-2增高可能是上皮內(nèi)瘤變過程中的早期事件。

3.2 PPARy屬于Ⅱ型核激素受體, 通過增加體內(nèi)15-脂氧和酶活性促進(jìn)脂肪酸轉(zhuǎn)變?yōu)轭愂轭愇镔|(zhì), 進(jìn)而提高PPARy介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活作用［5］, PPARy當(dāng)其被配體激活后, 激動(dòng)劑可促進(jìn)P53的表達(dá), 抑制細(xì)胞增殖, 導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡和分化。PPARy過表達(dá)在宮頸病變的早期事件中就已經(jīng)體現(xiàn), LSIL主要在細(xì)胞漿；HSIL部分在細(xì)胞漿, 少量在細(xì)胞核；CC表達(dá)主要體現(xiàn)在細(xì)胞核, 同時(shí)對(duì)CC周邊細(xì)胞外基質(zhì)進(jìn)行了觀察, 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外基質(zhì)中的PPARy的表達(dá)要比正常對(duì)照組中的表達(dá)高的多(P＜0.01)。臨床上檢測(cè)PPARy有助于SIL診斷。

3.3 MCP-1是體內(nèi)免疫、炎癥調(diào)節(jié)因子, 在HR-HPV感染導(dǎo)致的宮頸病變中起著重要的作用, 機(jī)體上皮細(xì)胞感染HR-HPV后, 抑癌基因P53功能受到抑制, 病毒DNA發(fā)生某種形式的斷裂, 細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化。Hacke等［6］用原位雜交法表明下調(diào)MCP-1基因表達(dá), 可引起宮頸上皮細(xì)胞免疫耐受,從而導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生。由研究可見MCP-1對(duì)宮頸癌的早期診斷有一定的作用。

MCP-1、COX-2、PPARy在CIN中的相互作用。COX-2、MCP-1在宮頸病變的表達(dá)中呈負(fù)相關(guān)； COX-2 和PPARy在宮頸病變中具有協(xié)同作用, COX-2是PPARy天然配體合成過程中的重要限速酶。COX-2在子宮頸癌的表達(dá)中起一定的作用, 尤其在宮頸早期病變起重要作用。機(jī)體感染HRHPV后, 可致COX-2、PPARy陽性表達(dá)升高, MCP-1表達(dá)降低。因此, 由HR-HPV感染可警惕宮頸惡性潛能的提示,由HR-HPV感染加COX-2、PPARy免疫表型可以準(zhǔn)確診斷CIN, 因?yàn)镸CP-1與COX-2、PPARy、HR-HPV在宮頸病變中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān), MCP-1陽性分析可以明確宮頸早期病變的程度, 準(zhǔn)確區(qū)分LSIL、HSIL, 從而指導(dǎo)臨床采取有效治療措施, 防止過診斷及診斷不足, 為臨床提供準(zhǔn)確的靶向治療。

［1］ 郭恩覃.現(xiàn)代整形外科學(xué).北京：人民軍醫(yī)出版社, 2000:367.

［2］ 李亞里.HPV感染與宮頸癌前病變的臨床研究進(jìn)展.武警醫(yī)院, 2012,23(2):93-96.

［3］ Haensen G, Krause U, Becker A, et al.Tumor hypoxia, p53, and prog- nosis in cervical cancers.Int J Radiation Oncology Biol Phys, 2001, 50(4):865-872.

［4］ Ip SM, Huang TG, Yeung SWB, et al.PRb- expressing adenovirus Ad5-Rb attenuates the p53-induced apoptosis in cervical cancer cell lines.European J Cancer, 2001, 37(18):2475-2483.

［5］ Willson TM,Wahli W.Peroxisome proliferators-activate receptor agonists.Curr Opin Chen Biol,1997(1):235-241.

［6］ Hacke K, Rincon-Orozco B, Buchwalter G, et al.Regulation of MCP-1chemokine transcription by P53.Mol Cancer, 2010(20):69-82.

Application of MCP-1, COX-2, PPARy combined with HPV detection in cervical intraepithelial neoplasia

TIAN Yan-qin.
Department of Pathology, Zaozhuang Hospital of Zaozhuang mining group, Zaozhuang 277101, China

Objective To explore the application of monocyte chemotactic protein (MCP-1), cyclooxygenase 2 (COX-2), peroxisome proliferator activated receptor y (PPARy), and human papillomavirus (HPV) in cervical intraepithelial neoplasia (CIN).Methods In-situ hybridization technique and immunohistochemical method were applied to detect the positive expressions of HPV (mainly HR-HPV), MCP-1, COX-2, and PPARy in 27 cervical cancer (CC) cases, 36 low-grade squamous intraepithelial lesion (LSIL) cases, 46 high-grade squamous intraepithelial lesion, and 40 cases of control group (AA).Results ① The positive rates of MCP-1 in AA, LSIL, and HSIL were 77.50%, 30.56%, and 6.52% respectively, and the differences between them had statistical significance (P＜0.01).② The positive rates of COX-2 in AA, LSIL, HSIL, and CC were 0, 47.22%, 84.78%, and 92.59%.The positive rates of PPARy in AA, LSIL, HSIL, and CC were 0, 47.22%, 60.87%, and 77.78%.The positive rates of HR-HPV in AA, LSIL, HSIL, and CC were 0, 44.44%, 76.09%, 92.59%.There were statistically significant differences of the positive expressions between the control group and other groups (P＜0.01).Conclusion MCP-1, COX-2, and PPARy play important roles in the occurrence and development of early cervical lesions, and the combination detection of MCP-1, COX-2, PPARy, and HPV can be applied as a precise indicator for diagnosing CIN.

Immunohistochemistry; Monocyte chemotactic protein; Cyclooxygenase 2; Peroxisome proliferator activated receptor y; In-situ hybridization; HPV; Cervical intraepithelial neoplasia

2014-08-26］

277101 棗莊礦業(yè)集團(tuán)棗莊醫(yī)院病理科